菌种传代ko
4.1菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料，在医学领域中，诊断制品的制备，菌苗的
生产、微生物致病性研究，药物的抑菌试验及药品微生物检验等都有一套完整的菌种.微生物
具有生命活力，在传代过程中易发生变异甚至死亡，因此菌种传代与保藏是一项重要的基础工作。
4.2菌种代号
, 国内药品微生物检验所用的菌种代号是
, CMCC(F)或 CMCC(B)
, CMCC —— 中国医学菌种保藏中心
, B —— 代
表
关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf
细菌， F ——代表真菌。
金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003
大肠杆菌 CMCC(B) 44102
枯草芽孢杆菌 CMCC(B) 63501
白色念珠菌 CMCC(F)98001
黑曲霉CMCC(F) 98003
4.3传代和接种
4.3.1菌种冻干粉复苏
4.3.1.1把冻干菌种管、灭菌1ml 滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂
斜面数支，移入接种室或净化工作台。
4.3.1.2先用砂轮将冻干菌种安瓶颈部挫出刻痕,再将冻干菌种管外壁用75%乙醇擦洗消毒、稍干，
用75% 乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。点燃酒精灯，将菌种管的封口一端在火焰
上，烧灼红热，用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基，滴在灼热的菌种管封口一端，使骤冷而炸裂。 4.3.1.3取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，另取1支灭菌滴管，在火焰旁
吸取营养肉汤少许，加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种
至营养琼脂斜面及普通肉汤内，并将滴管及菌种管投入消毒液内，将已接种的营养肉汤及营养
琼脂斜面进行培养。
4.3.2菌种斜面传代操作
4.3.2.1培养基应新鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜再使用。标签上注明菌种名及菌种编号。
至冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约30分钟，待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。 4.3.2.2点燃酒精灯，用左手握住菌种斜面，将管口靠进火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红
30秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。左手将管口在火焰上旋转
烧灼，右手用无名指、小指及掌部夹住棉塞，拨开棉塞，将接种环伸人管内先在近壁的琼脂斜
面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮去少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。
4.3.2.3堵上棉塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面1支，照上述操作打开棉塞，将接种环伸入管
内至琼脂斜面的低部，由底向上，将接种环轻贴斜面的表面曲折移动，使细菌划在斜面的表面
上。
4.3.2.4取出接种棒，在火焰旁将培养基管棉塞堵上，然后将接种过细菌的接种棒在火焰上烧灼灭菌。 4.4菌种的培养与保存
4.4.1 大肠杆菌35~37?培养48小时
金黄色葡萄球菌30~35?培养48小时
枯草芽孢杆菌30~35?培养48小时
白色念珠菌23~28?培养7天
黑曲霉23~28?培养7天
4.4.2将培养物管自培养箱取出后放人冰箱(2-8?)保存，一般 2个月转种一次。 4.5菌液的制备
4.5.1取上述培养好的菌种斜面移入接种室或净化工作台，放置室温后, 用接种环取菌苔少许接种置营
养肉汤中(10ml/支,已灭菌), 将已接种毕的细菌管置35?~37?培养18~24小时，取出备用。
一般于冰箱中保存可用两周。
4.5.2取上述培养好的营养肉汤菌悬液(浓菌液)1ml，加到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液混匀，
-1 为10，再取另一只刻度吸管吸取10-1菌液1 ml加到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液混匀，
-2 为10……以此类推，稀释至含活菌数在 50 ~ 100 个。用平板计数。
4.5.3此稀释菌液用于试验后加阳性对照，可在一周内使用。
4.7记录
4.7.1传代和接种使用后，应做好《菌种传代接种记录》。
4.7.2菌悬液制备后，应做好《菌液制备使用记录》
浙公网安备 33021202002483