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粗多糖的测定.doc

粗多糖的测定

愤怒的绵羊mm乐园
2017-10-07 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《粗多糖的测定doc》,可适用于活动策划领域

粗多糖的测定粗多糖的测定:、方法提要食品中相对分子质量×的高分子物质在乙醇溶液中沉淀与水溶液中单糖和低聚糖分离用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖用苯酚硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比以此计算食品中粗多糖含量。、主要仪器()分光光度计()离心机(rmin)()旋转混匀器、试剂本方法所用试剂除特殊注明外均为分析纯所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。()乙醇溶液():ml水中加入无水乙醇mL混匀。()NaOH溶液(gL):称取g氢氧化钠加水溶解并稀释至L加入固体无水硫酸钠至饱和备用。()铜试剂储备液:称取gCuSO•HOg柠檬酸钠加水溶解并稀释至L混匀备用。()铜试剂溶液:取铜试剂储备液mL加水mL混匀后加入固体无水硫酸钠g并使其溶解。临用新配。()洗涤剂:取水mL加入mL铜试剂溶液、mL氢氧化钠溶液混匀。()硫酸溶液():取mL浓硫酸加入到mL左右水中混匀冷却后稀释至L。()苯酚溶液(gL):称取精制苯酚g加水溶解并稀释至mL混匀。溶液置冰箱中可保存个月。()葡聚糖标准储备液:准确称取相对分子质量x已干燥至恒重的葡聚糖标准品g加水溶解并定容至mL混匀置冰箱保存。此溶液mL含mg葡聚糖。()葡聚糖标准使用液:吸取葡聚糖标准储备液mL置于mL容量瓶中加水至刻度混匀置冰箱中保存。此溶液mL含葡聚糖mg。、测定步骤()样品处理a、样品提取:取胶囊内容物g混匀置于mL容量瓶中加水mL左右于沸水浴上加热h冷却至室温后补加水至刻度混匀后过滤弃去初滤液收集余下滤液供沉淀多糖。b、沉淀粗多糖:准确吸取a项终滤液mL或液体样品以rmin离心min弃去上清液。残渣用(体积分数)乙醇溶液数毫升洗涤离心后弃上清液反复操作~次。残渣用水溶解并定容至mL混匀后供沉淀葡聚糖。c、沉淀葡聚糖:准确吸取b项终溶液mL置于mL离心管中加入gL氢氧化钠溶液mL铜试剂溶液mL沸水浴中煮沸min冷却以rmin离心min弃去上清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤离心后弃去上清液反复操作次残渣用(体积分数)硫酸溶液mL溶解并转移至mL容量瓶中加水稀释至刻度混匀。此溶液为样品测定液。()标准曲线的绘制:准确吸取葡聚糖标准使用液、、、、、、mL(相当于葡聚糖、、、、、、mg)分别置于mL比色管中准确补充水至mL加入gL苯酚溶液mL在旋转混匀器上混匀小心加入浓硫酸mL于旋转混匀器上小心混匀置沸水浴中煮沸min冷却后用分光光度计在nm波长处以试剂空白溶液为参比cm比色皿测定吸光度值。以葡聚糖为横坐标吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。()样品测定:准确吸取样品测定液mL置于mL比色管中加入gL苯酚溶液mL在旋转混匀器上混匀小心加入浓硫酸mL于旋转混匀器上小心混匀置沸水浴中煮沸min冷却至室温用分光光度计在nm波长处以试剂空白为参比cm比色皿测定吸光度值。从标准曲线上查出葡聚糖含量计算样品中粗多糖含量。同时做样品空白实验。、计算结果(m,m)×V×V×VX=m×V×V×V式中X样品中粗多糖含量(以葡聚糖计)(mgg):m样品测定液中葡聚糖的质量(mg)m样品空白液中葡聚糖质量(mg)m样品质量(g)V样品提取液总体积(mL)V沉淀粗多糖所用样品提取液体积(mL)V粗多糖溶液体积(mL)V沉淀葡聚糖所用粗多糖溶液体积(mL)V样品测定掖总体积(mL)V测定用样品测定溶液体积(mL)。、准确度与精密度在不同食品中进行不同浓度的加标回收实验回收率为,不同实验室对同一样品进行次测定结果的相对标准偏差为

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