牛冷冻精液细菌菌落数检测

牛冷冻精液细菌菌落数检测 牛冷冻精液细菌菌落数检测 ?28?AnimalHusbandry&VeterinaryMedicine2006Vo1.38No.10 牛冷冻精液细菌菌落数检测 陆汉希 (南京农业大学动物科技学院,江苏南京210095) 摘要:详细介绍了牛冷冻精液细菌菌落数检测所需设备和材料,培养基和试剂,检测程序,操作步骤,注意事项等内容.该检测方法既方便又准 确且行之有效.此法还可用于其他家畜冷冻精液细菌菌落数的检测. 关键词:牛;冷冻精液;菌落;检测 中田分类号:$823.3文献标识码:B文章编号:0529-5130(2006)lO-0028-02 菌落总数测定用来判定牛冷冻精液被细菌污染的程度及卫 生质量,它反映冻精在生产过程中是否符合卫生要求,以便对 被检样品作出适当的卫生学评价.菌落总数的多少在一定程度 上标志着冻精卫生质量的优劣. 当被检冻精与培养基混合,在一定培养条件下,每个能够 生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落.菌 落总数就是指在一定条件下(如需氧情况,营养条件,pH, 培养温度和时间等)每剂冻精检样所生长出来的细菌菌落总 数.按国家 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 方法 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 ,在需氧情况下,37cc培养48h, 每剂冻精检样在普通营养琼脂平板上所生长的细菌菌落总数. 厌氧或微需氧菌,有特殊营养要求的以及非嗜中性的细菌,由 于现有条件不能满足其生理需求,故难以繁殖生长.因此菌落 总数并不表示实际中的所有细菌总数,同时菌落总数并不能区 分其中细菌的种类,所以菌落总数有时被称为杂菌数,需氧菌 数等. 收稿日期:2006-O1+14 作者简介:陆汉希(1961-),男,高级畜牧师. "牛冷冻精液国家标准"对牛冷冻精液中细菌菌落数有 严格的要求,即每一剂量中不得超过1000个(即将公布的新. 标准为800个).原"牛冷冻精液"标准细菌菌落总数检测方 法较烦琐,不便操作,加之生产单位对此项工作没有引起足够 的重视,从而导致了这项检测工作在基层公牛站,牛场没有很 好地开展.这对牛冻精的使用者及母牛安全造成了隐患.制订 一 套既方便又准确的牛冻精细菌菌落数检测方法在生产和检验 工作中十分必要,为此我们探索出了一套行之有效的检测方 法.此法还可用于其他家畜冷冻精液细菌菌落数的检测. 1设备和材料 恒温培养箱,超净化工作台,冰箱(0—4?),恒温水浴 箱,天平,电炉,石棉网,三角烧瓶(容量为250mL),平皿 (直径为90mm),酒精灯,打火机,放大镜,菌落计数器,细 管剪,细管专用推针,棉绳,粗棉花,脱脂棉,牛皮纸,量 筒,称量纸,角匙,记号笔,电热压力蒸汽消毒器. 营养琼脂培养基:按GB4789.28-94中4.7规定…(医药 商店有成品出售),75%乙醇. 异较大,这是因为相关系数既包括2个变量的直接影响也包含 了间接影响,所以简单的相关系数不能真实地反映各性状之间 的内在联系,而通径分析可以真正地反映出2个性状之间的密 切程度. 2.4多元逐步回归分析 经过多元逐步回归分析中向前选择,向后淘汰和最大相关 法均得到同一最优回归方程:多=0.00128+1.00000x4+ 0.99996x-0.00003x6.回归模型经方差分析结果为极显着 (:P<0.01),复相关系数为0.9999,说明拟合的多元回归 方程准确度较高. 3讨论与结论 仙湖肉鸭活重,屠宰率和全净膛率的变异系数较小,这3 个性状的遗传稳定性和群体均匀度较高;而胸肌率,腿肌率, 皮脂率和瘦肉率等性状具有较大的改良提高潜力. 对49日龄瘦肉率影响效果是腿肌率>胸肌率>皮脂率, 腿肌率,胸肌率与瘦肉率呈强的正相关,皮脂率与瘦肉率则呈 中等负相关.因此,在肉鸭的育种实践中,为了提高瘦肉率, 应把提高腿肌率,胸肌率作为主要的育种目标,降低皮脂率 次之. 筛选变量后构建的多元回归方程为:多=0.00128+ I.000OOx4+0.99996x5—0.00003x6,方程准确度很高(为 0.9999),回归模型经方差分析结果极显着(P<0.O1). 参考文献: [1]景栋林.陈海星.仙湖鸭的繁殖行为规律研究[J].畜牧与兽 医,2005,37(1O):29-30. [2]杨宁.家禽生产学[M].北京:中国农业出版社.2002; 289-292. [3]唐启义,冯明光.实用统计分析及其数据处理系统[M].北 京:科学出版社,2002:294~10. 畜牧与兽医2006年第38卷第l0期?29? 2检测程序 菌落总数的检验程序基本操作一般包括:样品的解冻—倾 注平皿一培养48h一计数 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 . 3操作步骤 3.1准备 预先调整好下列仪器设备:培养箱温度调节至(36? 1)?;其中一台水浴箱调节至(37?1)?,用于解冻细管冷冻 精液,另一台水浴箱调节至(4|6?1)?,使存放于此经消毒 熔化后的营养琼脂降至(46?1)?待用;培养皿(可买已消 毒一次性使用的成品,这样可减轻好多工作量),酒精灯,酒 精棉球,打火机,记号笔,细管剪,细管专用推针等用具提前 放入超净化工作台内消毒. 3.2蕾养琼脂的制备 取营养琼脂培养基粉31g,加蒸馏水1000mL,加热煮沸 至完全溶解,分装经121?15min灭菌后备用. 3.3冷冻精液的解冻 从液氮罐中取出待检样品,迅速放人已盛有液氮的小型泡 沫盒或保温杯内,取一支细管冻精迅速泡入水浴中并晃动,待 溶解后立即取出,擦干细管水珠,待用.每一样品解冻二支, 发现爆管,裂管,漏管应废弃,另取冻精解冻. 3.4精液注入平皿 在超净化工作台内,点燃酒精灯,平皿盖盒面上用记号笔 标记上牛号,用酒精棉球擦抹整支细管,细管剪在酒精灯上来 回烘烤几下,剪去超声波封I=I端,用细管推针将整支细管的精 液注入灭菌平皿内.解冻后的细管,如发现超声波封口端有精 液,可抓住超声波封口端用力摔几下,使超声波封口端留出一 个完整的空腔,经这样操作后被剪去的一端不会留有精液,确 保整支精液注入平皿. 3.5平皿内加入适量营养琼脂 精液注入平皿后,应及时将凉至46?的营养琼脂培养基 (可放置于46??1?水浴保温)注入平皿约15mL,并转动 平皿使其混合均匀.同时将营养琼脂培养基倾入灭菌平皿内作 一 空白对照. 待琼脂凝固后,翻转平板.置(36?1)?恒温培养箱内 培养(48?2)h. 3.6菌落计数方法 做平板菌落计数时,应在光线较强处(如窗户旁),可用 肉眼观察.手持记号笔,见一个菌落在平皿表面点一下并默记 菌落个数.为便于观察可在平皿下垫一张有色的纸,也可用手 掌.平皿表面必须清洁,其表面粘附的粉尘极易被误认为菌 藩,此时可用手抹一下.如能抹掉者.就不是菌落,抹不掉 的,必要时用放大镜检查,以防遗漏.平板菌落计数时也可用 菌落计数器计数. ,.7平板菌落数的选择 一 个样品使用2个平板,应采用2个平板平均数.其中一 个平板有较大片状菌落生长时.则不宜采用,而应以无片状菌 落生长的平板作为该样品的菌落数;若片状菌落不到平板的一 半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘 以2以代表全皿菌落数.平皿内如有链状菌落生长时(菌落之 间无明显界线),若仅有一条链,可视为一个菌落;如果存在 不同来源的几条链,则应将每条链作为一个菌落计. 当计数平板内的菌落数过多(大于300时),但分布很均 匀,可取平板的一半或1/4计数.再乘以相应的2或4作为该 平板的菌落数.到达规定培养时间,应立即计数.如果不能立 即计数,应将平板放置于(0,4)?的冰箱内,但不得超过 24h. 3.8菌落数的报告 一 份样品的2个平板内菌落平均数就是该份样品每支细管 冷冻精液内的细菌菌落数. 4注意事项 操作中必须有"无菌操作"的概念,所用玻璃器皿必须 是完全灭菌的,不得残留有细菌或抑菌物质.所用细管剪,细 管专用推针等器具也必须进行消毒处理. 操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行.琼 脂平板在工作台暴露15min,每个平板不得超过l5个菌落. 倾注用培养基应在4|6?水浴内保温,温度过高会影响细 菌生长,过低琼脂易于凝固而不能与精液充分混匀.如无水 浴,应以皮肤感受较热而不烫为宜. 倾注培养基的量规定不一,从l2—20mL不等,一般以 15mL较为适宜.平板过厚可能影响观察,太薄又易于干裂. 倾注时,培养基底部如有沉淀物,应将底部弃去,以免与菌落 混淆而影响计数观察. 为使菌落能在平板上均匀分布,精液加入平皿后,应尽快 倾注培养基并旋转混匀,可正反2个方向旋转,检样从开始注 入平皿到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min,以防止 细菌有所死亡或繁殖. 培养温度一般为37ac,培养时间一般为48h,培养箱应 保持一定的湿度,琼脂平板培养48h后,培养基失重不应超 过15%.为避免水份的过份蒸发,可在培养箱内放置一个存 有水的烧杯. 为了避免细管中的微小颗粒或培养基中的杂质与细菌菌落 发生混淆,不易分辨,可同时作一不加任何东西的琼脂培养基 平板,不经培养,而于4?环境中放置,以便计数时作对照 观察. ' 在某些场合,为了防止细管冷冻精液中的小颗粒与菌落混 淆不清,可在营养琼脂中加入氯化三苯四氮唑(Trc),培养 后菌落呈红色,易于分辨. 参考文献: [1]GB/T4789.2-1994.<中华人民共和国国家标准食品卫生微生 物学检验菌落总数测定>[S]. [2]GB/T4143-1984.<中华人民共和国国家标准牛冷冻精液> [s].