仪器分析实验报告

生物与化学工程学院 仪器 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 实训实验报告 学院（系）：生化学院 专    业 ：食品科学与工程 指导老师 ：薛刚 姓    名 ：才仁南圈 学    号    019109098 完成日期 ：2011年6月5日 生物与化学工程学院仪器分析实训实验报告 气相色谱内标法检测烟碱含量方法学考察 Gas chromatographic internal standard method for nicotine content methodology observe and study. 学院（系）：生化学院 专    业 ：食品科学与工程 指导老师 ：薛刚 姓    名 ：才仁南圈 学    号 ：019109098 完成日期 ：2011年6月5日 南阳理工学院 Nanyang Institute of University 气相色谱内标法检测烟碱含量方法学考察 【摘要】：本实验以喹啉为内标物，以烟碱为检测对象，考查了气相色谱内标法检测烟碱含量的方法学。结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明在气相色谱条件在柱箱、进样口、检测器温度分别为：170℃、小于270℃、270℃ 氮气、氢气、空气流量分别是：30ml/min、50ml/min、30ml/min 分流比为60：1条件下能很好的检测烟碱含量。从线性关系；精密度实验；重现性实验三个方面考察说明在0～0.5ug含量烟碱的逢高和面积有着良好的线性关系，相关系数为R面积=0.96925  R峰高=0.98244。 精密度，峰高RSD﹪=4.7% 面积RSD%=3.05%  重现性，峰高RSD%=705%  面积RSD%=12.5% ，结果证明在该色谱条件下以喹啉为内标物用内标法可以准确检测烟碱含量,其的结果是可靠的。 【关键词】：气相色谱    内标法  烟碱  方法学 Gas chromatographic internal standard method for nicotine content methodology observe and study. [Abstract]: This experimental use quinoline as internal standard to detect  the content of nicotine that to examine the methodology of internal standard method of GC for determining the content of nicotine. The results show that when gas chromatography conditions such as column box, injection port and detector temperature were 170 ℃ , 270 ℃ and 270 ℃  .At the same time,  the amount of nitrogen, hydrogen and air flows  were: 30ml/min, 50ml/min, 30ml/min, we can determination a better result when the split ratio is 60:1 . The results of linear relation, reproduction quality, precision experiment show that when the content of nicotine range from 0~50ug/ml, the linear relation, reproduction quality, precision experiment are better. Correlation coefficient of peak area and peak high are0.96925、0.98244  which prove the linear relation is good. The RSD% of reproduction quality are: peak height – 4.7% peak area—3.05﹪.The RSD% of precision are: peak height -7.05﹪  peak area—12.5﹪ which show the way of using quinoline  as internal standard to detect  the content of nicotine is good and faithful . [Keywords]: gas chromatography；nicotine；methodology；internal standard method 目录 1绪论…………………………………………………………………V 1.1烟碱的介绍………………………………………………………V 1.1.1烟碱结构……………………………………………………V 1.1.2烟碱理化性质………………………………………………V 1.2国内外检测烟碱含量的方法………………………………………V 1.2.1滴定法………………………………………………………V 1.2.2紫外分光光度法……………………………………………VI 1.2.3水蒸气蒸馏法………………………………………………VI 1.2.4高效液相色谱法……………………………………………VII 1.2.5气相色谱法…………………………………………………VII 1.2.5.1外标法………………………………………………VII 1.2.5.2归一化法……………………………………………VII 1.2.5.3内标法………………………………………………VII 1.3分析方法学考证……………………………………………………VIII 1.3.1线性关系………………………………………………………VIII 1.3.2精密度实验……………………………………………………VIII 1.3.3重现性实验……………………………………………………VIII 1.3.4回收率…………………………………………………………VIII 1.3.5验证试验………………………………………………………VIII 1.4烟碱目前国内外的研究……………………………………………VIII 2实验部分………………………………………………………………IX 2.1实验目的………………………………………………………………IX 2.2实验材料仪器…………………………………………………………IX 2.2.1实验材料………………………………………………………IX 2.2.2实验仪器………………………………………………………IX 2.3色谱条件………………………………………………………………X 2.4实验 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 及结果分析…………………………………………………X 2.4.1线性关系考察……………………………………………………X 2.4.1.1实验设计………………………………………………X 2.4.1.2实验结果考定…………………………………………X… 2.4.1.3实验结果分析…………………………………………X 2.4.1.3.1峰高线性关系分析…………………………XI 2.4.1.3.2面积线性关系分析…………………………XI 2.4.2精密度试验………………………………………………………XII 2.4.2.1实验设计………………………………………………XII 2.4.2.2实验结果考定……………………………………………XIII 2.4.2.3实验结果分析……………………………………………XIII 2.4.2.3.1面积RSD%..............................XIII 2.4.2.3.2峰高RSD%.............................XIII 2.4.3重现性试验…………………………………………………………XIII 2.4.3.1实验设计…………………………………………………XIII 2.4.3.2实验结果考定……………………………………………XVI 2.4.3.3实验结果分析……………………………………………XVI 2.4.3.3.1峰高RSD%...........................XIV 2.4.3.3.2面积RSD%............................XIV 2.5讨论……………………………………………………………………IV 参考文献……………………………………………………………………IV 【正文】 1绪论 1.1烟碱的介绍： 烟碱是一种吡啶型生物碱，分子式为C10H14N2.俗称尼古丁（nicotine）。存在于烟草属经济植物中，无色挥发性液体，有刺激性臭味，熔点-79℃，沸点246.7℃(745毫米汞柱)，相对密度1.0097(20/4℃)。比旋光度-169°。可以水蒸气蒸馏。在空气中易发生变质。易溶于水、乙醇、乙醚、氯仿和石油醚中。烟碱能与各种无机酸(如盐酸、硫酸)和有机酸(如酒石酸、苦味酸)生成结晶的单盐和双盐，其中双盐的熔点278℃，常用来鉴别烟碱，烟碱与二氧化汞生成结晶形复合物。 它能迅速溶于水及酒精中，通过口、鼻、支气管黏膜，很容易被人体吸收。粘在皮肤表面的尼古丁，可“渗”入人体内。香烟中的尼古丁对人的致死量是50～70毫克，相当于20～25支香烟尼古丁的含量。如果将一支雪茄或三支香烟的尼古丁一次注入人的静脉内,3～5分钟人即可死亡。对心血管系统表现为：心率加快、血压升高，也可表现为心率减慢、血压下降。尚可作用于呼吸、呕吐等中枢。对昆虫具有杀灭作用。 1.1.1烟碱的结构、 1.1.2烟碱理化性质： a、物理特性：烟碱在常温下是无色油状液体，易溶于水，并能溶于酒精、乙醚、丙酮等有机溶剂中，常压下蒸馏沸点为248℃，20℃时比重为，在碱性溶液中能随水蒸汽逸出，可用分光光度计测其含量。 b、化学特性：烟碱在化学结构中，具有用单健相连的两个含氮杂环（即吡啶环和吡咯环），使烟碱可与酸性物质产生质子化反应生成盐。  1.2国内外检测烟碱的方法 烟碱的检测方法有滴定法、紫外线分光光度法、水蒸气蒸馏法、高效液相色谱法、气相色谱内标（外标法）法等。 1.2.1滴定法; 在Ba(OH)2作用下,用甲苯一氯仿9:1(V/V)混合液萃取香烟中尼古丁.过滤、干燥处理后用高氯酸-冰醋酸 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 溶液进行非水滴定,测定烟草中尼古丁含量.方法简便、快速,不使用标准品.应用于香烟中尼古丁含量的测定方法操作简便。 1.2.2紫外线分光光度法[7]：紫外分光光度法根据烟碱对295nm紫外光有最大的吸收峰，且在一定的浓度范围内，溶液吸光度与烟碱含量呈线性正相关关系的性质，用紫外分光光度计测试式样吸光对，计算出烟碱的含量。 紫外分光光度法操作简单、准确度高、灵敏度高、重现性好。波长长(频率小)的光线能量小，波长短(频率大)的光线能量大。分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量。 物质的吸收光谱与测定条件有密切的关系。测定条件（温度、溶剂极性、pH等）不同，吸收光谱的形状、吸收峰的位置、吸收强度等都可能发生变化。 1.2.3水蒸气蒸馏法：指将含有挥发性成分的药材与水共蒸馏，使挥发性成分随水蒸气一并馏出，经冷凝分取挥发性成分的浸提方法。该法适用于具有挥发性、能随水蒸气蒸馏而不被破坏、在水中稳定且难溶或不溶于水的药材成分的浸提。水蒸气蒸馏法可分为共水蒸馏法、通水蒸气蒸馏法、水上蒸馏法。为提高馏出液的浓度，一般需将馏出液进行重蒸馏或加盐重蒸馏。常用设备为多能提取罐、挥发油提取罐，它在生产活动中被广泛使用。本法的基本原理是根据道尔顿定律，相互不溶也不起化学作用的液体混合物的蒸汽总压，等于该温度下各组分饱和蒸气压（即分压）之和。因此尽管各组分本身的沸点高于混合液的沸点，但当分压总和等于大气压时，液体混合物即开始沸腾并被蒸馏出来。该方法具有安装操作简单、减少污染和缩短实验时间等优点。 1.2.4高效液相色谱法[2][3]：高效液相色谱法的分离机理是基于混合物中各组分对两相亲和力的差别。根据固定相的不同，液相色谱分为液固色谱、液液色谱和键合相色谱。应用最广的是以硅胶为填料的液固色谱和以微硅胶为基质的键合相色谱。根据固定相的形式，液相色谱法可以分为柱色谱法、纸色谱法及薄层色谱法。按吸附力可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶渗透色谱。 高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。 1.2.5气相色谱法 气相色谱法中有外标法、归一化法、内标法三种。 1.2.5.1外标法[1]：用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法（external standard method）。外标法是色谱分析中的一种定量方法，它不是把标准物质加入到被测样品中，而是在与被测样品相同的色谱条件下单独测定，把得到的色谱峰面积与被测组分的色谱峰面积进行比较求得被测组分的含量。外标物与被测组分同为一种物质但要求它有一定的纯度，分析时外标物的浓度应与被测物浓度相接近，以利于定量分析的准确性。 外标法操作、计算简单，无需各组分都被检出、洗脱，但进样量要求十分准确，要严格控制在与标准物相同的操作条件下进行，否则造成分析误差，得不到准确的测量结果。 1.2.5.2归一化法：归一化法 normalization method 一种常见的色谱定量法。归一化法是把样品中各组分的峰面积乘以各自的相对校对因子并求和，次和值相当于所有组分的总质量，即所谓“归一”。 归一化法的优点是：简便、准确，当操作条件如进样量、流速变化时，对定量结果影响很小。缺点是：对该法的苛刻要求限制了该法的使用。 1.2.5.3内标法[1] ：internal standard method 是色谱分析中一种比较准确的定量方法，尤其在没有标准物对照时，此方法更显其优越性。内标法是将一定重量的纯物质作为内标物加到一定量的被分析样品混合物中，然后对含有内标物的样品进行色谱分析，分别测定内标物和待测组分的峰面积（或峰高）及相对校正因子， 本法是通过测量内标物及欲测组分的峰面积的相对值来进行比较的，因而由于操作条件变化而引起的误差，将同时反映在内标物及欲测组分上而得到抵消，所以可得到较准确的结果。这是内标法的主要优点。 内标物的选择是重要的。它应该是试样中不存在的纯物质；加入的量应该是接近与被测组分；同时要求内标物的色谱峰位于被测组分色谱峰附近，或几个被测组分色谱峰中间，并且与这些组分完全分离，还应注意内标物与被测组分的物理及物理化学性质（如挥发度、化学结构、极性以及溶解度等）相近，这样，当操作条件变化时，更有利于内标物与被测组分做匀称的变化。 此法优点是定量较为准确，而且不像归一化法有使用上的限制，但每次分析都要准确称取试样和内标物的质量，因而它不利于做快速控制分析。 在此实验中将使用内标法来测定烟碱的含量方法如下: 内标法是将一定重量的纯物质作为内标物加到一定量的被分析样品混合物中，然后对含有内标物的样品进行色谱分析，分别测定内标物和待测组分的峰面积（或峰高）及相对校正因子，可求出被测组分在样品中的百分含量： 校正因子（f）： f= (As/ms)/(Ar/mr) 其中As和Ar分别为内标物和对照品的峰面积或峰高，ms和mr分别为加入内标物和对照品的量。 根据含内标物的待测组分溶液色谱峰响应值，计算烟碱含量（mi）：  mi=f×Ai/(As/ms) 其中 Ai和As分别为供试品和内标物的峰面积或峰高，ms为加入内标物的量（必要时，再根据稀释倍数、取样量和标示量折算成为标示量的百分含量，或根据稀释倍数和取样量折算成百分含量）。 1.3分析方法学考证 1.3.1线性关系[6]; 两个变量之间存在一次函数关系，就称它们之间存在线性关系。正比例关系是线性关系中的特例，反比例关系不是线性关系。更通俗一点讲，如果把这两个变量分别作为点的横坐标与纵坐标，其图象是平面上的一条直线，则这两个变量之间的关系就是线性关系。即如果可以用一个二元一次方程来表达两个变量之间关系的话，这两个变量之间的关系称为线性关系，因而，二元一次方程也称为线性方程。 1.3.2精密度实验[7]：系指用该法测定同一匀质样品的一组测量值彼此符合的程度。它们越接近就越精密。常用 标准(偏)差(standard deviation，SD或S)； 相对标准(偏)差(relative standard deviation，RSD)，也称变异系数(coefficient of variation，CV)。分析时，常用RSD表示精密度。 1.3.3重现性实验; ：用相同的方法，同一试验材料，在不同的条件下获得的单个结果之间的一致程度。不同的条件指不同操作者、不同实验室、不同或相同的时间。 1.3.4回收率：.回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标准数据为0.99毫克/升，就是说你的回收率是99％，这个与真实成分有密切的关系，说明方法的准确度。 1.3.5验证试验[7]: 是指对研究对象有了一定了解,并形成了一定认识或提出了某种假说,为验证这种认识或假说是否正确而进行的一种实验.验证性实验强调演示和证明科学内容的活动,科学知识和科学过程分离,与背景无关,注重探究的结果(事实,概念,理论),而不是探究的过程。 1.4烟碱目前国内外的研究 最近的研究表明，绿色烟叶可提供的植物类蛋白质无论在数量上还是在质量上都独居榜首。烟草中蛋白质含量高达10.68%，与玉米等农作物的蛋白质含量相当、美国加利福尼亚大学生物学教授威廉等人研究提取到了烟叶可食用蛋白的结晶体，外观颇似味精，毫无烟臭味，纯度高达99.78%。近来的实验研究表明，在提取烟碱和茄尼醇的酸碱浸取过程中，首先提取茄尼醇成分，然后用上层澄清的部分来提取烟碱，而加酸后的下层沉淀部分可用于提取烟草植物蛋白。烟草种植过程中打叶下来的废弃新鲜烟叶也可以直接作为提取植物蛋白的原料。 从烟草中提取的植物蛋白富含多种氨基酸，特别是苏氨酸和色氨酸等氨基酸含量高于鱼粉、酪蛋白和鸡蛋等动物蛋白，是一种优良的天然营养食品添加剂。因此，烟草植物蛋白不但可以成为动物蛋白的替代物，也可作为乳糖缺乏病人的牛奶代用品，还可以添加到肉食品，蛋制品，鱼制品和糖果中，提高其营养价值。这些研究结果为我们展现了烟草及其废弃物综合利用的又一广阔前景。 根据国内外研究进展情况，结合我们对烟草所做的研究工作结果，我们认为，对烟草及其废弃物的相关活性成分进行药用研究是十分有意义的。当前至少有以下几方面值得深入研究：烟草中茄尼醇的分离纯化和药理活性研究，探讨其直接应用和其衍生化产物的药用价值。另外，以茄尼醇本身的理化性质，我们认为它在药剂学领域作为新剂型研究可能有其潜在应用价值；烟草的传统药用价值如“燥湿、避瘴、杀虫、解毒”等，怎样发扬光大，老药新用？烟草中以烟碱等为代表作为天然杀虫剂替代化学合成品，从而保护环境和人类自身的安全“吸烟有害健康”的常识已家喻户晓，也被各国明文规定印刷在烟草制品的包装上。然而吸烟的人群并未由此而减少多少，难道这仅仅是烟瘾难戒之故吗？我们认为有必要重新审视一下“吸烟现象”。“吸烟有害健康”，说明我们已发现烟草的毒、副作用，这很好。那么烟草对人类在防治疾病方面的功效和价值是否就此应该被埋没？如果回答是否定的，则又可衍生出一个研究重点，那就是应该研究“高效低毒”的烟草制品，将“吸烟有害健康”降低到最小程度，从而体现和发挥其有利的功效。  目前，世界各国对烟草及其废弃物综合利用的研究开发方兴未艾，而且正在不断的深入，与美国和俄罗斯相比较，我国在该领域的研究相对较为落后。值得重视的是，我国既是烟草生产大国又是烟草的消费大国，烟草既对人类有药用等多种实用价值，也存在“吸烟危害人类健康和污染环境”的隐患。由于烟草业税收丰盈已成为国家财政收入的主要来源之一，因此，国家面临“增加财政收入”和“禁烟保障人民健康”的两难困境。怎样结合国情，加强对烟草有利人类方面的综合开发利用研究，同时重视对烟草制品进行再研究，提高品质，降低有害物质的含量，体现其有益的功效，既满足吸烟人群的需求又达到最大限度保护健康和减少环境污染的目的，扬长避短，让烟草充分发挥对人类的贡献。由此可见，结合高新技术的发展，在烟草及其废弃物的综合开发与利用领域，必将开创出新的局面[5] 2实验部分  2.1目的：①内标法测定烟碱含量； ②学会对实验的结果的线性关系；精密度实验；重现性试验及实验结果的分析。 2.2材料仪器 2.2.1材料：甲醇（分析级别）40%烟碱（自制） 喹啉（分析级别） 2.2.2仪器：:气相色谱法（890Ⅱ型）  毛细管柱（30m  TM—WAX 极性）注射器（50ul） 2.3色谱条件:柱箱温度（OVEN) 170～270℃  进样口（INT）小于270℃    检测器温度器（DET）270℃      火焰离子化检测仪（FID)温度小于270℃  进气量N230ml/min、air30ml/min 、H250ml/min ；分流状态为60:1 2.4  实验设计及结果分析 通过实验及对实验结果的分析得出以下结论。 2.4.1线性关系考察（定量分析；浓度一定） 2.4.1.1实验设计：材料：①100ug/ml烟碱甲醇溶液； ②100ug/ml喹啉甲醇溶液； ③99%以上甲醇溶液； 配制浓度分别为1、10、20、30、40、50ug/ml的烟碱甲醇溶液 表一 Test              uL --------------------------------------  编号 烟碱百分含量%  ①/ul          ②/ul          ③/ul      ug/ml 1          0%              0            500        500          0          2          20%            100          500        400          10 3          40%            200          500        300          20 4          60%            300          500        200          30 5          80%            400          500        100          40 6          100%            500          500          0          50      2.4.1.2实验结果考定： 表二：烟碱/喹啉的峰高比及面积比 Table 2:peak height ratio and area ratio of nicotine/ quinoline Test              uL --------------------------------    peak height ratio area ratio  No. nicotine    quinoline  methyl hydroxide 1    0        500            500      0.00244            0.001966 2    100        500            400      0.06023            0.03680 3    200        500            300      0.021207            0.14654 4    300        500            200      0.41469            0.29749 5    400        500            100      0.66756            0.53867 6    500        500              0        0.90604            0.76947 2.4.1.3实验结果数据分析 计算线性关系作图表示结果 ①作图 ②线性关系：y=a+bx    R相关系数 ③附图谱 2.4.1.3.1峰高 X轴----盐碱含量  y轴---峰高比值 Linear Regression for DATA1_B: Y = A + B * X Parameter    Value    Error A       -0.27709      0.8613 B       0.18693      0.01775 R          SD    N            P 0.98244      0.08878    6      0.00232 方程：y=-0.27709+0.18693x R=0.98244        t=R/Sr    计算得Sr=0.0934  t=10.518 f=n-2  f=4时t0.05=2.776  t0.01=4.604 t测> t0.01 极显著    由此可以看出烟碱含量在0—50ug/ml范围内，采用气相色谱法测定时其浓度与峰高比呈良好的线性关系。 2.4.1.3.2峰面积 X轴----烟碱含量  y轴----面积比 显著性检验：Linear Regression for DATA1_B: Y = A + B * X Parameter    Value    Error A      -0.25092     0.8776 B      0.15697    0.61993 R      SD            N        P 0.96925     0.08336    6        0.0014 方程：Y= -0.25092+0.15697x 由公式t=R/Sr          计算得：Sr=0.1573  t=6.1617 f=4时  t0.05=2.776    t0.01=4.604 t测> t0.05  极显著 2.4.2精密度试验 2.4.2.1实验设计：材料：①100ug/ml烟碱甲醇溶液； ②100ug/ml喹啉甲醇溶液； ③99%以上甲醇溶液； 按下表进样 表三、精密度实验进样配置 Test              uL --------------------------------------  编号 烟碱百分含量%  ①/ul          ②/ul          ③/ul      ug/ml 1          100%          500        500            0          50          2          100%          500          500              0          50 3          100%          500          50              0          50 4          100%          500          500            0          50 5          100%          500          500              0          50 2.4.2.2实验结果： 表四：精密度试验 precision 烟碱/喹啉的峰高比及面积比 Table 4:peak height ratio and area ratio of nicotine/ quinoline Test              uL --------------------------------    peak height ratio area ratio  No. nicotine    quinoline  methyl hydroxide 1    500        500            0        0.69085            0.53614 2    500        500            0        0.86794            0.68060 3    500        500            0        0.89400            0.70047 4    500        500            0        0.854323            0.68581 5    500        500            0        0.92502            0.76801 2.4.2.3结果分析： 根据公式 S=   可得出 2.4.2.3.1峰面积： 0.00062437    S=0.024987  X=0.8192 RSD%= *100%=3.05%    RSD%<5% 2.4.2.3.2峰高：   0.000645    S=0.0254              X =0.7604 RSD%= *100%=4.7 %    RSD%<5% 2.4.3重现性实验（重点考察仪器） 2.4.3.1实验设计：材料：①100ug/ml烟碱甲醇溶液； ②100ug/ml喹啉甲醇溶液； ③99%以上甲醇溶液； 按下表配置进样溶液 表五 Test              uL --------------------------------------  编号 烟碱百分含量%  ①/ul          ②/ul          ③/ul      ug/ml 1          40%          200        500              300          20            2.4.3.2实验结果考定 表六  重现性试验reproducibility 烟碱/喹啉面积比及峰高比 Table 6:peak height ratio and area ratio of nicotine/ quinoline Test              uL -------------------------------    peak height ratio  area ratio  No. nicotine    quinoline  methyl hydroxide 1    200      500            300          1.00500          0.80839 2    200        500            300          0.94277          0.81084 3    200        500            300          0.72968          0.58142 4    200      500            300          0.96463          0.80124 5    200      500            300          1.01076          0.85623 2.4.3.3实验结果分析 根据公式 S=   可得出 2.4.3.3.1峰面积： 0.0071827  S=0.084751      X=0.6742 RSD%= *100%=12.57%    RSD%>5% 2.4.3.3.2 峰高： 0.00264      S=0.0514      x=0.9116 RSD%= *100%=7.5%      RSD%>5% 就差异系数而言，RSD﹪> 5﹪  重现性不太好。偶然误差存在几率较大，也有可能操作人员不熟练出现“过失”，造成结果不准确。 2.5讨论：线性关系实验中，t值检验证明，线性关系极显著，表明此种实验条件下，在0-50μg/ml范围内，烟碱峰高比和峰面积高有较好的线性关系。 精密度实验中，RSD%较大，分析为进样过程出现了问题。进样应该快速，准确。 重现性中，RSD%较小，证明精密度较好，此操作较准确。 参考文献： [1]期刊《分析实验室》（ Chinese Journal of Analysis laboratory）2009年12月第28卷  《液质连用法测定血浆中连红霉素的内标法与外标法比较》张丽芳，薛飞群. [2]黄注传，朱子高，罗家基，罗毅，郭琳；用HPLC法测定卷烟总粒相物及烟碱盐中的烟碱含量[J]；烟草科技；1997年04期. [3] YAGN Xin-lei(杨新磊),LUO Ming-biao(罗明标),DING Jian-hua(丁健桦).Rapid determination of nicotine in saliva by liquid phase microextraction-high performance liquid chromatography(液相微萃取-高效液相色谱法快速测定唾液中尼古丁含量).Chin J Anal Chem(分析化学),2007,(02):171 . [4]于华忠;龙维珍;饶立群;曹庸;李国章;张爱萍;;TLC法测定烟叶中茄尼醇的含量[J];四川食品与发酵;2006年03期. [5] Mainstream Smoke of Cigarettes and Tobacco Indicadors of Chemical Technology(卷烟主流烟气与烟丝化学技术指标).GB5606.5-1996. [6]张荣建.仪器分析实验.北京：科学出版社. [7]赵文宽.仪器分析实验北京：高等教育出版社，2003