组培室基本操作技术
器皿和器具的洗涤
1.洗涤剂：无磷中性的肥皂粉、洗衣粉和洗洁精
2.常用清洗方法
洗涤剂清洗法
超声波清洗法
3.玻璃器皿的清洗
新购置的玻璃器皿的清洗
用过的培养器皿的清洗
已经污染的玻璃器皿的清洗
灭菌
器具的灭菌方法
干热灭菌法
高压蒸汽灭菌法（湿热灭菌法）
火焰灼烧灭菌法
培养基的灭菌方法
高温蒸汽灭菌法
过滤除菌法
高压蒸汽灭菌锅安全使用注意事项：
① 灭菌前外层锅内要加入足够的水,灭菌完成后要将锅内的水排放干净。
② 在灭菌过程中及灭菌后，压力
表
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压力指针归零之前,不能打开锅盖,以免发生危险。
③ 注意日常维护和检查,及时发现问
题
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,及时修理，保证使用安全可靠。
使用高压蒸汽灭菌锅进行物品灭菌时的注意事项：
① 消毒锅内放置的物品要有一定的缝隙，便于高温蒸汽上下回流，达到良好灭菌效果。
② 锅内冷空气必须完全排尽，否则压力表的指针虽然达到了规定的压力，但由于锅内冷空气的存在，并不能达到相应的温度，因而影响灭菌效果。
③ 进行培养基灭菌时，锅内达到规定的灭菌温度后，在严格保持灭菌温度的同时，还要严格保持灭菌时间。时间过长会破坏培养基内一些化学成分的有效性，时间过短则达不到灭菌效果。
无菌操作室内的灭菌方法
熏蒸灭菌法
射线灭菌法
外植体的表面灭菌
化学消毒剂灭菌法
抗生素抑菌法
1.外植体灭菌的常用杀菌剂
良好的外植体灭菌效果的含义：
外植体灭菌后无菌率高，同时植物细胞不会受损伤或只是轻微受损伤而能保持正常生长。
2.外植体表面灭菌
外植体表面灭菌操作前的准备工作：
① 无菌水、漂洗瓶、切割用器皿（玻璃培养皿或不锈钢切割盘）和金属器具均经过高温高压灭菌并整齐摆放在超净工作台上。
② 灭菌剂配制好并整齐摆放在超净工作台上。
3.影响外植体消毒效果的因素：
①消毒剂种类
②消毒剂使用浓度
③消毒处理时间
4.培养过程中污染原因及对策
污染的病原类型
污染发生原因
防污染对策
外植体的接种
1 定义
2 外植体接种操作前的准备工作
接种室的清洁和灭菌
超净工作台的清洁和灭菌准备
操作人员无菌操作前的准备
3 外植体接种的具体步骤
常用外植体的种类
茎尖
带节茎段
节间部茎段
叶片和叶柄
鳞片
外植体的培养条件
温度
光照
湿度
培养基的营养物质和pH变化
培养物的气体环境
浙公网安备 33021202002483