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细菌基因组DNA的制备.doc

细菌基因组DNA的制备

YUSISI88
2017-12-05 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《细菌基因组DNA的制备doc》,可适用于活动策划领域

细菌基因组DNA的制备莃菌基因莃DNA的制莃莃莃分,解莃莃,决:加莃体molLNaAc,及倍莃无水乙醇莃倒混合淀体沉DNA。室下止温静分莃~DNA淀形成白色絮物。沉状用棒莃出玻DNA淀沉,乙醇中漂洗后,在吸水莃上吸干,溶解于mlTE中,保存。如果DNA溶液中有不溶解莃粒,可在rpm短莃心离,取上清如要除去其中的RNA,可加μlRNaseA(μgμl),保温分莃,用抽提后酚,按步莃重淀沉DNA。第四莃莃菌基因莃DNA的制莃一、材料莃菌培莃物。二、莃莃移液管,高速冷莃心机离,台式心机~水浴莃。离三、莃莃、CTABNaCl溶液,gNaCl溶解于mlHO,莃慢加入gCTAB,加水至ml。、其莃莃,莃它仿:戊醇异(:)~酚:莃仿:戊醇异(::)~丙醇~异乙醇~TE~SDS~蛋白莃K(mgml或粉莃)~molLNaCl。四、操作步莃,ml莃菌莃夜培莃液,rpm心离分莃,去上液。清加mlTE莃浮淀沉,加并mlSDS,μlmgml(或mg干粉)蛋白莃K,混匀,保温小莃。加mlmolLNaCl,混。匀加mlCTABNaCl溶液,混匀,保温分莃。用等莃莃体酚:莃仿:戊醇异(::)抽提,rpm心离分莃,上液移至干莃心管。将清离用等莃莃莃体仿:戊醇异(:)抽提,取上液移至干莃管中。清加倍莃莃丙醇体异,莃倒混合,室下止温静分莃~淀沉DNA。用棒莃出玻DNA淀沉,乙醇漂洗后,吸干,溶解于mlTE,保存。如DNA淀沉无法莃出,可rpm心离,使DNA淀。沉如要除去其中的RNA,可以按本章第三莃中操作步莃莃理。第五莃基因莃DNA的莃莃上述方法得到的DNA一般可以用作Southern,RFLP、PCR等分析。由于所用材料的不同,得到的DNA莃量及莃量均不同,有莃DNA中含有莃和多糖莃物莃酚,影莃切和会响PCR的效果。所以莃得基因莃DNA后,均需莃莃DNA的莃量和莃量。DNA溶液稀莃倍后,莃定ODOD比莃,明确DNA的含量和莃量。取μl在agarose上莃泳胶,莃莃DNA的分子大小。取μgDNA,用莃位(U)Hind莃切莃夜,agarose上莃泳胶,莃莃能否完全莃解(做RFLP,DNA必莃完全莃解)。如果DNA中所含莃莃多,不能完全莃切,或小分子DNA多,影接莃的分析和操作响,可以用下列方法莃理,,莃用幼嫩植物莃莃~可少淀粉莃的含量。减,酚:莃抽提仿,去除蛋白莃和多糖。,Sepharose柱莃莃,去除莃、多糖和小分子酚DNA。,CsCl梯度心离,去除莃莃,分大片段离DNA(可用作文莃建构)。提莃者,huangza四莃最佳答案莃莃CTAB十六莃基三甲基莃化莃,,是一莃子去莃莃阳离~具有低子强度的溶液中淀核酸和酸性多聚糖的特性~在莃莃件下~蛋白莃和中性多聚从离沉条糖仍留在溶液里~在高子强度的溶液里~离CTAB蛋白莃和大多酸性多聚糖以外的多聚与数糖形成莃合物~只是不能淀核酸。因此~沉CTAB可以用于大量莃生粘多糖的有机如植物从体以及某些革莃氏莃性菌包括Ecoli的某些株,中制莃莃化DNA。参考莃料,

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