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首页 关于健脾与补肾对脾虚模型大鼠学习记忆及脑内P物质、血管活性肠解读

关于健脾与补肾对脾虚模型大鼠学习记忆及脑内P物质、血管活性肠解读.doc

关于健脾与补肾对脾虚模型大鼠学习记忆及脑内P物质、血管活性肠解读

Lambert钟杰
2019-05-20 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《关于健脾与补肾对脾虚模型大鼠学习记忆及脑内P物质、血管活性肠解读doc》,可适用于职业教育领域

关于健脾与补肾对脾虚模型大鼠学习记忆及脑内P物质、血管活性肠肽的影响【摘要】目的探讨脾虚模型大鼠学习记忆和脑内P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)的变化,以及健脾、补肾中药对上述变化的改善作用。方法采用苦降泻下、饮食失节加劳倦过度法建立脾虚大鼠模型,检测健脾与补肾对其学习记忆及脑内SP、VIP变化的影响。结果水迷宫实验学习期和记忆期,模型组游全程时间长,错误次数多健脾组与补肾组游全程时间短,错误次数少。跳台实验学习期和记忆期,模型组错误次数较多,潜伏期短健脾组错误次数较少,潜伏期长在学习期补肾组错误次数较少,潜伏期较长,但记忆期错误次数较多()。模型组SP免疫阳性反应物在下丘脑腹侧核、海马CA区、前额叶皮层显著减少健脾组在上述脑区则显著增加补肾组海马CA区和前额叶皮层明显增加,但在下丘脑腹侧核减少。模型组VIP免疫阳性反应物在海马CA区、前额叶皮层显著减少健脾组与补肾组海马CA区、前额叶皮层VIP免疫阳性反应物显著增加。结论脾虚模型大鼠学习记忆及脑内对学习记忆有促进和增强作用的SP、VIP明显下降。健脾、补肾中药对上述变化有明显改善作用。【关键词】脾虚模型大鼠学习记忆P物质血管活性肠肽Abstract:ObjectiveToinquireintothechangesoflearningandmemoryabilityandthelevelofSP,VIPinthebrainofthemodelofSpleeninsufficiencyToobservetheinfluenceinvigoratingspleenandrestoringvirilityonabovechangesMethodsEstablishingthespleeninsufficiencymodelofratbyadoptingbitterdeclinediarrhea,wildeatingandoverworking,toexamineinfluenceofinvigoratingspleenandrestoringvirilityontheabilityoflearningandmemorywiththechangeofSPandVIPinthebrainResultsIntheperiodofstudyandrememberofthewatermazeexperiment,theswimwholedistancetimewaslongandmistakenumberwasmanyinthemodelgrouptheswimwholedistancetimewasshortandthemistakenumberwaslittleinthegroupofinvigoratingtheSpleenandrestoringvirilityIntheperiodofstudyandrememberofthedivingplatformexperiment,themistakenumberoftimesismoreandtheincubationperiodwasshortinthemodelgroupthemistakenumberwaslessandtheincubationperiodwaslonginSpleeninvigratinggroupAttheperiodofremembermistakenumberwasmoreInthemodelgroup,theimmunoreactionmasculinesubstanceofSPleveldecreaseobviouslyinthehypothalamusventralkernel,thehippocampiCAareaandforehandcortexonabovementionedparts,thegroupofinvigoratingspleenandrestoringvirilityincreasesdistinctly,inthegroupofrestoringvirilityincreasesdistinctlyinthehippocampiCAareaandforeheadcortex,butdecreasedinhypothalamusventralkernelInthemodelgroup,theimmunoreactionmasculinesubstanceofVIPleveldecreasedobviouslyinthehippocampiCAareaandcortexonabovementionedparts,thegroupsofinvigoratingspleenandrestoringvirilityincreasesobviouslyConclusionInthemodelgroup,theabilityoflearingandmemorywithSPandVIPlevelinthebrainchangedInvigoratingspleenandrestoringvirilitycanimproveabovechangesremarkablyKeywords:modelofinsufficiencySpleenlearningandmemorySPVIP中医学认为,脾为后天之本,气血生化之源,藏意主思。肾为先天之本,主藏精,藏志。《灵枢本神》提出:“脾藏营,营舍意”,“肾藏精,精舍志”(医药学临床医学论文)。脾与肾在神志活动中具有重要作用,而且脾与肾先天与后天相互资生,相互促进。本实验观察脾虚模型大鼠学习记忆和对学习记忆有促进和增强作用的P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)的变化,以及健脾、补肾中药对上述变化的改善作用。材料和方法实验动物及分组清洁级雄性Wistar大鼠,体重(±)g,北京维通利华实验动物技术有限公司提供。常规适应性饲养周后,只大鼠随机分成正常组、模型组、健脾组、补肾组,每组各只。实验药物配制造模药物由大黄、厚朴、枳实组成,按∶∶配备。健脾方为归脾汤原方补肾方为六味地黄丸原方。以上方药分别常规煎煮、过滤,常规浓缩为gmL药液,冰箱储存备用。仪器水迷宫实验装置跳台仪OLYMPUS光学显微镜(日本)OLYMPUS自动显微镜照相系统(日本)DHAB电热恒温培养箱(天津)TS脱色摇床(北京)BDS电热三用水浴箱(北京)DHGA电热恒温鼓风干燥箱(上海)Leitz切片机(德国)。主要试剂SP免疫组化试剂盒(SP抗,多克隆兔抗)与VIP免疫组化试剂盒(VIP抗,多克隆兔抗)由博士德生物公司提供正常羊血清、HO、抗(生物素标记的IgG)、抗(ABC复合物)、PBS枸橼酸钠、二氨基联苯胺(DAB)购自北京中山生物公司多聚甲醛购自北京鼎国生物公司蛋白酶K为Sigma公司产品。其他试剂均为国产分析纯。造模采用苦降泻下、饮食失节加劳倦过度法造模。造模组每只每日灌胃造模药mL,隔日禁食,自由饮水,每日于℃水中游泳至力竭。健脾组为造模处理加胃饲归脾汤补肾组为造模处理加胃饲六味地黄丸。每日上午对除正常组外的各组胃饲造模药,正常组予等量生理盐水下午健脾组、补肾组分别胃饲相应中药,mLd。连续周。并观察大鼠活动状态、排便、进食量、体重等。水迷宫实验水迷宫水深cm,水温(±)℃,该装置共设个盲端,终点设有台阶,动物通过台阶可上岸躲避溺水的危险,检测前先进行训练。训练时先将动物放在终点梯子附近,让其自行爬上次。全部训练分三阶段进行。第一阶段:用挡板挡在A处,使动物学习从该处游至终点。第二阶段:用挡板挡在B处,由此开始训练。第三阶段:从起点开始训练。每阶段训练次,可用指示棒适当予以诱导,休息h后再进行下一阶段训练。全部训练完毕后使大鼠休息h,再将其放于爬梯附近,使其自行爬上次,然后放于起点处,记录大鼠游全程时间和错误次数作为学习成绩。min不能游出者按min计。h后重复测试,作为记忆成绩。跳台实验实验装置是一cm×cm×cm的大鼠跳台反应箱,分为两间,箱底为可通v连续电刺激的铜栅。每间右后角置一直径和高均为cm的橡皮垫,作为大鼠回避电击的安全区。实验时先将大鼠置于跳台仪中,适应环境min,然后底部铜栅通以V交流电,动物受到电击的正常反应是跳上平台以躲避伤害性刺激,如此训练min,并记录动物受到电击的次数称错误次数,作为学习成绩。h后将大鼠置于跳台仪中适应min,再将其置于橡皮垫上,记录第次跳下橡皮垫的潜伏期和min内的错误次数,作为记忆成绩。标本的采集与制备大鼠经水合氯醛(mLg体重)麻醉后,打开胸腔,暴露心脏,经左心室插管至升主动脉,灌注预冷的生理盐水,然后灌注预冷的多聚甲醛溶液取脑,蒸馏水漂洗,置多聚甲醛溶液后固定min常规石蜡包埋。石蜡切片机冠状连续切片,片厚μm,常温保存备用。免疫组化方法按照SP、VIP试剂盒使用说明操作。光镜观察及图像处理利用OLYMPUS显微镜和真彩色病理图像分析系统版进行图像采集和处理,测量海马CA区、前额叶皮层、下丘脑腹内侧核SP、VIP免疫阳性反应物的平均光密度,每组切片的每个部位测个视野。统计学方法结果均采用SPSS统计软件分析,所用数据用x±s表示,组间差异采用方差分析及q检验。转贴于免费论文下载中心结果各组大鼠的状态和体征变化模型组从造模第天起,逐渐出现倦怠懒动、拱背、扎堆、眯眼或颤抖等,皮毛疏松粗糙无光泽,毛色发黄、易脱落,足蹼、鼻尖、耳缘黏膜色变淡,身体开始消瘦,肛门周围充血、湿润,大便稀溏,此后时干时溏,拉尾排便试验呈阳性。正常组大鼠反应灵敏、动作灵活,皮毛白而有光泽,皮肤黏膜红润,饮食量、饮水量多,体重呈直线上升。健脾组在处理的第周表现同模型组大鼠,但以后症状逐渐减轻,体重逐渐回复增长。补肾组表现与模型组相似,但其活动较灵活,反应较灵敏。学习记忆能力观察结果(见表、表)表各组大鼠水迷宫学习成绩比较(略)注:与正常组比较,**P<(下同)。表各组大鼠水迷宫记忆成绩比较(x±s)跳台实验观察结果(见表)表各组大鼠跳台实验成绩比较(x±s)SP、VIP免疫组化检测结果(见表、表)表各组大鼠脑内SP免疫阳性反应物平均光密度比较(x±s)表各组大鼠脑内VIP免疫阳性反应物平均光密度比较(x±s)讨论苦降泻下、饮食失节加劳倦过度法是较有代表性的造模要素,本实验采用制备大鼠脾虚模型的方法属于多因素造模,是目前应用较广泛的脾虚模型。肾藏精生髓,精盛髓充则脑健聪慧。如《素问遗篇刺法论》所称:“精气不散,神守不分。”只有积精才能全神。精亏则神疲,智力减退。脾为后天肾为先天,先后天相互资生。《景岳全书脾胃》说:“水谷之海,本赖先天为之主而精血之海,又赖后天为之资。”归脾汤具有益气补血、健脾养心之功,但以健脾为主,临床治疗由脾虚引起的健忘、失眠、怔仲等神志疾病时多使用归脾汤。六味地黄丸为补肾之基础方,近来研究表明,六味地黄汤可改善快速老化模型小鼠(SAM)学习记忆能力,并显著减少该模型血浆皮质酮水平,发挥益智作用。本研究结果表明,模型组在水迷宫中游全程时间较长,错误次数较多,潜伏期时间较短,说明脾虚大鼠的学习记忆能力降低,出现认知功能的变化。而健脾组与补肾组游全程时间较短,错误次数少潜伏期时间较长跳台实验学习期和记忆期,模型组错误次数较多,潜伏期短健脾组错误次数较少,潜伏期长在学习期补肾组错误次数较少,潜伏期较长,但记忆期错误次数较多。表明归脾汤对脾虚模型大鼠学习记忆能力与认知功能变化有明显改善作用六味地黄丸也有相似改善作用。腹腔内注射SP可促进学习功能的保持,将SP直接注射到基底核能促进并加强记忆。本实验研究发现,SP在脾虚大鼠海马CA区、前额叶皮层和下丘脑腹侧的免疫阳性反应物平均光密度均减少,提示脾虚模型大鼠学习记忆能力的下降与脑内SP的改变有关。健脾组在上述脑区免疫阳性反应物平均光密度显著增加补肾组海马CA区和前额叶皮层免疫阳性反应物平均光密度明显增加,提示归脾汤对脾虚大鼠学习记忆能力的改善作用与其对上述脑区SP的调节影响有关六味地黄丸也有相同作用,但对SP的调节影响主要部位可能在海马和皮层。VIP对东莨菪碱诱导的空间识别障碍有改善作用,转基因小鼠脑内VIP水平较低学习发生障碍。本实验研究发现,VIP在脾虚大鼠海马CA区、前额叶皮层的免疫阳性反应物均减少,推测脾虚模型学习记忆能力的下降与脑内VIP的改变有关。健脾组与补肾组海马CA区、前额叶皮层VIP免疫阳性反应物平均光密度与正常组相比无显著差异但在下丘脑腹侧核模型组、健脾组与补肾组平均光密度与正常组相比均无显著差异。提示归脾汤与六味地黄丸对脾虚大鼠学习记忆能力的改善作用与其对脑内VIP的调节有关。【参考文献】陈小野脾气虚证动物模型初步规范化的造模方法和思路J中国中医基础医学杂志,,():何淑娥,邵枫,牛侨,等铅染毒大鼠的学习记忆和氨基酸类神经递质的改变J中国行为医学科学,,():程明,朱熊兆学习记忆的行为学研究方法J中国行为医学科学,,():钱会南论脾虚证现代研究的特点与存在问题及对策J中国中医基础医学杂志,,():钱会南,沈丽波,胡雪琴中医脾虚动物模型的实验研究思考J中国药物与临床,,():周建民,张永祥,周金黄六味地黄汤对快速老化模型小鼠(SAM)学习记忆能力的改善作用J中国实验方剂学杂志,,():PelleymounterMA,SchlesingerK,WehnerJ,etalNigralHTandsubstancePinducedenhancementofpassiveavoidanceretentionJRehavBrainRes,,():YamaguchiY,KobavashiHEffectsofvasoactiveintestinalpeptide(VIP)onscopolamineinducedamnesiaintheratJNeuropeptides,,:免费论文下载中心

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