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含肠道病毒5_端非编码区部分核糖核酸序列病毒样颗粒的构建

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含肠道病毒5_端非编码区部分核糖核酸序列病毒样颗粒的构建含肠道病毒5_端非编码区部分核糖核酸序列病毒样颗粒的构建 中国现代医学杂志No.10 Vol. 20 第 10 期 May 2010 年 5 月 China Journal of Modern Medicine 1005-898,2201,010-1507-05章编号, ?论著? 含肠道病毒 5' 端非编码区部分核糖核酸序列 *病毒样颗粒的构建 单军,葛以跃,戚宇华,张文帅,李显,崔仑标 ,江苏省疾病预防控制中心 病原微生物研究所,江苏 南京 21 0009, 构建含有肠道病毒,EV,5' 端非编码区...

含肠道病毒5_端非编码区部分核糖核酸序列病毒样颗粒的构建
含肠道病毒5_端非编码区部分核糖核酸序列病毒样颗粒的构建 中国现代医学杂志No.10 Vol. 20 第 10 期 May 2010 年 5 月 China Journal of Modern Medicine 1005-898,2201,010-1507-05章编号, ?论著? 含肠道病毒 5' 端非编码区部分核糖核酸序列 *病毒样颗粒的构建 单军,葛以跃,戚宇华,张文帅,李显,崔仑标 ,江苏省疾病预防控制中心 病原微生物研究所,江苏 南京 21 0009, 构建含有肠道病毒,EV,5' 端非编码区,5'-UTR,部分 RNA 序列的耐核糖核酸酶,RNase,病摘要,目的 毒样颗粒。利用 PCR 技术扩增大肠杆菌 MS2噬菌体的外壳蛋白和成熟酶蛋白基因,将其克隆 方法 到 pET32a-MS2-EV。将其转化宿主菌,IPTG 诱导 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达,并进行 RT-PCR 检测和稳定性实验。载体 pET32a 中构建中间载体 pET32a-MS2。将肠道病毒 5'-UTR 基因片段连接到中间载体的下游,构建原核表达表达 结果 载体 pET32a-MS2-EV 经 PCR、双酶切鉴定和测序分析后证实构建成功。RT-PCR 和稳定性实验结果表明, 诱导产生的病毒样颗粒内含肠道病毒5'- UTR 部分 RNA 序列,并且稳定性良好。成功构建了含肠道病 结论 毒 5'-UTR 部分 RNA 序列的病毒样颗粒,可作为肠道病毒检测时的 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品和质控品使用。 噬菌体,核糖核酸,核糖核酸酶,病毒样颗粒 关键词, R789A中图分类号, 文献标识码, Construction of virus-like particles containing partial RNA *sequenceof EV 5 ′-UTR SHAN Jun, GEY i-yue, QI Yu-hua, ZHANG Wen-shuai, LI Xian, CUI Lun-biao (Institute of Pathogenic Microbiology of Jiangsu Centerfors DiseasesPreven tion and Control, Nanjing, Jiangsu 210009, P.R.China) 单 军,等,含肠道病毒 5’端非编码区部分核糖核酸序列病毒样颗粒的 构建 M 1 2 3 4 5 M 1 2 3 4 2 000b p 1 500b p 1 000b p 600b p 500b p 400b p 300b p 200b p 100b p ,DL5000 DNA marker,1~3,单 克 隆 ,4,阴 性 对 照,HO 为 模 2 图 1 重组质粒 pET32aMS2 的 PCR 鉴定 - M,100bp DNmAar ker,1~4,单克隆,5,阴性对照,HO 为模板, 2M 1 2 3 图 3 表达载体 pET32a-MS2-EV 的 PCR 鉴定 pET32a-MS2-EV 构建成功,图 5,。 M 1 2 3 5 000 bp 3 000 bp 2 000 bp 1 500 bp 1 000 bp 7 000b p 4 000b p 2 000b p 1 000b p M,DL5000 DNA marker,1,pET32a-MS2 空质粒,2,pET32a-M 500b p d?单酶切;3,pET32a-MS2/Hind?+BamH?双酶切 图 2 重组质粒 pET32a-MS2 的酶切鉴定 250b p 表达载体 pET32a-MS2-EV 的鉴定 M,DL1000 0DNA marker,1,pET32a-MS2-EV,2,pET32a-MS2 将 连 接 产 物 pET32a-MS2-EV 转 化 大 肠 杆 菌 -EV/Hind?单酶切,3,pET32a-MS2-EV/Hind?+BamH?双酶切0 感受态细胞。挑取 4 个单克隆进行 PCR 鉴 图 4 表达载体 pET32a-MS2-EV 的酶切鉴定 3,。取其中 1 个阳性克隆摇菌果均为阳性,图 2.3 病毒样颗粒 RNA 的 RT-PCR质粒分两份,一份用 Hind?和B amH?双酶切, Trizol 法提取病毒样颗粒的 RNA,分成两份,一 鉴定有约 1 700 bp和 430 bp左右 的目的带,另 份进行 RT-PCR 扩增肠 道病毒 5'-UTR 基因 片段 用 Hind?单酶切,电泳鉴定有约 430 bp左 右的 另外一份不进行反转录,直接 PCR 扩增肠道病毒 带,图 4,。测序结果表明肠道病毒5 '-UTR 基因 5'-UTR 基因片段。电泳结果显示,进行R T-PCR 扩 正 确 克 隆 到 载 体 pET32a-MS2上 , 表 达 载 体 单 军,等,含肠道病毒 5’端非编码区部分核糖核酸序列病毒样颗粒的 构建 terovirus 71 strains isolated in shandong ro vpince, 2007[J] . 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上传时间:2017-11-14
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