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高压蒸汽灭菌法
高压蒸汽灭菌法又称湿热灭菌，它的原理是利用高压来提高蒸汽温度，达到灭菌的目的，其操作步骤如下:
(1)关好排水阀门放入清水至标度为止，注意水量一定要加足，否则容易造成事故。
(2)将要灭菌的培养基、灭菌水等装入铁丝笼中，并用牛皮纸盖好后放入灭菌锅中，关上器盖，旋紧螺旋时，先将每个螺旋旋转到一定程度(不要太紧)，然后再旋紧相对的两个螺旋，以达到平衡旋紧，否则易造成漏气，达不到彻底灭菌的目的。
(3)通电加温，同时打开排气活门，排尽锅内的空气，即活门冲出的全部是蒸气时则表示彻底，此时可关闭排气活门，如果过早关闭活门，排气不彻底，也达不到彻底灭菌的目的。通常当压力表指针升至5磅时，打开排气活门放气，降至零点，再关闭活门。
(4)压力表的指针上升时，锅内温度也逐渐升高，当压力表指针升至15磅时，蒸气温度相当于120?—121?(等于一个大气压)，此时开始计算灭菌时间，控制热源，使处于15磅压力保持30分钟，即能达到完全灭菌的目的，然后停止加温。
(5)稍微打开一点排气活门，使锅内蒸气缓慢排除，然后逐渐开大活门，气压徐徐下降，注意勿使排气过快，否则会使锅内的培养基沸腾而冲脱或沾湿棉花塞，但排气太慢又使培养基在锅内，受高温处理时间过长，这样对培养基也是不利的。一般从排气到打开锅盖以10分钟左右为好。
(6)当压力表指针降到零、锅内蒸气完全排尽时，打开锅盖取出培养基，如需制备固体斜面培养基时，则应趁热将试管斜放在桌上，上面盖上报纸以免落灰尘，冷却后便可收起。
(7)最后将高压灭菌器内的剩余水排出。
(8)抽取上述灭菌的培养基，放入25?温箱中，48小时后不见杂菌生出，便证明培养基已达到灭菌目的，可以使用。
此外，有些培养基在经高压灭菌后，其营养成分容易分解而失去使用价值，此时可采用间歇蒸气灭菌法，即将培养基放入高压灭菌器内，加热至100?，保持1小时，每天灭菌一次，连续进行三次，即可达到灭菌的目的，又不至使营养物质分解。
1(首先将内层锅取出～再向外层锅内加入适量的水～使水面与三角搁架相平为宜。
切勿忘记加水～同时水量不可过少～以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。
2(放回内层锅～并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤～以免防碍蒸气流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与锅壁接触～以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
3(加盖～并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓～使螺栓松紧一致～勿使漏气。
4(用电炉或煤气加热～并同时打开排气阀～使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后～关上排气阀～让锅内的温度随蒸气压力增加到逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时～控制热源～维持压力至所需时间。本实验用0.1Mpa～121.5?～20min灭菌。
灭菌的主要因素是温度而不是压力。因此锅内冷空气必须完全排尽后～才能关上排气阀～维持所需压力。
5(灭菌所需时间到后～切断电源或关闭煤气～让灭菌锅内温度自然下降～当压力表的压力降至“0”时～打开排气阀～旋松螺栓～打开盖子～取出灭菌物品。
压力一定要降到“0”时～才能打开排气阀～开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降～使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口～造成棉塞沾染培养基而发生污染～甚至灼伤操作者。
6(将取出的灭菌培养基～需摆斜面的则摆成斜面～然后放入37?温箱培养24h～经检查若无杂菌生长～即可待用。
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