多重人乳头瘤病毒感染与宫颈癌及癌前病变的相关性探讨
摘要:目的探讨人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)感染与宫颈癌及癌前病变之间的相关性。方法将收集到的300例患有宫颈疾病的女性患者,采用HybriMax 医用核酸分子快速杂交基因技术及第二代杂交捕获法
(HC-2)对患者的HPV进行检测,阳性者之后行阴道镜下多点活检加颈管诊刮术,将检查结果进行比对,HPV检测阳性212例,阳性率高达70.67%。宫颈癌的病理类型中鳞癌发病率最高,其次是腺癌约占宫颈癌的15%~20%,腺鳞癌仅占3%~5%,高危型HPV16和18与宫颈癌及宫颈上皮内高度病变(CINII/III)的发生密切相关。HPV-DNA检测阳性患者中,细胞学异常者比细胞学为良性反应性细胞者的DNA 含量高(P<0.05),差异有统计学意义。结果HPV-DNA阳性感染率随宫颈病变程度的不断加重而升高,高危型HPV 在宫颈癌前病变和宫颈癌中的病毒含量随病情程度的加重呈现上升趋势。结论人乳头瘤病毒感染与宫颈癌前病变和宫颈癌的发生有密切的关系,可作为重要的检测指标。
关键词:人乳头瘤病毒;癌前病变;宫颈癌
宫颈癌是全球女性恶性肿瘤较为常见的,发病率仅次于乳腺癌,位居全球第2,约占其总数的50%以上,在中国女
性发病率居第1位。我国自20世纪70年代开展全国性的妇科普查和宫颈癌癌前病变的诊治,一些大城市宫颈癌的发病率明显下降。近年来子宫颈癌出现年轻化趋势,因此对宫颈癌及癌前病变的研究成为医学界关注的热点[1]。许多研究表明人乳头瘤病毒感染与宫颈癌及癌前病变有关,目前发现的HPV达100余种,约有20余与肿瘤有关,本文章主要从宫颈癌及癌前病变与人乳头瘤病毒的型别相关性入手研究。
1 资料与方法
1.1一般资料选取2011年1月~2013年6月来我院就诊的女性患者进行宫颈癌的筛查,提取其中的300例作为本次的研究对象。年龄在20~65岁,进行HybriMax医用核酸分子快速杂交基因技术及第二代杂交捕获法(HC-2)检测,并对其中212例阳性患者进行阴道镜检查及组织活检加颈管诊刮术。同时对其他138例患者进行阴道脱落细胞涂片检查,进而进行相应的对照。
1.2方法
1.2.1 HybriMax医用核酸分子快速杂交基因分型试剂盒从筛查患者中提取样本,按常规宫颈细胞学进行取材,把采集到的脱落细胞放置存盛有细胞保存液的小瓶里待用。HPV 的分型步骤:首先对标本的DNA进行扩增,然后将扩增后的产物进行导流杂交,整个杂交过程保持在45℃,最后芯片显色进行分型。整个过程的操作均按试剂盒说明进行。凯普
医用核酸分子快速杂交仪可以检测HPV-DNA的21种亚型,高危型13种(HPV16、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68),低危型5种(HPV6、11、42、43、44)及中国人群常见的亚型(HPV53,66,CP8304),不论高危型还是低危型,只要是两种或两种以上者均为多重感染[2]。
1.2.2阴道脱落细胞涂片检查通过经典的Pap涂片染色法进行检测,由于宫颈癌好发于移行带,故取材必须在鳞-
柱上皮交界处,结果按TBS分类
标准
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进行诊断,诊断标准分类:①正常细胞及良性改变;②鳞状细胞异常,包括非典型鳞状细胞(ASC)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)、鳞状细胞癌(SCC);③意义不明的非典型腺细胞(AGUC)和腺癌(AC)。
1.2.3宫颈组织活检及颈管诊刮术对上述56例高危型人群及阴道脱落细胞涂片检查提示恶性的患者进行组织活检。在子宫颈上作多点活检,至少取4块组织分瓶送病理检查。宫颈活检和经管诊刮术同时进行有助于早期发现宫颈上皮
内瘤变(CIN)和早期宫颈癌,进一步提高诊断阳性率。
2 结果
2.1人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌的主要危险因素,在300例筛查人员中,其中212例HPV检测阳性,含有1种或1种以上感染,总阳性率70.67%。
2.2 HPV的检测结果,在300例CIN中,HPV阴性88
例,占29.33%;HPV阳性212例,占70.67%。最多为3种型别同时感染,其中单一基因型感染126例,占59.43%,二重感染75例,占35.37%,三重感染11例,占5.2%。在300例CIN所感染HPV-DNA的亚型涉及21型,其中感染频度最高的HPV-16(32.15%),从正常组织到宫颈上皮瘤样变CIN不同病变患者中,正常组织52例,炎症患者212例, CINI43例,CINII15例,CINIII11例,癌5例,各病变之间与正常者相比存在差异性,有统计学意义。(P<0.05),见表1。
2.3 HPV-DNA分型联合细胞学检测与细胞学检测结果
比较在300例患者当中,HPV-DNA分型联合细胞学检测阳性者212例,其中LSIL52例,HISL21例,癌5例,而而通过细胞学检测的145例患者中LSIL38例,HISL9例,癌2例,两者比较存在显著性差异(P<0.05),具有可比性。见表2。
3 讨论
3.1随着宫颈癌的发病率有年轻化的发展趋势,对宫颈癌的筛查成为重点。许多研究结果表明HPV感染是宫颈癌的主要危险因素,目前对HPV检测有许多种方法,本文章使用HybriMax医用核酸分子快速杂交基因技术及第二代杂交捕获法(HC-2)对HPV进行检测,提高检测准确性高,并且简单易操作,耗时短,可广泛用于研究教学和临床诊断。
本文章研究显示,HPV-DNA分型联合细胞学检测要比单纯细胞学检测效果好,病变检出率较高,且各级别宫颈病变率均高于细胞学检测的结果[2]。
3.2通过采用HybriMax医用核酸分子快速杂交仪及第二代杂交捕获法(HC-2)可以检测H PV-DNA的21种亚型,高危型13种(HPV16、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68),低危型5种(HPV6、11、42、43、44)及中国人群常见的亚型(HPV53,66,CP8304)。由于HPV有许多亚型,对宫颈疾病的威胁,不仅仅有单一型病毒感染,可能同时会出现多型病毒感染,但是不一定多型病毒感染会增加宫颈病变,目前对观点没有一个明确的说法。国际癌症研究协会(IARC)的最新研究结果显示,最常见的亚型为HPV-16、HPV-18等,HPV-45在非洲较多、HPV-33主要集中于欧洲国家,而亚洲国家主要是HPV-52、58常见。在众多亚型中,以HPV-16、HPV-18,HPV-33型与子宫颈癌关系最为密切,有研究表明,不同亚型的感染其致病性、治疗效果及后果等方面存在差异,其中HPV-16是感染频度最高的亚型,可达32.15%,从而说明了HPV-16对宫颈癌的致病性要高于其他亚型。
3.3目前HPV的致癌机制认为是病毒DNA通过共价键与细胞学DNA序列联络,这种联络使病毒DNA或以多拷贝串联状态,或以单拷贝形式整合入宿主细胞DNA中,结果
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