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凝集性生长和非凝集性生长人毛乳头细胞线粒体的结构及膜电位比较.doc

凝集性生长和非凝集性生长人毛乳头细胞线粒体的结构及膜电位比较

肖恩鑫
2017-12-29 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《凝集性生长和非凝集性生长人毛乳头细胞线粒体的结构及膜电位比较doc》,可适用于综合领域

凝集性生长和非凝集性生长人毛乳头细胞线粒体的结构及膜电位比较凝集性生长和非凝集性生长人毛乳头细胞线粒体的结构及膜电位比较中华皮肤科杂志年月第卷第JtJChinJDermatol,July,Vol,No凝集性生长和非凝集性生长人毛乳头细胞线粒体的结构及膜电位比较杨斌郝飞杨希川杨卫兵钟白玉唐书谦【摘要】目的比较凝集性生长和非凝集性生长人毛囊毛乳头细胞(DPC)的线粒体数量,分布,结构和功能特点方法采用二步酶消化法分离人毛囊毛乳头后,体外培养DPC利用还原型线粒体特异性荧光探针MitoTrackerRedCMHXms,结合激光扫描共聚焦显微镜和透射电镜观察两种不同生长状态DPC线粒体的分布,数量及结构特征利用四氯四乙基苯并咪唑基羰花青碘化物(Jc)检测线粒体膜电位结果体外培养DPC生长良好与非凝集性生长DPC相比,凝集性生长DPC线粒体数量较多,整个胞浆内可见且集中分布在粗面内质网附近,线粒体外形较不规则,嵴较发达,线粒体膜电位明显较高结论凝集性生长DPC和非凝集性生长DPC的线粒体数量,分布,结构和功能不同,说明两者在能量消耗,细胞代谢及蛋白质合成功能方面存在差异【关键词】毛囊线粒体膜电位凝集性生长ComparativestudyOilstructureandmembranepotenfiA~ofmitochondriainculturedhumandermalpapillacellsunderaggregativeandnonaggregativeconditionsGBin,DGXichuan,YANGWeibing,ZHoNGBaiyu,TANGShuqian*DepartmentofDermatology,SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedical(励versify,Chongqing,China【Abstract】ObjectiveToobservethenumber,distribution,structureandfunctionofmitochondriainculturedhumandermalpapillacells(DPCs)underaggregativeandnonaggregativeconditions,MethodsDPCswereseparatedfromhumanhairfolliclesbytwost印enzymaticdigestionandculturedinDMEMmediumMitochondrionselectivestainaserscanningconfocalmicroscopyandtransmissionelectronmicroscopywereusedtoobservethenumber,distributionandstructureofmitochondriaMitochondriamembranepotential(A)wasdetectedby,,,'tetrachlorol,l,,一tetraethylbenzimidazolylcarbocyanineiodide(JC)ResultsDPCsgrewwellinthecultureComp~edwiththeDPCswithnonaggregativebehavior,thosewithaggregativebehaviorhadmoremitochondria,whichwerevisiblethroughoutthecytoplasmandconcentratedneartheroughendoplasmicreticulum,withirregularshape,welldevelopedcristaeandhighermembranepotentialsConclusionsThenumber,distribution,structureandfunctionofmitochondriaaredifierentbetweentheDPCsunderaggregativeconditionandthoseundernonaggregativecondition,whichsuggeststherearedifferencesinenergyconsumption,cellmetabolismandproteinsynthesisbetweenthetwoconditionsofDPCs【Keywords】HairfollicleMitochondriaMembranepotentialsAggregativebehavior毛囊基底部的毛乳头细胞(dermalpapillacells,DPC)在体内外均可呈凝集性生长且凝集性生长状态与其诱导毛囊形成和再生密切相关…凝集性生长DPC具有在体内外诱导毛囊形成的能力,而非凝集性生长的DPC则失去此能力宋志强等建立了凝集性生长状态与非凝集性生长状态下DPC差异表达基因cDNA文库,发现了多个与线粒体结构基金项目:国家自然科学基金资助项目()重庆市自然科学基金(csTcoBB)年中华医学会一欧莱雅中国人健康皮肤研究项目作者单位:重庆,第三军医大学西南医院皮肤科杨斌(现在广州军区武汉总医院皮肤科工作,),郝飞,杨希川,杨卫兵,钟白玉,唐书谦通讯作者:郝飞,email:haofeimailtmmucorfcii论着或功能有关的基因在不同生长状态的毛乳头细胞中呈明显差异表达本实验拟通过荧光标记结合激光共聚焦显微镜及透射电镜等技术方法观察凝集性生长和非凝集性生长DPC线粒体数量,分布,结构和功能的特点为研究不同生长状态下DPC生物学功能改变的机制提供实验基础材料与方法主要仪器和试剂:激光扫描共聚焦显微镜LeicaTCSSSP型(德国)透射电镜TECNAI型(日本)MitoTrackerRedCMHXRos线粒体探针和四氯四乙基苯并咪唑基羰花青碘化物(Jcl,MolecularProbe公司)完全培养基:以低糖DMEM捧墟(lyrlrle公州)"耻硎加人F成分He)(nlHll,lI)l一件氰呲J(I)靠#链瑶采(扦…【】t)iJ,'Jj船I,l『jIc,世滤际后分装,使川r}ijI人小牛清(Ii)至浓噬由IDI,f''离培井:采LH我科建『c』一步黼消化法"分离巳孔接利r(I培养瓶特堋f胞删l按常地方,址f々代培养锖I代取批悼外培昨的凝壤一J}I:怕吼fllt(,hJ艇集,}ft的第ll代川,f进fr垃硼究墟lU镜蜞:接种细l埘J(】L土抨养帆戢删数K期K急睦好的知f胞羟J出嗨消f七IIly,洗涤Irmi~离心l……忻戊醛l州宅t傲锇酸f=Ih:r,(】啊采州丙眦水m树"包近利f乜钳I址寮淅qi幢线牲谁匕:墩埘数IK圳lf胞持种J盖破片许坫荐堆加八MiI,Tra,'kllflXI(线粑f水引的伞埔挥艟(终洙世illnuI)nK祭什l,f『|l…:Ifi"川充令培捧堆棒按缸裁澉韭行洗涤:舜培养硅沆lj剞定lmin:l,BS洗涤缓冲mm时片开n』壤焦激此镜F枧察:澈发圯为"绿包澈此垃射圯为llpll}r色此地I乜倚洲战粒体l乜f():取刊牧』乜接制J箍坡HI卉培养堪川凡oI一I的培养长,:堵捧精孵育omin:下:培养罐漂洗:PBS漂洗俄放八澉圯』聚攥扣捕荧光!微镜下秕察JCl种碳氰化台物凳荧光染料在细胞{,聚合体手J体阀种物删形式存在,分"处J不同荧光发射峰f腆水伸时半蛭以单膨式存仵谳艟波长为l呈绿乜黄jt当麒电位水平较高nlf,主《』^壤物J仔红乜荧,微艟被R为r心f洲定细胞的绿乜和红包地)度,枰I科定量载粉悱幢lL佗水一I结粜分离培养IH:E乳头接种埔养临l后第u"有DIC从己乳头缘lK,ql(罔In):婿自,d,I)PC长较怏fl】凹心生胜利状士II'LnJ:巨乳逐瀚i失J啄来的刚收成川均细胞生K致僻区:DPC继续{乏,近融合町较多域绷胞珊多层化,PIhI艇氍生K(罔lI)绎映陴消化井传fqI),《ll不n数小)rJ,j并脞玎f{渐m新俪向船谁I}t:随荇传代次数增凝集H,t现蒙渐『lJJliJlf~t构凝数日碱少戏体积坐小忙一qft后J甚半小…舰凝集班瓤,类似培诈I纤蜘胞(I一)透射电镜观察l匕果:艇臻性lK怕i】为一ff】形城多角『=细胞梭不规则船也匝常包瞬目lktEI胞Ia…I:ME,越K…lxI'}III,(:g化l!艇,KlxlI【J)fc:":}警Jl:眦F#胞什frIm嚼:|'{KDFC哇牝体l:lIjN蚺胞悻E~Jffl常,x(m}I胞托}臻m蚪树请晰【xfJO批『l}缱牲悻#触仆c×)d:E蝴蚶《皓滴晰cxll',ff惜n蛐"忱{目lI…Ei#il~vi』【a,till咆『q线牝体较F富多采集分崎鲇缃清断肇长IPC细胞iJ,iI,量线粒怀内厩刚舟尔壤复伴昔线粒怍多散往舒(II)(线特悱乜舭察:共聚焦撒做镜I韶监llJ【线粒怵表皿为乜一划K或线状凝集忡I长岫DP纯粒怍数量转少多靠近细胞周边邮(罔I州疑if托帕IPC线牡f奉密壤多澈矗悭胞fl,)JcI色榆洲线粒f啦膜电似的政变:澈圯j聚熊捕皿微韫荧比愉删聚凝雏性KI)PC线{休绿包佚)f均慢嗟:对f『『为】耋也荧光,I均幔世{=训俏nI红绿健光强度IL为IIi幔诃酋激发州细胞黄绿色荧光:Ifl,I处H凝整生i状态时线粒悼绿色能也'IqSj蛳J业{I|划髓力I,红色荧光平均度棚埘忾却红,绿荧圯强度卜匕灯oIIoi赫壤,Kll:,绿荧度=帽比l垌f,降(I='(o)设馏道澈发叫细胞删单弥敞n绿佚)罔)讨论外地柞'}J况,雠集IqKtlPC可转变如凝集LK…凝集悱K可转业为凝集K小实验tL{"ZI矗f细胞线粒傩的特,lf凝袅长IWC跤粒悱的散址丹I结构集性长)小同:而打戡址多骼个咆浆iI可见且多氍if,分在I【{llqM网附线耗怫外肥较不桃嵴车尘为发逃j外乖填l王发耻凝集H长DP('的线粒体膜电位世明I凝桀i!k,卜长l'l"JDPC线粒休I电位m践柠休膜内外存,f的质千栉度产线z伸腆电埘构仃:为线牲体完成僦化磷酸化旧提供丁珥畹一^噶外苛质子浓度他{导乜rB够滑呼l艟链f递,j一疗l尊i南港度的质于啊浓度差,J膜内圹敞Ii~释放的咀势能为ArP的『f成挺供能而J战粒体Ilill他是压使线牲傩功能帕亟露指杯凝,I三KI)PC邗卜凝集I吐K)I,c一线体膜l伸n蕾一步从生物学功能f,lJ一皆线粒悱之间自堆抖洲旭线牝体结恂厦功能柏不同l主映r细胞机能状态岫,有诱导毛睡形成能力的凝壤Kl】PC能醚代l削为}脏台成功能型』=『而寝细胞盛地合成蛋'i质I能北『门贶往究巾矸嗍凝蜒悱,h长DP('If台成分泌砸为f箭ff,j细胞外琏腰I圳咆lq子有关jbl,'P:)Lli』尚待进,qliID'~不f司生K状态IPC线粗体散舒布站蜘和功能构小hl】i均说叫凝集tI)'I非凝集'I:SLKI)PC在能量消牦ft程度【上垃细胞蛋【质合成功能在差译结台lI往究北ff』c凡证集牛Kl】际具有li诱导屯瘫形成增碹较{心仆泌较多(~{Jtlll胞外基『=珏和tiltlJIl『弭F等特点外JT察到线牲体结构fll功能凝蟾DIC存明皿苷研种fitl胞线粒体结掏御功能阳蔗肆址两自q一},}亦有可能恂戍r长状态DT,c生物学丧功能荐异f结硅训选此芷ur能与I):畴导屯蛮H荨战f勺能J存存定羌,提小住临床脱发性痰痫治疗时廊露筛选向接怍刚于线粒体自药物并鹿每虑从线牲体m』羹提高毛囊DPC诱导屯螳形成々能力参考文黼IMulsttz~kiTyord~…KRlchntv【】nlaeInIndnnand胛哪!lpn…urhnlTLbllideswullrtdRepEll|Ri盎腻址口m津*DPC集J时坍导E畦恂『I舱打H蟛H嗡kP推::【I一IIm蚌E,啪精I『E乳fill【啦"'IKg表达…口口谴('折巾m}:}:II忡},*J帚I一步牌fI离^止E乳,慨I"土(J:f洋郴E神第什J捧时悖心tl*自自,f:的响ii#慢趺志B:(精:{)~I

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