毛细管区带电泳法分离大肠埃希菌定量研究
毛细管区带电泳法分离大肠埃希菌定量研究
作者:
王朔 王惠民，褚少朋，汪桂华【摘要】 目的:
定量研究毛细管区带电泳法(CZE)分离大肠埃希菌(E.coli)以满足临床诊断要求。
方法
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用毛细管区带电泳法对E.coli ATCC25922进行分离，研究其峰高与E.coli量的关系。结果:
毛细管区带电泳法分离E.coli ATCC25922浓度在105cfu/ml,5×107cfu/ml之间线性很好，其峰高与浓度关系符合线性方程:
?mAU,,5.256，
1.0036×?C, R2,1。结论:
CZE法分离大肠埃希菌可进行定量研究。
【关键词】 毛细管区带电泳;分离;大肠埃希菌 [Abstract] Objective:A quantitative study about determination of Escherichia coli (E.coli)by capillary zone electrophoresis(CZE) was to meet the clinic diagnosis request. Methods:We determined E.coli ATCC25922 by CZE and studied the linear relationship between the peak height (mAU) and the Escherichia coli concentration (C). Results:The linear relationship of E.coli ATCC25922 concentration determined by CZE between 105cfu/ml and 5×107cfu/ml was quite good. Regression line equation is ?mAU,,5.256，
1.0036×?C, R2,
1.Conclusion: Escherichia coli ATCC25922 determined
by capillary zone electrophoresis could be used for a quantitative study. [Key words] Capillary zone electrophoresis; Separation; Escherichia coli大肠埃希菌是临床常见感染菌之一，由其引起的泌尿系统感染占53.6%[1]，其诊断主要靠细菌培养法定量分析，但该法耗时较长(通常需2,4天)。毛细管区带电泳是20世纪80年代发展起来的一种高效分离技术，具有快速、灵敏、低耗等优点，可用于研究多种细菌的分离。毛细管区带电泳法分离大肠埃希菌ATCC25922定量研究，将有利于快速诊断，满足临床要求。
1 材料和方法
1.1 仪器 Beckman-Coulet P/ACE MDQ 毛细管电泳仪和 UV检测器, 河北永年锐沣色谱器件公司未涂层石英硅毛细管(内径75μm)，上海天达pHS-3TC pH计(0.01级)。
1.2 试剂和菌株来源 聚氧化乙烯(PEO)、Tris和EDTA(Sigma-Aldrich公司)，硼酸、氢氧化钠、盐酸(上海化剂厂分析纯级)，实验用水为双蒸馏水。采用上述材料配制TBE贮存缓冲液(4.5mmol/L TRIS-4.5mmol/L硼酸-
0.1mmol/L EDTA，pH8.6)，将其1?16稀释，添加终浓度为0.0125%的PEO(Mn 600000)，并用0.1mmol/L NaOH和盐酸调整pH至9.0，作为电泳缓冲液待用。E.coli ATCC 25922(卫生部临床检验中心)。
1.3 方法
1.3.1 电泳方法 采用内径75μm、有效长度(进样端至检测窗口)为40cm的石英毛细管，阳极0.5psi压力进样20s，电压25kV，电泳时间15min，25?恒温，阴极检测，波长214nm。开机后及每一份标本检测前依次用
1.0mol/L氢氧化钠、 双蒸馏水、电泳缓冲液20psi冲洗毛细管5min。
1.3.2 检测方法 将血琼脂平板上经35?，18~24h培养的E.coli ATCC 25922的菌落挑于电泳缓冲液中，配成5×10
7、10
7、10
6、5×105和105cfu/ml，静置30min后进行毛细管区带电泳。
1.4 统计学方法 使用SPSS 11.5 for windows 软件对数据进行统计学分析。
浙公网安备 33021202002483