糖肽类抗生素替考拉宁的分析方法研究进展_22462

糖肽类抗生素替考拉宁的分析 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 研究进展_22462 糖肽类抗生素替考拉宁的分析方法研究进展 [标签:来源] 【关键词】 替考拉宁;高效液相色谱;胶束电动毛细管色谱 替考拉宁(teicoplanin)为一种具有10个或11个碳脂肪链，由替考游动放线菌(actinoplane teichomycetictts)发酵产生的一种糖肽类抗生素。替考拉宁是一种复杂的化合物，由五个结构相近化合物TA21、TA22、TA23、TA24、TA25组成(简称TA2),其中TA2-2为主要成分，占各组分相对含量的40%以上。第六个活性物质是TA31，经研究表明，这一物质是TA2成分的去酰基葡萄糖胺产物[1、2] 。 该药物是继万古霉素之后开发的另一种抗耐药菌的糖肽类抗生素，其主要对革兰氏阳性需氧菌和厌氧菌具有较强的抗菌活性，特别是对MRSA所致的感染有很好的疗效，是目前临床上为数不多的对多重耐药性金葡菌和肠球菌仍有抗菌活性的药物之一。与当前国际上公认的抗耐药菌抗生素万古霉素相比，替考拉宁具有与之相似的抗菌活性，相同的作用机制，相近或更优的临床疗效，而毒性反应更低，特别是肾毒性更低，并且具有更方便、更快捷的给药途径，可通过静注或肌注给药。此外，替考拉宁的体内抗菌活性高、半衰期长，具有较持久的抗生素后效应，临床有效率达80%,90%。同时，该药与氨基糖甙类和碳青霉烯类抗生素联合应用时，对绝大多数革兰氏阳性菌有协同杀菌作用[3]。因此，对替考拉宁的研究具有重要的经济价值和应用前景。已报道的用于替考拉宁含量测定的方法主要有高效液相色谱法、LCMS法、胶束电动毛细管色谱法、以及微生物检定法等。其中高效液相色谱法具有分离效率高、选择性好、分析速度快、操作自动化、应用范围广等优点，同时应用于替考拉宁的体内和体外的含量测定。LCMS法可通过探讨样品中各组分的质谱特征和裂解规律，从而确定各个组分，并进行定性和定量的分析。而胶束毛细管电泳法凭借其无需有机溶媒、费用低、没有环境污染等独特优点在替考拉宁抗生素的含量测定中也有尝试。以下是对上述各分析方法应用状况的概述。 1 高效液相色谱法 用HPLC对血、尿、脑脊液等生物样品中的替考拉宁含量进行测定时，分析前需经过一系列处理以除去其中的蛋白质和其他内源性杂质等。在已报道的文献中，样品预处理的方法有加入氯仿作为有机溶剂提取剂进行提取后，取上清液作为待测样品[4]。还有加入乙腈作为沉淀蛋白剂进行沉淀蛋白操作后，离心分离，取上清液作为待测样品[5]。 测定替考拉宁的分析色谱柱多采用反相的C8和C18柱，其中C18柱更为常用。填料粒径多为5μm，柱长一般为15,25cm，直径为3.9,4.6mm。也有文献报道该药物含量测定中所用色谱柱为1mm的微孔径柱，其目的在于提高灵敏度，降低死体积[6]。在报道的文献中采用梯度洗脱的方式较多，其优点是分离度高，能分离得到除TA2以外的组分。但这种洗脱方式对灵敏度的要求较高，低浓度样品测定较困难，并且每测定一个样品都需要重新平衡色谱柱，较费时。因此在后期临床药学研究中建立了一些等度洗脱的方法，该方法因其虽然分离度较差但简便快速，因此在治疗药物监测中被广泛采用。鉴于该药物的长共轭结构， 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 器多选用紫外检测器，波长范围在210,277nm。现就部分测定替考拉宁浓度时的HPLC方法的具体条件见表1。表1 常用于替考拉宁含量测定的高效液相色谱法 2 胶束电动毛细管色谱法 胶束电动毛细管色谱(MECC)是今年发展起来的一种以高场电压为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分滴度和分配行为的差异来实现组分分离的一类液体分析技术，其同时兼有电泳和高效液相色谱的特点。MECC的原理是同时基于胶束增溶和电动迁移，此分析方法所具备的一个显著特点是可用于分离中性分子。其优点是分析速度快，分辨率高，样品预处理简单，在药物分析中具有很好的应用前景。 殷伟等将该法应用于测定替考拉宁中的6个主要成分，为该药的质量控制和稳定性研究提供了一种新方法。他们以十二烷基磺酸钠(SDS)为表面活性剂，并将其加入pH9.35的硼酸盐:磷酸二氢钠缓冲液中，当SDS的浓度超过临界胶束浓度时，即形成胶束。由于不同的溶质在两相间的分配系数不同，从而增加了溶质分离的选择性。此法电泳在30?、30kV的条件下进行，紫外检测波长为214nm，色谱柱为未涂层的石英毛细管柱(67cm×50μm)。实验后发现该测定方法简便、快速，峰形良好，分离度高，无需有机溶媒、费用低、没有环境污染等优点[11]。 3 LCMS法 液相色谱-质谱(LCMS)联用技术自20世纪70年代进行开创性研究工作以来，经过20多年的发展应用日益广泛。该分析方法集液相色谱的高分离效能与质谱的强鉴定能力于一体，对研究对象不仅有足够的灵敏度和选择性，同时还能够给出一定的结构信息，分析快速而且方便。其基本原理是将液相色谱作为分离系统，质谱作为检测系统。样品在色谱部分经分离后，经接口部分被离子化，之后经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，最终在检测器得到质谱图。其中接口是LCMS的关键部分。 祝仕清等应用LCMS和LCMS/MS分析替考拉宁中的主要组分，探讨该混合物各组分的质谱特征和裂解规律，确定各个组分，定性定量分析该混合物，为控制产品的质量提供可靠的数据。其中色谱条件:C18色谱柱(4.6mm×250mm);流动相:A相为15mmol/L乙酸铵(pH6.0);B相为乙腈;流速为1.0ml/min;梯度洗脱。质谱条件:采用单级四级杆质谱，以电喷雾电离源(ESI)作为接口部分，电离电压为3.0kv，离子源温度设定为115?，进入质谱的分流比为5:1[12]。 4 微生物检定法 微生物检定法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 ，通过检测抗生素对微生物 的抑制作用，计算抗生素活性(即效价)的方法。抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。根据文献报道，其中的管碟法被应用于替考拉宁抗生素的测定。 管碟法利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。陈悦等人应用管碟法测定替考拉宁的含量，按照05版中国药典第二部附录?的方法要求，选用如下实验条件:培养基，?号，pH6.5 6.6;缓冲液:磷酸盐缓冲液，pH6.0;检定菌:枯草芽孢杆菌[CMCC(CB)63501];培养温度:(36?1)?;培养时间:14-15h。由该法所得的实验结果表明，所得的抑菌圈大小适中、边缘清晰、反差明显，有利于测量仪扫描，而且该法的重现性和回收率亦较好，表明该方法完全适用于替考拉宁的含量测定[13]。 5 结 语 综上所述，目前对替考拉宁的含量测定主要有高效液相色谱法、胶束电动毛细管色谱法、微生物检定法、以及LCMS法。其中，高效液相色谱法分离效能高、应用范围广，是替考拉宁的主要含量测定手段。而LCMS凭借其具有集色谱的高分离效能与质谱的强鉴定能力于一体的特点，对研究对象不仅有足够的灵敏度、选择性，同时还能够给出一定的结构信息，在含量测定方面的应用也越来越广泛。作为目前研究较多的色谱新方法，胶束毛细管电泳法(MECC)没有在HPLC法中存在的传质阻抗、涡流扩散等会使柱效降低的因素，纵向扩散也因毛细管壁双电层的存在而受到抑制，因而能够达到很高的理论踏板数和很好的分离效能，在经济性和实用性方面显示了巨大的优势。而作为抗生素类药物特有的含量测定方法，微生物检定法具有方便、快速、非破坏、无污染等绿色分析技术的优点。 【参考文献】 [1] Angelo Borghi,Piero Antonini,Margherita Zanol,et al.Isolation and structure determination of two new analogs of teicoplanin,a glycopeptide antibiotic[J].J Antibiotic(Tokyo),1989,42(3):361. [2] 夏振强，古 勇，官家发.糖肽类抗生素替考拉宁研究进展[J].天然产物研究与开发,2005,17(2):247. [3] 郑 波，李家泰.糖肽类抗生素替考拉宁的研究进展[J].中国临床药理学杂志,1999,15(1):63. [4] 艾又生，徐楚鸿，陈志祥，等.高效液相色谱法测定替考拉宁的血药浓度[J].中国医院药学杂志,2005,25(3):254. [5] Joos B，et al.Antibomicrob Agents Chemother.1987,31(8):1222. [6] Countant J，et al.J Chromatogr Biomed Appl,1990;529(2):265. [7] 杨 红，秦川萍.HPLC法测定替考拉宁组分和有关物质[J].中国抗生素杂志,2006,31(3):184. [8] 蒋 沁，倪会敏，石 磊，等.HPLC法快速检测发酵液中替考拉宁含量[J].天津药学,2006,18(2):21. [9] 付 靖，刘 崧，暴 娜，等.高效液相色谱法检测替考拉宁组分及其有关物质[J].河北化工,2006,29(8):62. [10]Borghi A，et al.J Antibiot,1984,37(6):615. [11]殷 伟，牛长群，祝仕清，等.胶束电动毛细管色谱法分析替考拉宁[J].中国抗生素杂志,2008,33(9):564. [12]祝仕清，牛长群.替考拉宁中主要成分的LCMS法测定[J].分析测试学报,2008,27(增):23. [13]陈 悦，汪素岩，胡功允.微生物检定法测定替考拉宁及注射用替考拉宁的含量[J].中国药学杂志,2002,37(4):302.