SOD酶活性测定方法

SOD酶活性测定方法SOD酶活性测定方法 SOD酶活性测定所需药品: (1)0.1mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液: A液:0.1mol/l磷酸氢二钠液 B液:0.1mol/l磷酸二氢钠液 1毫升B+10.76毫升A (2)0.026mol/l蛋氨酸液(Met):现用现配称取0.3879克蛋氨酸，用1号液定容至100毫升。 -5(3)75*10mol/l氯化硝基四氮唑蓝(NBT)液:现用现配称取0.1533克NBT，先用少量蒸馏水溶解，然后定容至250毫升。 -5(4)1umol/lEDTA-2钠和2*...

SOD酶活性测定方法 SOD酶活性测定所需药品: (1)0.1mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液: A液:0.1mol/l磷酸氢二钠液 B液:0.1mol/l磷酸二氢钠液 1毫升B+10.76毫升A (2)0.026mol/l蛋氨酸液(Met):现用现配称取0.3879克蛋氨酸，用1号液定容至100毫升。 -5(3)75*10mol/l氯化硝基四氮唑蓝(NBT)液:现用现配称取0.1533克NBT，先用少量蒸馏水溶解，然后定容至250毫升。 -5(4)1umol/lEDTA-2钠和2*10mol/l核黄素混合液 (5)0.05mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液 (6)石英砂实验步骤: 1.酶液制备:称取0.5克鲜叶，放入研钵中，加入3毫升5号液和少量石英砂，于冰浴中研成匀浆。然后用5号液定容至8毫升，于0,4?、13000g时离心15分钟，上清液即为酶提取液。酶液可在低于0?下的环境中保存。 2.按下表加入试剂: 反应各系统中试剂用量试剂 2号液(ml) 3号液(ml) 4号液(ml) 酶液(ul) 5号液(ul) 杯号 1 1.5 0.3 0.3 0 900 2 1.5 0.3 0.3 0 900 3 1.5 0.3 0.3 0 900 4 1.5 0.3 0.3 25 875 5 1.5 0.3 0.3 35 865 6 1.5 0.3 0.3 45 855 7 1.5 0.3 0.3 55 845 8 1.5 0.3 0.3 65 835 试剂摇匀后，迅速遮光处理1号杯，其余杯在25?、光强为4000勒克司的条件下照光处理15分钟，然后立即遮光。接着在560nm下，以1号杯作为空白测定其余杯中溶液的光密度。假定2、3号杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率为100%，然后按下式分别计算其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率。 M/N=100/X M——2、3号杯中溶液的光密度的平均值 N——其余杯中溶液的光密度值 X——其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率然后以酶液量为横坐标，以其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率(X)为纵坐标制作曲线，根据线性好的曲线所得出的函数关系计算抑制NBT光还原的相对百分率为50%时所加入的酶液量，以该酶液量作为1个酶活单位。结果计算:SOD活力按下式计算: A=V*1000*60/(B*W*T) -1-1A——酶活力(酶活力单位?g?FW?h) V——酶提取液体积(毫升) B——一个酶活力单位的酶液量(微升) W——样品鲜重(克) T——反应时间(分) 因测定样品数量多时也可用下列简式计算: A=(D-D)*V*1000*60/(D*B*W*T*50%) 121 D——2、3号杯光密度的平均值 1 D——测定样品的光密度值 2

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