LB培养液配制:
、基本原理
LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源,而NaCl
提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化,一
般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固,通常不被
微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌,因此,要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性,以利于细菌的
生长繁殖。
LB培养基的配方如下:
酵母提取物 5g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
琼脂 15~20g
水 1000mL
pH 7.4~7.6
三、器材
酵母提取物,蛋白胨,NaCl,琼脂;
1mol/L NaOH, 1mol/L HCl;
试管,三角烧瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅,pH试纸
(pH 5.5~9.0),棉花,牛皮纸,记号笔,麻绳,纱布等。
四、操作步骤
1.称量
按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。蛋白胨很易吸潮,在称取
时动作要迅速。另外,称药品时严防药品混杂,一把牛角匙用于一种药品,或称取一种药品后,洗净、擦干,再称取另一药品,瓶盖也不要盖错。
2.溶化
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解。待药品完
全溶解后,补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再
加热溶化,在琼脂溶化的过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。
3.调pH
在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培养基中逐滴加
入1mol/L
NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值,直至pH达7.6。反之,则用1mol/L
HCl进行调节。注意pH值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响培养基内各离子的浓度。
对于有些要求pH值较精确的微生物,其pH的调节可用酸度计进行(使用
方法
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,可参考有关说明
书
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)。
4.分装
按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装过程中注意不要使培养基沾在管口
或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。
(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
(2)固体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面,分装三角烧瓶的量以不超过三角
烧瓶容积的一半为宜。
(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
5.加塞
培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能。
6.包扎
加塞后,将全部试管用麻绳捆扎好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外
再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳
以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
7.灭菌
将上述培养基以1.05kg/cm2(15磅/英寸2),121.3℃,20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及
时灭菌,则应放入冰箱内暂存。
8.搁置斜面
将灭菌的试管培养基冷至50℃左右,将试管棉塞端搁在玻棒上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的
一半为宜。
9.无菌检查
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24~48小时,以检查灭菌是否彻底。
浙公网安备 33021202002483