酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
?????
了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在 碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀， 由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，
从水解液中可以测出上述组分的存在。
将2 mL 10％三氯化铁溶液（用FeCl?6HO配制）加入 到400 mL浓盐酸中。 32
9．苔黑酚乙醇溶液 10 mL
溶解6g苔黑酚于100 mL 95％乙醇中（可在冰箱中保存1个月）。
10．定磷试剂 50 mL
（1）17％硫酸溶液 将17mL浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83 mL水中。
（2）2.5％钼酸铵溶液 将2.5g钼酸铵溶于100 mL水中。
（3）10％抗坏血酸溶液10g 抗坏血酸溶于100 mL水中，贮棕色瓶保存。溶液
呈淡黄色时可用，如呈深黄或棕色则失效，需纯化抗坏血酸。
临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合。
17％硫酸溶液?2.5％钼酸铵溶液?10％抗坏血酸溶液?水=1?1?1?2（V／V）。
11．酵母粉 200 g
将15g酵母悬浮于90 mL 0.04 mol／L氢氧化钠溶液 中，并在乳钵中研磨均
匀。将悬浮液转移至150毫升锥形瓶 中。在沸水浴上加热30分钟后，冷却。离心（3000 r／min）15分钟，将上清液缓缓倾入30 mL酸性乙醇溶液中。注意要一边
搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后，离心（3000 r／min）3分钟。弃去清液。用95％乙醇洗涤沉淀两次，乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至布氏
漏斗中抽滤。沉淀可在空气中干燥。
取200 mg提取的核酸，加入1.5 mol／L硫酸溶液10 mL，在沸水浴中加热10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。
1．嘌呤碱 取水解液1mL加入过量浓氨水，然后加入约1mL0.1mol／L硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。
2．核糖 取1支试管加入水解液1mL、三氯化铁浓盐 酸溶液2 mL和苔黑酚乙醇溶液0.2mL。放沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。
3．磷酸取 1支试管，加入水解液1mL和定磷试剂1mL。在水浴中加热，观察
溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。
1．如何得到高产量RNA的粗制品？
2．本实验RNA组分是什么？怎样验证的？
本文档为【酵母核糖核酸的分离及组分鉴定】，请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑，
图片更改请在作品中右键图片并更换，文字修改请直接点击文字进行修改，也可以新增和删除文档中的内容。
该文档来自用户分享，如有侵权行为请发邮件ishare@vip.sina.com联系网站客服，我们会及时删除。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生，若发现您的权利被侵害，请联系客服邮件isharekefu@iask.cn，我们尽快处理。
本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权，请谨慎使用。
网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传，仅限个人学习分享使用，禁止用于任何广告和商用目的。
浙公网安备 33021202002483