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一种新型基因传输载体-磷酸钙纳米颗粒用于肿瘤基因治疗的研究.doc

一种新型基因传输载体-磷酸钙纳米颗粒用于肿瘤基因治疗的研究

性感致命朱丽叶 2017-12-20 评分 0 浏览量 0 0 0 0 暂无简介 简介 举报

简介:本文档为《一种新型基因传输载体-磷酸钙纳米颗粒用于肿瘤基因治疗的研究doc》,可适用于影视/动漫领域,主题内容包含一种新型基因传输载体磷酸钙纳米颗粒用于肿瘤基因治疗的研究一种新型基因传输载体磷酸钙纳米颗粒用于肿瘤基因治疗的研究第l卷第l期年月中国现代医学杂志Ch符等。

一种新型基因传输载体磷酸钙纳米颗粒用于肿瘤基因治疗的研究一种新型基因传输载体磷酸钙纳米颗粒用于肿瘤基因治疗的研究第l卷第l期年月中国现代医学杂志ChinaJournalofModernMedicineVoNoSep文章编号:()一种新型基因传输载体一磷酸钙纳米颗粒用于肿瘤基因治疗的研究杨菊云,,刘霆,,陈玉祥z,张俊仪,,赵颜忠,文淑萍,杨宜华(中南大学湘雅医院,湖南长沙中南大学生物科学与技术学院,湖南长沙中南大学湘雅医院耳鼻喉科,湖南长沙)论着摘要:目的研究新型非病毒栽体磷酸钙纳米颗粒的生物学特性,评估其在肿瘤基因治疗中应用的前景方法化学方法制备,氯化钙修饰纳米颗粒,用琼脂糖凝胶电泳分析磷酸钙纳米颗粒与DNA的结合效率及对DNA的保护作用,用绿色荧光蛋白基因作报告基因,将磷酸钙纳米颗粒为基因栽体转染鼻咽癌(CNE)细胞和在动物体内转染肿瘤细胞以及将磷酸钙纳米与自杀基因yCDglyTK结合,并在体外对鼻咽癌进行基因治疗结果电镜观察证实磷酸钙纳米颗粒进入细胞内,磷酸钙纳米颗粒与DNA结合后,能对DNA起保护作用磷酸钙纳米颗粒作为基因转染的栽体,将绿色荧光蛋白基因导入CNE细胞,用荧光显微镜观察到高水平的绿色荧光蛋白表达体内转染结果显示,纳米介导的基因在肿瘤组织中有很好的表达以磷酸钙纳米为栽体介导自杀基因yCDglyrTK在体外治疗鼻咽癌的实验中显示,在加入Fc后大量的CNE细胞出现死亡结论磷酸钙纳米颗粒具有优良的生物学特性,是有应用前景的基因转染和基因治疗栽体之一关键词:磷酸钙纳米颗粒自杀基因基因治疗非病毒栽体中图分类号:Q文献标识码:ACalciumphosphatenanoparticlesasanovelnonviralvectorincancergenetherapyYANGJuyun,LIUTing,CHENYuxiang,ZHANGJunyi,ZHAOYanzhong,WENShuping~,YANGYihuafXiangyaHospital,CentralSouthUniversity,Changsha,Hunan,PRChinaSchoolofBiosciencesandTechnologies,CentralSouthUniversity,Changsha,Hunan,PRChinaXiangyaHospital,CentralSouthUnive~ity,Changsha,Hunan,PRChina)Abstract:【Objective】Tostudythebiologicalcharacteristicsofcalciumphosphatenanoparticlesandevaluatethepromisingincancergenethempy【Methods】CalciumchloridemodifiednanoparticlespreparedbymeansofchemistryAnalysethecombinationofcalciumphosphatenanoparticlesandDNA,theprotectiontoDNAaswellbygelosegelatinelectrophoresisWhenthegreenfluorescenceproteingenewasregardedasreportgene,genevectorofcalciumphosphatenanoparticlestransfectedCNEcellinvitroandvivoCombinethecalciumphosphatenanoparticlesandsuicidegeneyCDglyTKforNasopharyngealCarcinoma(NPC)thempyinvitro【Results】CalciumphosphatenanoparticleswentintocellandcouldprotectDNAafteritscombinationwithDNAbyelectromicroscopyRegardcalciumphosphatenanoparticlesasvectorofgenetransfection,transductgreenfluorescenceproteingeneintoCNE一cell,thegreenfluorescenceproteinhighexpressionCanbeseenbyfluorescencemicresopyTheresultsoftransfectloninvivoshowedthatgeneintroducedbynanoparticleshadagoodexpressionintumortissueTheresultsoftransductingsuicidegeneyCD~yTKbycalciumphosphatenanoparticlesforNasopharyngealCarcinoma(NPC)thempyinvitroindicatedthatlargenumbersofCNE一cellsweredeadaftertheadditionofFC【Conclusion】收稿日期:【通讯作者】陈玉祥教授,中南大学生物科学与技术学院,,EmaihcyxhotmailcomL:llFax:第期杨菊云,等:一种新型基因传输载体一磷酸钙纳米颗粒用于肿瘤基因治疗的研究CalciumphosphatenanoparticleshasgreatbiologicalcharacteristicsanditisoneofpromisingvectorsofgenetransfectionandgenetherapyKeywords:calciumphosphatenanoparticlessuicidegenegenetherapynonviralvector提高DNA的转化效率是基因治疗的关键传统F一(pluronic),氯化钙,磷酸氢二钠,柠檬酸钠,琼的DNA传递系统分为病毒载体和非病毒载体介导脂糖,购自Sigma公司小牛血清为杭州四季青公司系统,病毒载体主要包括腺病毒,逆转录病毒,腺产品绿色荧光蛋白购自BioRad公司自杀基因相关病毒等逆转录病毒载体能将外源基因稳定的yCDglyTK为本室构建,其它试剂均为市购CNE一插入靶细胞的染色体中,且感染效率较高,但是传统细胞株购自中山医科大学动物中心水,自制纯水的逆转录病毒载体没有组织的特异性,只能感染处符合中国药典年版注射用水项下的要求于分裂期的细胞,且滴度低腺病毒载体虽然也有着方法较高的转染效率,能插入较大的约Kb的基因片磷酸钙纳米颗粒的制备将适当比例的段,但是腺病毒的免疫原性比较强,注射到机体后很摩尔氯化钙,ISDS,F一混合,室温反应并搅快会被机体的免疫系统排斥,如当静脉注射高浓度拌(rmin)h,形成液体A,同时将适当比例的的腺病毒载体时会使肝脏发生严重的炎症反应腺摩尔磷酸氢二钠,柠檬酸钠,ISDS,F一相关病毒虽然有较好的安全性,免疫原性低,但是外混合,室温反应并搅拌h(rrain),形成液体B,原基因容量小,制备复杂,滴度也不高因此,非病h后将B液以每小时mL的速度滴人到A液毒载体如脂质体,阳离子聚合物,纳米等在目前得到中并以rmin速度搅拌,温度控制为cch广泛的研究,在众多的非病毒载体系统中,纳米颗粒后反应产物rmin,离心rain,用乙醇洗脱,由于具有小尺寸效应,表面效应等优势在基因治疗真空抽干后,取纳米颗粒,用去离子水溶解,超声分中最有应用前景研究表明,纳米颗粒在体内的循散h,高压蒸汽灭菌对制备的磷酸钙纳米颗粒混环时问明显长于普通大小的颗粒,在短时间内,不悬液进行颗粒形态,大小,均匀度考察和对其表面进会很快被吞噬细胞清除,从而更多的渗出到血管外,行Zeta电位检测,并按中国生物制品规程(年组织间隙,延长与细胞的接触时问,提高转染效率版)项下进行无菌试验和内毒素检查,全面考察制通常质粒DNA进入血管后很快被核酸酶消化降解,备工艺但纳米基因载体有浓缩,保护DNA功能,与DNA形磷酸钙纳米颗粒一DNA复合体的合成分成一致密的结构,使DNA不被核酸酶消化降解【】别取,和g的磷酸钙纳米颗粒悬液与gDANLUO等利用硅颗粒与脂质体混合后与DNA的DNA混合后,加入L的MCaC溶液,一起转染细胞,发现其转染效率比单纯用脂质体转室温min,离心(eppendorfCentrifugeR离染要高倍ol,CARSTENKNEUER等用二价阳离心机)min,将上清琼脂糖凝胶电泳检测子修饰硅纳米颗粒表面后,发现能与DNA结合,并磷酸钙纳米颗粒对DNA的保护实验将磷且发现结合在颗粒上的DNA能抵抗DNase的作用酸钙纳米g用CaC修饰后与gDNA结…我们设计使用一定浓度的磷酸钙纳米颗粒通过合,室温min,放血清中cc,h后rpm氯化钙修饰后与DNA结合,在保持DNA完整性的formin,沉淀用洗脱液(mmL门LTclDH情况下,制成DNA一磷酸钙纳米颗粒复合体,并进,mmLEDTA,mmL,门LNaC的乙醇行体内,外转染实验,通过复合体吸附在细胞膜上并保存于室温)洗脱次后,用TE(pH)重悬,cc进入细胞内,增加进入细胞内DNA量,提高基因转温育min,将DNA从磷酸钙纳米颗粒上洗脱下来,染的效率并研究了以磷酸钙纳米为载体介导自杀离心后,将上清琼脂糖凝胶电泳检测同时将寡基因yCDglyTK在鼻咽癌的体外治疗中的应用,对DNAg放人b牛血清DMEM,胎牛血其生物安全性,细胞的毒性反应进行了研究清DMEM,cch,产物琼脂糖凝胶电泳材料与方法磷酸钙纳米颗粒一DNA复合体体外转染细胞买验将CNE一细胞,HT细胞按ls接'科种于孔板中,h后,用XDMEM洗脱次,纳十二烷基硫酸纳(SDS),购自Biomol公司,米颗粒一DNA复合体用CaC修饰后,按每一孔转中国现代医学杂志第l卷染绿色荧光蛋白基因PEGFPN表达质粒DNAg,h更换的小牛血清培养,h后荧光显微镜下观察结果,同时以脂质体为对照转染细胞磷酸钙纳米颗粒一DNA复合体体内转染实验BALBC裸鼠(年龄周,g,雌性),购自上海试验动物中心将CNE一细胞消化,收集,记数,用PBS稀释并以细胞LPBS的数量注射到裸鼠的右侧腋下肿瘤体积的测定采用公式:肿瘤体积=长径短径当肿瘤体积达到约mm时,将肿瘤的裸鼠随机分为组,每组只实验组用磷酸钙纳米与报告基因GFP结合(lrg:Ia,g)的复合体直接瘤内注射,对照组用GFP(,磷酸钙纳米分别直接瘤内注射,隔d一次,共两次在最后次注射的h后,断颈处死各组裸鼠,剥离肿瘤并行RTPCR检测RTPCR过程包括:总RNA用Trizol试剂(GIBCO)抽提,逆转录采用AMV逆转录试剂盒(promega),用引物rtGFP(CgA,ATT,CTg,CAg,TCg,ACg,gTA)tGFP(CAT,Yl'g,CCg,gTg,TTC,AAg,TC)扩增GFP的cDNA序列,用引物Bactingg,gTC,AgA,Agg,ACT,CCT,ATg),Bactin(CAg,gCA,gCT,CAT,AgC,TCT,TC扩增人的Bactin基因做内对照磷酸钙纳米颗粒的细胞毒性实验(MTT)用胰蛋白酶分别消化单层培养的CNE一细胞,COS一细胞,用含胎牛血清的DMEM培养基制备成单细胞悬液,以每孔个细胞接种于孔培养板中,每孔体积L,oC,及饱和湿度条件下培养h后,在细胞板孔内分别加人磷酸钙纳米悬液(gmE),纳米一yCDglyTK复合物(gmL:咖L),摩尔的氯化钙(L),以脂质体(咖L)为阳性对照,质粒yCDglyTK(咖L)为阴性对照,继续培养h后,每孔加人M丫r溶液(m咖L)L,继续孵育h,终止培养,吸出孔内培养上清液,每孔加人Ia,LDMSO,振荡min,使结晶物充分溶解后,选择Bin波长,在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值,与试验孔平行设不加细胞只加培养液的空白对照孔调零细胞存活率()用公式{D(样品)D(对照)lx以磷酸钙纳米为载体介导自杀基因yCDgIyTK治疗鼻咽癌实验CNE一,鼻咽癌低分化细胞系,来自中山医科大学试验动物中心,用含的新生牛血清的RMPI培养基(GIBCO)培养,加IUmL青霉素和mg~L链霉素抗菌将CNE一细胞接种培养于rain的皿中,待细胞在皿中生长汇合率达时加人磷酸钙纳米一yCDglyTK复合体(itg:g),h后在皿中加人抗生素G(~gm)继续培养h后,经G筛选的细胞,Neomycin基因抗性克隆形成,挑到孔板中,当孔板中细胞汇合度达,抽提各孔细胞中的总RNA,做RTPCR鉴定yCDglyTK在各单克隆细胞中的表达(所用引物rtCDglyTK(ggg,AgA,TTA,gAg,ggC,AAA,gTg,T)和rtCDglyTK(ACg,gCG,TCg,gTC,ACg,gCA,TAA)扩增yCDglyTK的mRNA,以Bactin基因做内对照),然后筛选出表达yCDglyTK的阳性克隆,并在GftrgmL)条件下维持培养将CNE一细胞和yCDglyTK阳性CNE一细胞移植于孔板(细胞,孔),当细胞汇合度达到t~实验分为四组,分别是yCDglyTK阳性CNE一细胞组,脂质体一yCDglyTK复合体加入到CNE一细胞组,纳米一yCDglyTK复合体加人到CNE一细胞组和CNE一细胞组脂质体ipofectamineTM,Invitrogen)以L孔和yCDglyTK质粒L孔的剂量将其总量混合在一起,室温下min,然后加人到不含血清的细胞培养基中h后,细胞上清换成新鲜的含的正常培养基在将复合体加人到CNE一细胞h后,FC(Ia,gmL)~J人孔板中,继续培养d后,用MTT法(如上所述)分析孔板各孔中细胞的存活率结果磷酸钙纳米颗粒的制备将制备的磷酸钙纳米颗粒(自制):在电镜下观察见分散较均匀,针状大小在Bin的颗粒见图la,b,图,连续批样品的形态,大小,均匀度检查无明显的差异,无细菌污染,内毒素符合生物制品规程的要求zeta电位检测显示经氯化钙修饰的磷酸钙纳米颗粒其表面所带电荷为mv见图磷酸钙纳米颗粒与DNA的结合实验实验中将,和g的磷酸钙纳米颗粒悬液与g的DNA混合后,加人L的MCaCI溶液修饰,离心后,将上清用的琼脂糖凝胶电泳检测结果如图显示:当两者比例为g:第期杨菊云,等:,种新型基因传输载体,磷酸钙纳米颗粒用于肿瘤基因治疗的研究lg时,离心后的反应液发现有大量的DNA,表明DNA与磷酸钙纳米颗粒结合的量很少当两者比例为lg:g混合作用室温min,离心后的反应液未发现有DNA,表明DNA已完全与磷酸钙纳米颗粒结合当两者比例为()g:g时,离心后的反应液发现有微量的DNA,表明DNA没有完全与磷酸钙纳米颗粒结合为单纯质粒为对照:plasmidpEGFP季辫》''疑,'一|,,'::r亡难一r,a一I一亩l翻嘲I上bIIIIIII{,r一'h,一^一,图zetasizeDELSA检测磷酸钙纳米粒径大部分在nm和nm之间图Zeta电位仪检测磷酸钙纳米表面带有正电荷为mv图:磷酸钙纳米与DNA的比例为ug:ug:磷酸钙纳米与DNA的比例为ug:ug:磷酸钙纳米与DNA的比例为ug:ug:对照plasmidpEGFP磷酸钙纳米颗粒对DNA的保护实验的质粒DNA与血清在条件下反应h发现,DNA已被完全降解而DNA在与磷酸钙纳米颗粒结合后,与血清在的条件反应h,产物琼脂糖胶电泳结果显示DNA条带大小与对照DNA一样,没有拖尾,表明磷酸钙颗粒在与DNA结合后,能保护DNA不被血清中有效成份降解图示:Marker单纯的pEGFPNl质粒DNA作对照pEGFPN质粒DNA与的胎牛血清DMEM作用后,有部分的DNA被降解质粒DNA与的小牛血清DMEM作用后,有部分的DNA被降解质粒DNA和磷酸钙颗粒形成复合体后与胎牛血清作用,经过离心处理,rITE重悬后发现,DNA没有被降解图Marker单纯的pEGFPN质粒DNA作对照:pEGFPN质粒DNA与O的胎牛血清DMEM作用后有部分的DNA被降解质粒DNA与的小牛血清DMEM作用后有部分的DNA被降解质粒DNA和磷酸钙颗粒形成复合体后与胎牛血清作用经过离心处理TE重悬后发现DNA没有被降解磷酸钙纳米颗粒体外转染实验用磷酸钙纳米颗粒一DNA复合体转染CNE一细胞,h后在荧光显微镜下观察到发绿色荧光的细胞,在x的视野下观察及照相,并计数转染效率,当磷酸钙纳米颗粒与质粒DNA成一定比例时,磷酸钙纳米颗粒转染效率可达,甚至高于用脂质体转染的效率见图a,图b图a磷酸钙颗粒一DNA复合体转染的CNE一细胞(pEGFPDNAug磷酸钙纳米颗粒OuL),在()的荧光显微镜下摄片b示用脂质体转染CNE一细胞(pEGFPDNAug,OuL脂质体),在(X)的荧光显微镜下摄片磷酸钙纳米体内转染实验血清中存在大量的可降解DNA的成份,将单纯磷酸钙纳米颗粒一DNA复合体体内转染鼻咽}mI一,一一中国现代医学杂志第卷癌肿瘤动物模型,转染周后,断颈处死各组裸鼠,剥离肿瘤并行RTPCR检测,结果发现以纳米为载体转染的肿瘤组织中基因有很好的表达,而对照组中GFP没有表达,如图示:为一actin对照空白对照磷酸钙纳米瘤内直接注射,磷酸钙纳米颗粒一DNA复合体瘤内直接注射的RTPCR结果,发现肿瘤组织中有基因的表达,裸DNA瘤内直接注射的RTPCR结果,发现肿瘤组织中没有基因的表达Marker图为一actin对照空白对照,磷酸钙纳米瘤内直接注射:,磷酸钙纳米颗粒一DNA复合体瘤内直接注射的RTPCR结果发现肿瘤组织中有基因的表达,裸DNA瘤内直接注射的RTPCR结果发现肿瘤组织中没有基因的表达:Marker磷酸钙纳米颗粒细胞毒性实验结果Mr兀'实验结果显示,CPNP对细胞没有明显的毒性,而脂质体对照组有一定的细胞毒性,见图'善啪呻t~EIqECellt了h时td训ts出图结果显示,CPNP对细胞没有明显的毒性,而脂质体对照组有一定的细胞毒性磷酸钙纳米颗粒为载体介导自杀基因治疗鼻咽癌实验结果以纳米介导自杀基因yCDglyTK转染CNE一细胞后,在加入前药一Fc后发现,经纳米筛选的阳性克隆组有O的细胞被杀死,对照脂质体介导yCDglyTK组有的细胞死亡,纳米介导yCDgIyTK组有的细胞死亡,而没用任何转染的CNE一组在加入前药一Fc后没有出现细胞死亡见图lOl,O簧:王帅E葺柏主删,IlllJlt~ttttltsm^CH研nTr~rt曲TIrtJtg~t~proling,r图纳米筛选的阳性克隆组有的细胞存活,对照脂质体介导yCDglyTK组有的细胞存活,纳米介导yCDglyTK组有的细胞存活,而没用任何转染的CNE组在加入前药FC后没有出现细胞死亡讨论如何选择合适的载体,使目的基因方便,有效的表达,是基因治疗成功的关键的因素之一【,目前使用病毒载体的种类较多,非病毒基因载体因具有无免疫原性,使用简便,适于大量扩增的优势已经成为基因治疗研究中的热点问题【,目前常用的非病毒载体有脂质体,可生物降解材料及多聚阳离子聚合物等多聚赖氨酸,二氧化硅,磷酸钙沉淀方法等M这些方法主要依靠的是二价金属阳离子如ca,M,Mn等,它们与DNA的螺旋磷酸盐或酯结构形成离子复合物,磷酸钙能与核苷酸骨架形成复合物,从而有使DNA结构保持稳定的功能,形成这中复合物经细胞内吞介导借助于离子通道而穿越细胞膜尽管磷酸钙沉淀转染方法简便,有效,但是磷酸钙一DNA共沉淀方法转染效率较低,影响参数较多,需要熟练掌握操作技术和严格控制溶液的PH,且对质粒DNA的质量要求极高,质粒溶液中不能含有杂蛋白及RNA,随着科学不断发展,人们从微观水平认识到一些纳米材料的生物学活性,当物质小到纳米级后,就会表现出小颗粒的特性,其颗粒的表面能和表面张力都相应的增加,表面周围的一些粒子由于缺少与响应的原子结合,留有许多空位键,具有不饱和性质,易于其他原子相结合,形成稳定状阍研究表明,纳米颗粒在体内的循环时间明显长于普通大小的颗粒,在短时问内,不会很快被吞噬细胞清除,从而更多的渗出到血管外,组织间隙,延长与细胞接触的时间提高转染效率【玎】实验中未经修饰的磷酸钙纳米颗粒与DNA结合的比例较低,用氯化钙对磷酸钙纳米颗粒的表面进行修饰,在合适的PH值下,与带负电荷的DNA结合同时实验证明纳米颗粒与DNA结合后能保扎P鸯膏毒仁曩第期杨菊云,等:一种新型基因传输载体一磷酸钙纳米颗粒用于肿瘤基因治疗的研究护DNA不被降解,这对于体内,细胞内多酶环境具有重要的意义磷酸钙纳米体外转染实验结果显示,在一定比例的纳米颗粒与DNA条件下,可使DNA的转染效率达到很高(),甚至高于目前普遍使用的脂质体将纳米与报告基因结合在动物体内转染实验结果表明,基因在组织内有很好的表达,而对照组在组织内没有表达肿瘤自杀基因治疗是近年来随着分子生物学及基因工程技术发展起来的一种治疗方法【嘲,其本质上是一种瘤内化疗,通过将特定基因(自杀基因)转染肿瘤细胞后,使无毒的前药在细胞内转化为细胞毒性药物,从而直接或通过旁观者效应杀伤肿瘤细胞在所研究的众多自杀基因中,CDglyTK融合自杀基因前药系统是目前研究较为深入的一个系统,其作用是将FC及GCV两种无毒前药转换为细胞毒性药物从而达到杀伤肿瘤细胞的目的以纳米为载体介导自杀基因在体外治疗鼻咽癌的实验中,纳米筛选的阳性克隆组有的细胞被杀死,对照脂质体介导yCDglyTK组有的细胞死亡,纳米介导yCDglyTK组有的细胞死亡,而没用任何转染的CNE一组在加入前药FC后没有出现细胞死亡,从而显示磷酸钙纳米在基因治疗中有很好的应用前景以该纳米为载体,在动物体内进行基因治疗,将是笔者下一步研究的目标参考文献:】BOYCE,FM,BUCHERNLBaeulovirusmediatedgenetransferintomammaliancells:ProcNailAoadSciUSA,,:】BRAMSONJLGRAHAMFL,GAULDIEJTheuseofadenoviralvectorsforgenetherapyandgenetransferinvivoJCurrBioL:】ALVAREZRD,GOMEZNAVARROJ,WANGMetaAdenoviralmediatedsuicidegenetherapyforovariancancer叨MolTher,:】GURNANIM,LIPARIPDELLJetaAdenovimsmediatedpgenetherapyhasgreaterefficiencywhencombinedwithchemotherapyagainsthumanhead,neck,ovarianandprostateandbreastcancelCancerChemotherPharmaeol,:】JIANGHPAdvamcesofstudyonhydroxyapatitenanopartieleJChinaMedicalEngineering,():ChineseINJOONOH,KAYOUNGL'HYEYOUNGILYetaReleaseofadriamyeinfrompoly(benzyl一一glutamate),ply(ethyleneide)nanopartielesJInternafionljournalofPharmaceufics,,:一l】YANGZApplicationofnanopreparationtechnologyintargetpreparationresearchChinaMedicalEnsinecfing,,II():Chinese】VUL,TRUONGLE,SCOTTM,etaGenetransferbyDNAgelatinnanespheresArchofbiochemandbioph,,:】ZHANGYD,PANAHNanoteehnologyDNAoperations叨ChinaMedicalEngineering,l():ChineseOlDANLUO,MARKSEnhancementoftransfeetionbyphysicalconcentrationofDNAatthecellsurface叨NatBiot,,:【l】CARSTENILMOHAMMADS,ELEONOREGH,etaSilicananopartielesmodifiedwithaminesilanesasoilricEsforplasmidDNA叨InternJofPharmac,,:】ZHANGYD,SUNYAnewkindnovirusgenetransfectioncarriernanoparticlegenetranfeetion~lllller叨ChinaMedicalEnsinecrln~,l():Chinese】PEREZC,SANCHEZA,PUTNAMD,etaPoly(acticacid)poly(ethyleneglyco)nanopartielesasnewcaITier$forthedeliveryofplasmidDNAJJournalofcontrolledRelease,,:l】SCHATZLEINAGNonviralvectorsincancergenetherapyprineipiesandprogress叨AntioaneerDrugs,,:】MAH,DIAMONDSLNonviralgenetherapyanditsdeliverysystems叨CurrPharmBiotechnol,,:】PRABHAS,ZHOUW,'PANYAMJ'etal:Sizedependencyofnanopartielemedieatedgenetrans~ection:studieswithfractionatednanopartieleJIntJPharm,,:】QINJM,ZHANGYD,WANGHYetaApplicationanddevelopmentofnanomedicineintreatementofdisease叨ChinaJournalofModemMedicine,,():ChinesePERACCHIAR,GREFY'MINAMITAKEA,DOMBetaPEGcoatednanopartielesfromamphiphiliediblockandmuhiblockeopolymerinvestigationoftheirencapsulationandreleasecharacteristic,叨JControlRelease,,:】ZHANGYD,ZHANGL'LIUXSCurrentsitnafionandprospectnanotechnologyusedtodiagnosisandtrentmentoftualodJChinaMedicalEngiIeeri"吕,():Chinese(汤映平编辑)

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