G418筛选tzmbl细胞适宜浓度实验
建立MicoRNA稳转TZMbl细胞系所用G418筛选浓度实验
G418 实验目的 实验细胞 G418储液浓
度
500mg/mL 建立MicoRNA稳转TZMbl细胞系TZM-bl细实验室自制
2006 所需要的G418筛选浓度 胞
一、 将TZM-bl细胞以1000个/孔的密度接种到96孔板中。
二、 1. 24 h后，弃去旧的培养基，分别用含有200 μg/mL、400 μg/mL、800 μg/mL、16 000 μg/mL、 3200 μg/mL G418的DMEM培养细胞。 2. G418储液浓度为500mg/mL=500μg/μL，先用DMEM培养基将其稀释
为50μg/μL的工作液。
3. 每个剂量组做三个复孔，每孔加入100μL含有G418的DMEM培养基，
每次准备的各个剂量DMEM培养基按500μL计算，一次性配制10次的
培养基量，为5000μL。对照组，加入100 DMEM培养基
4.
表1含有不同剂量组G418的DMEM培养基配制
0 1 2 3 4 5 G418体积(μL) 100 (从前一管中吸5000 5000 5000 5000
取，后面类推)640
DMEM体积(μ900 9360 5000 5000 5000 5000 L)
管中G418浓度50000 3200 1600 800 400 200 (μg/mL)
每孔G418含量 320 160 80 40 20 (μg)
每孔加入体积 100 100 100 100 100 (μL)
G418工作液浓 3200 1600 800 400 200 度(μg/mL)
(0号管为1.5 ml EP管，2-5号为15 ml无菌离心管 )
2 3 4 5 6 7 B 对照
3200μ1600μ800μ400μ200μC
g/mL g/mL g/mL g/mL g/mL D
表2不同剂量组G418的DMEM培养基加入96孔板
三、2~3天更换新鲜培养基，培养2周，选择细胞全部死亡的最低G418浓
度作为细胞筛选的浓度。最终确定筛选用G418浓度为---------μg/mL。
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