血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳【精品推荐-doc】
实验二 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
[目的]
1、 掌握电泳的基本原理
2、 掌握电泳的基本操作
[原理]
醋酸纤维薄膜电泳(CAME)是以醋酸纤维薄膜(CAM)作支持物的一种区带电泳技术，将血清样品点样于醋纤膜上，在pH8(6的缓冲液中电泳时，血清蛋白质均带负电荷移向正极。由于血清中各蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，加之分子大小和形状各异，因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。电泳后，CAM经染色和漂洗，可清晰呈现清蛋白、α、1α、β、γ—球蛋白5条区带，比色即可计算出血清各蛋白组分的相对百分数。2
[器材]
1(醋酸纤维薄膜(8X2mm)
2(点样器
3(染色皿，漂洗器，镊子
4(722型分光光度计
5(电泳仪:直流电源整流器，水平电泳槽
[试剂]
1(巴比妥缓冲液(pH8.6 I=0.06):取巴比妥钠12.76g，巴比妥1.66g，加蒸馏水加热溶
解后稀释至1升。
2(氨基黑10B染色液:取氨基黑10B0(5g，甲醇50ml，冰醋酸lOml，加水至100ml。
3(漂洗液:95,乙醇45ml、冰醋酸5ml、蒸馏水50ml
4(洗脱液;0(4mol,LNaOH
[操作]
l(将电泳槽置于水平平台上。将缓冲液注入电泳槽中，两边的电极槽缓冲液的高度要
在同一平面。
2(在距醋纤膜一端1.5cm用铅笔作好标记，然后将薄膜放进缓冲液中，湿润速度按膜
吸收缓冲液的快慢而定，应让其自然浸润。
(将充分浸透(指膜上没有白色斑痕)的薄膜取出，用滤纸吸去膜上过多的缓冲液。3
4(用加样器蘸取血清(约10-20p1)，垂直印在CAM粗糙面的加样线上，待样品全部渗
入薄膜内后，移开点样器。
(电泳 5
? 加样后，将薄膜条架于支架两端，点样面朝下，点样侧置于负极端，膜两侧分别搭
上纱布，纱布一端垂入缓冲液中。薄膜应位正，平直无弯曲，加上槽盖平衡5分钟
后通电电泳。
(2) 正确连接电泳槽与电泳仪对应的正负极，开启电源通电。电压10—15/cm膜总宽。
电泳40~60分钟，泳动距离约达3.5~4.0cm时即可断电。
6(染色
电泳完毕后断电，用镊子取出薄膜条投入染液5-10分钟，染色过程中不时轻轻晃
动染色皿，使染色充分。
7(漂洗
从染液中取出薄膜条并尽量沥去染液，投入漂洗皿中反复漂洗，直至背景漂净为止。
此时清晰可见5条色带，待干。
8(定量
a(洗脱比色:将各蛋白质区带仔细剪下，分置各试管中，另从空白背景剪块平均大
小的膜条置于空白管中。各管加入0(4mol,lNaOH4ml,于37?水浴20分钟(不
时振荡)，待颜色脱净即用波长620nm比色，以空白管调零读m各管吸光度。
b(计算:
吸光度总和(T)=A+α1+α2+β+γ(吸光度)
血清蛋白组分的相对百分数: A % = A/T*100% α% = α1/T*100% 1
α% = α2/T*100% 2
β % = β%/T*100% γ % = γ%/T*100%
本文档为【血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳【精品推荐-doc】】，请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑，
图片更改请在作品中右键图片并更换，文字修改请直接点击文字进行修改，也可以新增和删除文档中的内容。
该文档来自用户分享，如有侵权行为请发邮件ishare@vip.sina.com联系网站客服，我们会及时删除。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生，若发现您的权利被侵害，请联系客服邮件isharekefu@iask.cn，我们尽快处理。
本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权，请谨慎使用。
网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传，仅限个人学习分享使用，禁止用于任何广告和商用目的。
浙公网安备 33021202002483