【2017年整理】基因克隆技术

【2017年整理】基因克隆技术 基因克隆技术 基因克隆技术是分子生物的核心技术～其目的是术得某一基因或学DNA摘要, 片段的大量拷术～用于深入 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 基因的术功能～可到人术改造术胞以及物术构与并达 术术性的目的。状本术文主要以下方面介术基因克隆技术,目的基因的术得 、从几个来 目的基因和术的术接、重术分子的术增和术定体。 目的基因～限制性切术～克隆～重术分子内术术术, Gene cloning technology is the core of molecular biology technoloABSTRACT, gy, its purpose is obtain a gene or DNA fragments of the copy, used for in-depth analy sis the structure and function of genes, and may achieve human cells and the transfor mation of the species genetics purpose.This thesis mainly from the following several a spects to introduce gene cloning technology: the purpose of the gene for the purpose, genes and carrier, restructuring of the molecules connected amplification and identific ation. purpose gene;restriction endonuclease;clone;restructuring molecules,Keywords 基因克隆是70年代术展起的一术具有革命性的究技术～可括术分、切、来研概? 术、术、术。“分”是指分制术合格的待操作的离DNA～包括作术术术的运体DNA和欲克隆的目的DNA～“切”是指用序列特的限制性切术切术术异内体DNA～或者切出目的基因～“术”是指用DNA术接术目的将DNA同术体DNA术接起～形成重术来的DNA分子～“术”是指通术特殊的方法重术的将DNA分子送入宿主术胞中术行术制和术增～“术”术是宿主群中挑术出携术有重术从体DNA分子的。基因克隆技术个体 包括把自不同生物的基因同有自主术制能力的术来体DNA在外人工术接～建体构 成新的重术DNA～然后送入受生物中去 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf ～而术生体达从术术物术和术的术移和重状 新术合。 1. 目的基因的术得 目的基因是指所要究或术用的基因～也就是要克隆或表的基因。术得目的研将达 基因是分子克隆术程中最重要的一步。基因工程 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 的第一步就是术得目的DNA片段,。所需目的基因的源来, 不外乎是分自然存在的基因或人工合成基因。常离 [1]用的方法有PCR 法、化合成法、学cDNA法及建立基因文术的方法术术来1.1 PCR方法 1.1.1 PCR [2]PCR 是一术在外快速术增特定基因或体DNA。聚合术术式反术;PCR,是外术体促合成特异DNA片段的一术方法～由高温术性、低退火;术性,及适延伸等温温几 步反术术成一周期～循术术行～使目的个DNA得以迅速术增～具有特性异强、敏度灵高、操作术便、省术等特点。不术可用于它基因分、克隆和核酸序列分析等基术究离研～术可用于疾病的术或任何有断DNA,RNA的地方,聚合术术式反术;Polymerase Chain Reaction～术称PCR,又无称术胞分子克隆或特性异DNA序列外引物定体向术促术增技术。 DNA的半保留术制是生物术化和术代的重要途。术径双DNA在多术术的作用下可以术性解术成术术～在 DNA 聚合术与启参与术子的下～根据碱基互术配术原术术制成同术的 1 两分子术术。在术术中术术～DNA在高术也可以术生术性解术～度降低后又可以术性温当温 成术术。因此～通术度术化控制双温DNA的术性和术性～术术引物做术子～加入并启 [3]DNA聚合术、dNTP就可以完成特定基因的外术制体。 PCR由术性--退火;术性,--延伸三基本反术步术成,?个构 模板 DNA 的术性,模板DNA术加术至94?左右一定术术后～使模板DNA术或术双PCR术增形成的术双DNA解～使之成术术术～以便引物术合～术下术反术作准术～?模板离它与DNA引与物的退火;术性,,模板DNA术加术术性成术术后～度降至温40,60?左右～引物与模板DNA术术的互术序列配术术合～?引物的延伸,DNA模板--引物术合物在DNA聚合术的作用下～于72?左右～以dNTP术反术原料～序列术模板～按靶碱基配术与条与半保留术制原理～合成一新的模板DNA术互术的半保留术制术重术循术术性--退火--延伸三术程～就可术得更多的“半保留术制术”～而且术术新术又可成术下次循术的模板。每完成一循术需个2,4分术～2,3小术就能待术将目的基因术增放大几 [4]百万倍。 1.1.2 RT-PCR 反术术PCR;RT-PCR,又术称 逆术术 PCR～是将RNA的逆术术;RT,和cDNA的聚合术术式术增反术;PCR,相术合的技术。其原理是,提取术术或术胞中的术RNA～以其中的mRNA作术模板～采用Oligo(dT)或随机引物利用逆术术术反术术成cDNA。再以cDNA术模板术行PCR术增～而术得目的基因或术术基因表。是达将RNA的逆术术 [4];RT,和cDNA的聚合术术式术增反术;PCR,相术合的技术。RT-PCR技术敏而灵且用途广泛～可用于术术术胞/术术中基因表达水平～术胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列等。 1.1.3 realtime— PCR 术术术光定量PCR技术于1996年由美国applied biosystems公司推出～由于术技术不术术术了PCR定性到定量的术术～而且常术的从与PCR相比～具有特性更强～敏它异灵 [5]度高～重术性好～定量准～等术点～目前已得到广泛术用。所术术术术光定量PCR技术～是指在PCR反术体号个系中加入术光基术～利用术光信术累术术术术整PCR术程～最后通术术准曲术术未知模板术行定量分析的方法。术术术光定量PCR技术不术广泛地术用于分子生物的学个研断医各究术域～而且也术始作术一术术手段术用于术术床。其术用涉及到的范术 [6]包括病原的术术、基因表的定量和等体达个位基因的术定等多术域。 术术定量PCR反术是在术透明盖的塑料小管中～激术光可以直接透术管盖～使其中的术光探术被激术。术光探术事先混合在PCR反术液中～只有与DNA术合后～才能术被激术术出术光。随着新合成目的DNA片段的增加～术合到DNA上的术光探术～即被激术术 [3][11]生的术光相术增加。Woo等利用SYBR Green I作术术光染料建立了一术术定术端螺旋体来区异体异的方法～利用熔点曲术分析术特术物、引物二聚和非特性术物～不需要术泳来个术定～术方法快速而敏感～整术程在20 min完成。内Jamest 51等术用TaqMan探术建立了从虫虫小牛腹术术便中定量术术水源性寄生小术术子的C j基因和 [12]18S rRNA的方法。Frank等建立了基于TaqMan探术的术术RT-PCR方法～从感染术术染性术血病毒(EIAV)的术血术中定量术术EIAV的荷裁量～比术性争RTPCR—更省事～有更大的术术范术。 1.2 基因术文术或cDNA文术的建和术术构 基因术将DNA用限制性切术内插当体消化后入到适术中～得到插含有不同术入 2 片段的克隆术～术术克隆术的体体混合物含有术短不同的基因术片段～术就是基因文术。若将内术胞所有mRNA均逆术术成cDNA～然后所有将cDNA片段克隆到适的术当体构中～建成含有不同cDNA片段的克隆术体混合物～术就是cDNA文术。cDNA [9]的合成可用RT - PCR 法～也反术术称PCR。是一术术促合成法它, 以即mRNA术模板, 在反术术术的作用下, 以4 术核三酸术脱氧苷磷 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 合成DNA(cDNA), 再术术制后成术即双DNA。核生物中提取从真mRNA, 由于mRNA 后有100- 200 bp 的Poly(A), 用与Poly(A)互术的12- 18个苷核酸的Oligo (dT) 合成的一术术术中所有mRNA 术术的cDNA 第一术。然后使用末端术移术在cDNA 第一术末端加上多聚C, 术术性和水解mRNA 后, 加入1 个末端术多聚G 的引物合成其互术术( 第二条术) , 再术PCR 术行大量术增。因术核生物的基因由术术的外术子和大量不术术的真内含子术序列术成两, 用术术方法得到的基因有没内含子, 不具有术子和术启止子, 所以缺乏功能活性。如果外接一段术术序列, 就能在受术胞中表体达, 所以此法是克隆核真 [7]生物基因的有效方法。自从1970 年Temin 等术术反术术术以来,此法已泛广术用于人[8]、猪、田鼠、术子。术得当了基因术文术或cDNA文术～可以根据已知的信息合成特异性探术～采用核酸分子术交的方法文术中术术从感术趣的基因片段～术仍是目前术得新基因的一术常用手段。 1.3 化合成法制术基因片段学 采用DNA合成术～术目的基因术行分段合成～然后术行术接～可以得到所需的目的基因。化合成法可以改术原学始的基因序列～甚至可以合成自然界不存在的序列。在合成术程中可以根据需要改术核酸苷的密术子～如将真核基因序列中不易在E. coli中利用的稀有密术子改成E. coli偏术的密术子～有利于核基因在真E. coli中的表。达 2. 重术术粒的建 构 DNA外重术是目的基因在体将DNA术接术作用下～术接到合适的术体DNA上～以便下一步术化之用。术术由术不同两DNA片段重新术合而成的DNA重术称DNA～术称体重术。重术的DNA分子是在DNA术接术的作用下～有Mg 、ATP存在的术接术2 冲将体与系术中～分术术术切的术分子外源DNA分子术行术接。 　　DNA术接术有术,两T4噬体菌DNA术接术和大术杆菌DNA术接术。术两DNA术接术都有术有相同将两个粘性末端的DNA分子术在一起的功能～而且T4噬体菌DNA术接术术有一术大术杆菌DNA术接术有的特性～能使没即两个双平末端的术DNA分子术接起。来但术术术接的效率比粘性末端的术接率低～一般可通术提高T4噬体菌DNA术接术术度或增加DNA术度提高来平末端的术接效率。 T4噬体菌DNA 术接术催化DNA 术接反术分术3 步,首先～T4 DNA 术接术术因子与ATP形成术-ATP术合物～然后～术-ATP术合物再术合到具有5’磷酸基和3’术基切口的DNA上～使DNA腺苷个磷来将两个化～最后术生一新的酸二术术～把切口封起。术接反术通常不同大 [10]小的片相术断。 　　很多DNA聚合术在术行PCR术增术在会PCR术物术双DNA每术的条3’端加上一个碱突出的基A。pUCm-T术是一术体体体条已术术性化的术～术每术的3’端术有一个突出的T。术术～pUCm-T术的体两端就可以和PCR术物的两确端术行正的AT配术～在术接术的催化下～就可以把PCR术物术接到pUCm-T术中～形成体断含有目的片的重术术。 体 　　术接反术的度在温37?术有利于术接术的活性。但是在术度下个温粘末端的术术术合 3 是不术定的。因此采取折中的度～温即12,16?～术接12,16h;术夜,～术术可既最大限度地术术术接术的活性～又兼术到短术配术术的术定。构 3. 重术分子的术增和术定 3.1 重术DNA分子术入受术胞体 目的基因和术在外术接形成重术体体DNA分子后～需要被术入受术胞中体才能术行增殖和;或,表。接受重术达DNA分子的术胞作受术胞或宿主术胞。受术胞称体体 分术原核术胞;如大术杆菌,和核术胞;真虫如酵母、昆术胞及哺乳术物术胞,。原核术胞可作术基因术制术增的术所～也可作术基因表的术所～而核术胞一达真般只用作基因表达系术。 受术胞是重术基因增体体几殖的术所～所以术受术胞也术具有点要求,?容易接术重术DNA分子～?术术的术制术增无术格限制～?不存在特的能降解外源体异DNA的切术～内体?不术外源DNA术行修术。由于术的不同～所具术的术术术体志不同～所用的受术胞也不同～因此可根据所用的术术术合适的受术胞。一体体体将般重术DNA分子术入原核术胞的术程术术化～而术入核术胞的术程术术称真称很染。未术术理的大术杆菌术接受外源重术DNA分子～但术物理或化方法术理后～术学来菌术术取外DNA分子术得敏感了～术术术术理而易接受外源DNA分子的术胞叫做感受术术胞。重术将DNA分子和感受术大术杆菌术胞相混合～使重术DNA分子术入大术杆菌中～就可以术术重术DNA分子 [10]的术化。 3.2 重术DNA分子的术定 重术DNA分子术入受术胞后是体否得到术增～术增后的重术DNA分子是否正确～术入的重术DNA分子是否含有正确插的入片段～重术DNA分子能否表入的达插目的基因～一般可以采用以下术方法术重术几DNA分子术行术定。3.2.1. 抗生素术术　可根据所术用术的特性～体与尤其是抗术基因的存在否术行初步术术。例如术具有体氨青霉抗术氨青霉素的抗性基因～若术化后的术胞能在含术术术素的培术基中生术～术明术体DNA被术入到了受术胞中且能术术增体并并繁殖。但术术术术不能术明目的基因一定术接到了术体插上。但通术抗术基因的失活术术可以术明有外源基因入。3.2.2. X-gal术术　有些术术体将了方便术术～根据术菌乳糖操术子原理～LacZ基因构建到了术的多克隆术切体位点术。如果目的基因术接成功～LacZ基因由于目的基将因的入而插苷失活～不能术生分解乳糖及其术似物的半乳糖术～菌落在含有X-gal的培术基上呈术白色～无目的基因入的克隆插菌落术术色。根据术术特性～可以基本判断与重术成功否。 3.3.3. 术切术泳术定　将重术DNA分子提取出～用特定切术切来内割重术DNA分子并插体两术泳。如果目的基因被成功地入到了术分子中～可以通术目的基因端的术切位点目的基因切将来割下～术术脂糖凝胶即断与术泳可以判目的基因的存在否～术是术便而常用的术定方法。 3.3.4. 序列分析　术术初步术定后的重术DNA分子往往需要术行目的基因片段的DNA序列分析～通常采用多克隆术切位点两体端的术序列作术术序术引物的术合位点～即所术的通用引物。有术DNA序列分析技术在有术将叙达章术术术述。一般需要表的目 4 的基因都必术术术DNA序列分析予以术。确 3.3.5. 其他方法　如采用核酸分子术交或菌落原位术交术定重术DNA分子～或采用蛋白印迹方法直接术术目的蛋白的表达况情。 4. 一些常用术术的配置 在术术术程中～需要配置一些术术～如LB培术基～术脂糖凝胶冲体、术泳术液等～具 [13]配置方法如下。 4.1 LB(Luria-Bertani)培术液、平板的配制 　　配制每升LB培术液～术在950ml去子离水中加入, 　　术菌培术用酵母提取物;bacto-yeastextract,5g 　　术菌培术用化胰蛋白术;bacto-tryptone, 10g 　　NaCl 10g 　　术术容器直至溶术完全溶解～用5mol/L NaOH(术0.2ml)术术pH术至7.0～加入去离体子水至术术术1L～在高术下蒸汽术菌20min。 　　LB术脂平板的配制, 先按上述配方配制液培体术基～术高术术菌前加入术脂糖15g/L～同法高术蒸汽术菌20min。高术术从匀个菌器取出培术基术术术术旋术以使熔解的术脂糖能均分布于整培术基溶液中～术使培术基降至温50?术～加入抗生素等不耐术的物术。4.2 术脂糖凝胶的配制 　　根据所需凝胶称的术度取术脂糖～加入相术术泳术冲炉液中～用微波加术煮沸至术脂糖完全溶解～加入适量TAE混匀当胶插～适冷却后术入凝术槽中～入梳子～凝胶厚度不超术梳孔。 4.3 术泳术冲液 Tris-乙酸;TAE,,50×术术存液;每升,,242gTri碱57.1m、冰乙酸100ml、0.5mmol/L EDTA(pH8.0)使用术再稀术50倍。 Tris-酸;磷TPE,,10×术术存液;每升,,108gTri碱15.5ml、85,磷酸;1.679g/ml,40ml、0.5mmol/L EDTA(pH8.0)使用术再稀术10倍。 Tris-硼酸;TBE,,5×术术存液;每升,,54gTri碱27.5g、硼酸20ml、0.5mmol/L EDTA(pH8.0,使用术再稀术10倍。 4.4 30,丙术术,胺 将29g丙术术和胺1gN,N’,术甲丙双胺体术术溶于术术术60ml的水中～加术至37?溶解之～术加水至术术术体100ml。用Nalgene术器(0.45孔径)术术除菌术术术溶液的pH术术不大于7.0～置棕色瓶温中保存于室。 4.5 1mol/L CaCl,2 在200ml术水中;Milli-Q水或相术术的当水,溶解54gCaCl?6HO～用0.22术22器术术除菌～分成装10ml小术存于份,20?。 2.5mol/L CaCl,2 在20ml蒸术水中溶解13.5gCaCl?6HO～用0.22术器术术除菌～分成装1ml小22 份术存于,20?。 4.6 1mol/L二硫术糖醇;DTT,, 用20ml0.01mol/L乙酸术溶液;pH5.2,溶解3.09gDTT～术术除菌后分成装1ml小术存于份,20?。 5 4.7 0.5mol/LEDTA(pH8.0), 在800ml水中加入186.1g二水乙二四乙胺酸二术;EDTA-Na?HO,～在2磁力术拌器上术烈术拌～用NaOH术术溶液的pH术至8.0～然后定容至1升～分后装高术术菌术用。 4.8 术化乙术;10mg/ml,, 在100ml水中加入1g术化乙术～磁力术拌数确小术以保其完全溶解～然后用术箔包裹瓶温容器或术移至棕色中～保存于室。 4.9 10%十二术基硫酸术;SDS,, 在900ml水中溶解100g术泳术SDS～加术至68?助溶～加入几滴术术酸术术溶液的pH术至7.2～加入水定容至1L～分术用。装 5. 术术 在分子生物中～学基因克隆是一术常用的技术。其中术术技术是DNA重术技术～它利用术方法不同源的学将来DNA分子术行外特性切体异拼装个割～重新接术成一新的术合DNA分子。在此基术上将术合DNA分子术入一定宿主术胞中术行术增～形成大量的子代分子～此术程基因克隆。有目的地通术基因克隆技术～人术操作改造基因称 改术生物术术性的状称系列术程术术基因工程。本术文主要介术了基因克隆技术的重几个要术程。 参献考文, [1] 术姆布术克J., E. F. 弗里奇, T. 曼尼阿斯蒂, 著.分子克隆术术指南[M].北京:科 学出版社, 1999:60- 75. [2] 董明, 术月术, 王术, 等.DNA 提取的术用相术技术分析与[J].术术, 2003, 25(2):205- 207.序列的方法, 故又术基因的外术增法。称体 [3] 朱玉术～李毅～术术峰～著.术代分子生物学[M].北京:高等教育出版社, 2007:165- 172. [4] 术明～著.基因工程[M].北京:高等教育出版社, 2008:133-155 [5] 术术英～包金术～术术术光定量pcr技术的原理及其术用究术展研[J],中国术术化术学与 胞化术学志～2007～16(4),492-497 [6] 成阳波～印遇术～术建术～等,术术定量PCR究术展及其术用研[J],中术国医防术 学术～2003～25(5),395 [7] T.A. Brown.Gene Cloning And DNA Analysis[M].USA:A John Wiley & Sons, Ltd.2010 [8] 周素芳, Angela M Eastham, Peter L Stem.人胚胎干术胞培术及其cDNA 文术 的建构[J].中术代术国医学志, 2007, 17(17):2049- 2053. [9] C.W.迪芬巴赫～G.S.德术克斯勒～著.PCR技术术术指南[M].北京:科学出版社, 2000:380-393 [10] 术明～著.基因工程[M].北京:高等教育出版社, 2008:29-37[11] James AH～Ron F～James MT～et o1,Realtime PCR —for the detec,tion of Cryptosporidium partumIJ],J Microbiol Methods～2001～47,323 [12] Frank RC～Cook SJ～Li F～et o1,Development of a multiplex real— time reverse transcriptase pelymerase chain reaction for equine in,fectious anemia virus(EIAV)[J],J Virol Methods～2002～105,171 6 [13] 术姆布术克J., E. F. 弗里奇, T. 曼尼阿斯蒂, 著.分子克隆术术指南[M].北京: 科学出版社, 2002:908- 920. 7 《教学育法》第章10 第一术、术术术术术;每术分～道术共分, 155 、,,,,,,,就是在术益保术方面术弱者的一术特殊帮径助。而法律救术术是通术一定的途和1 程序裁社决会从生活的术术～而使术益受到术害的相术人受到法律上的术救～其保术术象范术十分广残泛～其中也包括术弱者。 、法律救术 、法律援助 AB 、法律帮助 、法律互助 CD 、随国教教教教着我依法治术程的推术和育法制的健全～根据《育法》和《术法》的基本精神～2 在人民术解 制度 关于办公室下班关闭电源制度矿山事故隐患举报和奖励制度制度下载人事管理制度doc盘点制度下载 的基术上～正在逐步建立校内术解制度～同术也在探索教育,,,,,,,,,,。 、术判制度 、救术制度 AB 、仲裁制度 、援助制度 CD 、立术确教广教教申术的,,,,,,,～有利于术术大术的合法术益～使术各术受术的合法术益及3 术得到术术～而术术大术的术性～从广教极踊术投身到教教献育事术中～同心同德术术展育事术作出术。 、教育制度 、行政制度 AB 、法律制度 、术术制度 CD 、教况育行政机术在行使,,,,,,,,,术～同术的情、同术的事～必术同术术待～不得有所4 偏私～允术术教教依法申术～术无疑术育行政机术工作是一术术督。 、行政术力 、术术术力 AB 、术术术力 、法律术力 CD 、依照《行政术术法》术定～,,,,,,,,,,,是指公民、法人或其他术术术术行政机术的具5 体行政行术侵犯其合法术益～向有术的行政机术提出行政术术申术～行政机术受理行政术术申术～依法作出术持、术更或撤术具行体决政行术的一术裁活 术。行政术术是一术行政司法性术的救术活术。 、行政术术 、教育救术 AB 、法律救术 、行政术术 CD 第二术、多术术术术;每术分～道术共分, 2510 、教——————教育行政机术在行使行政术力术～～术无疑术育行政机术工作是一术术督。 1 、同术的情况 A 、同术的事 B 、必术同术术待 C 、不得有所偏私 D 、允术术教依法申术 E 、据有术教学教学——————育法术术定,校及育行政部术有术术术术生予以警告以及其他术分～如果2 学生术术分不服～可以提出申术。 、术重警告 A 、术术 B 、留校察看 C 、勒令退 学D 、术除学籍 E 、教教国确来育行政术术是育管理术域中的行政术术～而行政术术是我以立法形式立起的程序术完3 术的非术术的法律救术制度～如《行政术术法》术 行政术术的原术、等术术——————确均作了明术定。 、范术 A 、管术 B 、机构 C 、申术受理 与D 、受理定 与决E 、根据我国教几个——————有术法律、法术的术定～育行政术术程序～主要有以下步术。 4 、申术 A 、受理 B 、术理 C 、定 决D 、术行 E 、教教——————育行政术术的受案范术包括术育行政术术不服的。如相术人等行政术术不服的～可以向5 有管术术的法院提起术术。 、拘留 A 、术款 B 、吊术术可术和术照 C 、术令停术停术 D 、没收术物 E 第三术、判断术;每术分～道术共分, 155 、法律就其术术而言～法律救术是在法律术施术程中如何使术益受害者的合法术益受到法律上的1 保术。 正确 术术 、所术教教体径育法律救术～是指育法律术系主的合法术益受到侵害～通术一定的程序和途术得2 法律上的术救。 正确 术术 、解决教教内没教教会育术术～是育法律救术的重要容。如果有育管理术术～育法律救术也同术存3 在。 正确 术术 、生学教内学教申术是育法律救术的重要容～其涵术是指生在接受育术程中～术术其合法术益受4 到侵害～依法向教育行政部术术术理由～申术术理或重新术理的行术。生学学申术是术法术予生的基本术利。 正确 术术 、所术教教教育行政术术～是指育管理相术方术术育行政机术以及其他行政机术在行使法律、法术授5 予的管理术术术～侵犯了其合法术益～依法向人民法院起术～术求术予法律救术～人民法院依法术教体体育行政机术以及其他行政主作出的具管 理行术合法性术行术术～作出并裁判的法律救术活术的术。 称 正确 术术 答案下术改术术色可术 BCCAD A?E???A?E???A?D???A?E???A?E 术术术术术 一,术术能力 流术比率1. 年份 方正科技行术20131.15%4.69% 20121.54%5.04% 20111.66%7.98% 速术比率2. 年份 方正科技行术20131.42%4.3% 20121.26%4.67% 20111.48%7.55% 术益乘数3. 年份 方正科技行术20131.471.78 20121.521.72 20111.481.66 二,术能力运 术术收益率4. 年份 方正科技行术20131.97%9.83% 20122.09%11.33% 20113.43%10.46% 术益术酬率 年份 方正科技行术20131.62%12.35.%20121.88%7.86% 20113.6%15.68% 三,周术率 术收术款周术率 年份 方正科技行术20136.0830.16 20126.6224.37 20117.7510.79 从表可知～方正科技的术收术款周术率近三年术低于行术平均水平。同术～行术的术收术款周术率的平 均水平在增加～而方正科技的术收术款平均水平在呈减少术术。术明本公司收款能力偏低～术术术致 了公司的流术术术偏低～有着术大术术～不利于公司术展。 存术周术率 年 份方正科技行术 20139.7558.6 201210.5149.16 201111.1421.71 从表中可以看出～方正科技的存术周术率术低于行术平均水平。同术～行术的存术周术率的平均水平在增加～而方正科技的存术周术率平均水平在呈减少术术。术明公司的存术存在术大术术～存术周术低～存术术存量大～术生术大的管理术用、术术用等～术售致成本增加～毛利术降低。不利于公司的术展。术术术周术率 年 份方正科技行术 20130.81%0.82% 20120.87%0.96% 20110.94%0.93% 术术术周术率是术合术价企术全部术术术术术量和利用效率的重要指术。表中可以从看出～方正科技的术术术周术率与运行术的平均水平相差不大。术明企术近三年术术术的术效率和术化不大～方正科技的术术利用效率良好。 四,盈利能力 毛利率 年 份方正科技行术 20137.43%45.63% 20127.11%47.95% 20117.44%48.06% 术利率 年份 方正科技行术 20131.34%45.63% 20121.45%?1.71% 20112.45%?9.03%