微生物知识培训
微生物限度检查法基本知识
一、概念:
微生物限度检查法是指检查非规定灭菌制剂(常用口服制剂及局部外用制剂等)及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。
二、操作过程:
1、试验准备:
?所用物品(如平皿、锥形瓶、移液管等)、培养基等均需在高压锅内湿热灭菌后移入洁净实验室内。
?开启洁净实验室空气过滤装置及紫外灯不低于30min(一般为30min) 2、供试液制备:
?原辅料 10g供试品+ pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液100mL?1:10供试
?片剂、胶囊 (难溶性样品通常加入适量的吐温80使其分散均匀) ?包材(膜剂)
2取供试品100cm，用蘸有0.9%氯化钠溶液的棉签擦拭供试品，用剪刀将棉签剪入0.9%
氯化钠溶液中，摇匀，作为供试液。
3、 供试液稀释:
一般情况下，将供试液稀释成1:10、1:100、1:1000等稀释级的供试液。 ?稀释液(1:10):用移液管移取上述供试液1mL分别注入4个平皿中，其中2个作为1
细菌计数，2个作为霉菌、酵母菌计数。
?稀释液(1:100):用移液管移取上述供试液0.1mL分别注入4个平皿中，其中2个作2
为细菌计数，2个作为霉菌、酵母菌计数。
4、 倾注培养基:
营养琼脂培养基----------------细菌计数
玫瑰红钠琼脂培养基----------霉菌、酵母菌计数
5、培养、计数:
细菌计数平板倒置于30~35?培养箱中培养3天，霉菌、酵母菌计数平板倒置于23~28?培养箱中培养5天，逐日观察菌落生长情况。
三、CP、EP、USP内容比较:
1、供试品分类:
液体供试品
固体、半固体或粘稠液体供试品 水溶性供试品
非水溶性供试品 不溶于水的非脂溶性供试品 CP 膜剂供试品 EP/USP 溶性供试品
肠溶及结肠溶制剂供试品 气雾剂、喷雾剂供试品
气雾剂、喷雾剂供试品 贴剂供试品
贴剂供试品
2、计数方法:
平皿法
平皿法 平板计数法 表面涂布法 CP 薄膜过滤法 EP/USP 薄膜过滤法
最大可能数法(准确度、精确度较低) 3、对于具抑菌活性供试品的处理方法:
培养基稀释法 培养基稀释法
CP 离心沉淀法 EP/USP 薄膜过滤法
薄膜过滤法 中和法
中和法
4、培养基选择:
营养琼脂(细菌计数) 胰酪胨大豆琼脂(细菌计数) CP 玫瑰红钠琼脂(霉菌、酵母菌计数) EP/USP 沙门葡萄糖琼脂(霉菌、酵母菌计数) 5、样品稀释液:
pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 CP pH6.8(或7.6)磷酸盐缓冲液 EP/USP pH7.2磷酸盐缓冲液
0.9%氯化钠溶液 胰酪胨大豆肉汤 6、菌数
报告
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规则:
细菌、酵母菌平均菌落数小于300cfu 细菌平均菌落数小于250cfu CP 霉菌平均菌落数小于100cfu EP/USP 霉菌、酵母菌数平均小于100cfu 7、菌落计数:
CP:若营养琼脂培养基上长有霉菌、酵母菌，则与玫瑰红钠琼脂培养基中的霉菌、酵母菌数比较，以菌落数多的培养基中的均属为计数结果,细菌计数方法类同。
EP/USP:若营养琼脂培养基上长有霉菌、酵母菌，则合计为细菌数。
浙公网安备 33021202002483