艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4 T淋巴细胞检测质量保...

艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南 （试行） A Guideline for Quality Assurance of CD4+ T Lymphocyte Test in People Living with HIV/AIDS 中国疾病预防控制中心 2006年2月 本指南由中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心艾滋病参比实验室组织有关专家撰写，由中国疾病预防控制中心批准执行。 编写主持人： 蒋岩 编写人员 ： 肖瑶  蒋岩  裴雪涛  刘艳荣  仲人前  苏旭  姚均  尚红 于世北 徐建青 编写单位： 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心 参编单位： 军事医学科学院野战输血研究所 上海第二军医大学长征医院 北京大学人民医院血液病研究所 中国疾病预防控制中心辐射防护和核安全医学所 中国医科大学附属第一医院 顾问： Francis F. Mandy 加拿大公共卫生局疾病预防控制中心国家免疫学实验室 Thomas J. Spira, 美国艾滋病性病与结核病预防中心免疫和诊断系临床 免疫学实验室 Trover Peter  克林顿基金中国项目实验室专家 Tao Ding  加拿大公共卫生局疾病预防控制中心国家免疫学实验室 前 言 随着我国艾滋病患者抗病毒治疗和自愿咨询和检测（VCT）工作的深入开展，对CD4+T淋巴细胞的检测需求日益增加。截至2005年，全国已经有近百台各型流式细胞仪和/或CD4+T淋巴细胞计数仪直接服务于艾滋病病毒感染者和艾滋病患者，这些仪器在艾滋病防治工作中发挥着重要作用。为了保证实验室CD4+T淋巴细胞的检测质量，特制定适合我国现状的CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南。 本指南的制定以我国艾滋病防治现行政策和相关技术 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 为依据，同时参考了美国、加拿大和澳大利亚等国家的现行指南。本指南适用于目前国内使用的检测CD4+T淋巴细胞的主要仪器，旨在为各地在实际工作中提高CD4+T淋巴细胞检测质量，因地制宜地建立适合当地实验室条件的质量保证规程和标准操作程序提供有益的参考。 致 谢 本指南写作过程中，得到了世界卫生组织和克林顿基金的大力支持，也得到了许多病毒和免疫学领域资深专家的支持，使得本指南能在很短的时间内呈现给工作在CD4+T淋巴细胞检测一线的同仁们，为规范我国CD4+T淋巴细胞检测，保证有效治疗艾滋病做出了无私奉献，在此我们表示深深的敬意。 国家艾滋病首席专家邵一鸣教授在本指南编写过程中给予了重要的指导建议，在此特别致谢。 目录 第一章  总则    1 第二章  实验室环境与设施    2 第三章  实验室安全    4 第四章  质量保证    6 第五章  室内质控    7 第六章  外部质控    13 第七章  标准操作程序 (SOP)模板    15 附表1  CD4+Ｔ淋巴细胞检测样品发送/接收单    16 附表2  药物及其他生物学因素对CD4+T淋巴细胞测定结果的影响    17 附表3  CD4+Ｔ淋巴细胞检测结果报告单    18 附表4  CD4+Ｔ淋巴细胞检测能力验证样品接收表    19 附件5  CD4+Ｔ淋巴细胞检测能力验证样品结果报告表    20 参考文献    23 第一章  总则 1.1 意义 准确可靠的CD4+T淋巴细胞检测是评价HIV感染者免疫状况，预测判断疾病进程、评价抗病毒药物治疗效果和估测预后的重要指标；世界卫生组织(WHO)和欧美等国家均推荐，艾滋病病毒（HIV）感染者每3-6个月监测一次CD4+T淋巴细胞水平，并以该指标作为开始预防间质性浆细胞肺炎和其它机会性感染，以及作为开始抗逆转录病毒治疗的主要指标。依照世界卫生组织和美国CDC成年人和未成年人AIDS病例中HIV感染和病例监测分类系统定义，CD4+T淋巴细胞水平也作为判断HIV相关临床病程的标准。我国“国家免费艾滋病抗病毒药物治疗手册”中也将CD4+T淋巴细胞CD4<200/mm3做为开始抗病毒治疗的标准。因而保证CD4+T淋巴细胞检测质量是非常重要的。《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南》对保证CD4+T淋巴细胞检测质量有重要的指导意义。 1.2目的 指导我国从事HIV感染者和AIDS患者CD4+T淋巴细胞检测工作的实验室人员，规范CD4+T淋巴细胞检测方法和程序，完善实验室质量保证与质量控制，提高检测的准确性。 1.3 适用范围 适用于我国采用单平台法检测艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞的所有实验室。 1.4 缩略语 HIV/AIDS: 艾滋病病毒感染者和艾滋病患者；HIV：艾滋病病毒； AIDS：艾滋病； SOP：标准操作程序； FCM：流式细胞术；SPT：单平台技术；ID：患者编号；PMT：光电倍增管； PT：能力验证 第二章  实验室环境与设施 2.1 CD4+T 淋巴细胞检测实验室设施 理想的CD4+T淋巴细胞检测实验室应该有专用实验室。如果空间有限，CD4+T淋巴细胞检测可以与HIV检测的筛查和确认实验室共享一个空间。本指南推荐的是理想的CD4+T淋巴细胞检测实验室的空间安排。样品接收、处理在一单独房间，样品检测、分析和报告在另一单独房间。该类实验室应符合国家生物安全二级 (BSL-2)实验室的有关 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 。 2.2 CD4+T淋巴细胞检测实验室空间安排的一般性原则 实验室应有以下区域： 2.2.1 样品接收区； 2.2.2 样品存放区； 2.2.3 样品处理区； 2.2.4 样品检测区； 2.2.5 结果分析和发布区； 2.2.6 资料存放区（实验室档案) 打印机 冰箱 样品准备区 样品检测与分析区 图1 CD4+T淋巴细胞检测实验室规划图(建议) (注: 具体空间尺寸应与设备大小相一致) 如在独立实验室进行CD4+T淋巴细胞检测，其实验室规划和工作流程应如图1所示。虚线以上相对独立。如果属于共用实验室也应按照如图1所示的区域设计实验室。 实验室空间规划应参考仪器制造商提供的主机及其附属设备的尺寸。样品检测和数据分析可以在同一实验室或不同实验室进行。 第三章  实验室安全 实验室负责人应保证所有涉及CD4+T淋巴细胞检测的检验员和管理者接受足够的生物安全培训，并接受年度复训，了解生物安全保障的一般性导则。相关人员要接受实验室安全员和实验室安全负责人的监督。所有实验室事故和意外要根据艾滋病实验室事故和意外处理的原则进行处理、 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 和报告。 实验室安全负责人的责任是保证实验室处于安全状态。所有人员有责任实现自身保护和其他工作人员的安全。所有人员的安全培训均应记录在实验室和人事档案中。具体操作应遵照国家卫生部2004年4月颁布的《医务人员艾滋病病毒职业暴露防护工作指导原则（试行）》，2003年8月颁布的《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS 233-2002）》中华人民共和国卫生行业标准，和中国疾病预防控制中心《全国艾滋病检测技术规范(2004版)》中的相关条文和一般性导则规定。 3.1 环境 应符合国家二级生物安全实验室(BSL-2)有关规定。 3.2 制度 关于办公室下班关闭电源制度矿山事故隐患举报和奖励制度制度下载人事管理制度doc盘点制度下载 与管理 实验所涉及的称量器具和测试仪器均要求建立管理与登记制度。使用 管理制度 档案管理制度下载食品安全管理制度下载三类维修管理制度下载财务管理制度免费下载安全设施管理制度下载 应参照国家生物安全相关规定，结合本实验室其他HIV检验工作安全制度，并使称量器具和测试仪器的使用规程相一致。CD4+T淋巴细胞检测最基本的管理内容应包括：移液器、细胞计数仪、冰箱、计算机及其附属设备等。使用登记内容应当尽量涵盖必要的管理要素，按执行日期登记。 3.3 样品安全 本节内容包含与CD4+T淋巴细胞检测检测相关的样品采集、包装、运输、接收、分装、测试和储存等各环节的安全要求。采集、包装、运输三部分为实验室外部过程，应遵循现场工作安全规范。 接收样品的所有措施、规程和制度均应符合国家相关规定。在实际操作中(包括各级各类筛查、确认和参比实验室)应在符合2级生物安全实验室（BSL-2）要求的实验室中进行。 3.4 废弃物处理 所有废弃物应按照HIV污染物品处理。由专人按特定程序和方法进行清洁和消毒。只有在确认彻底消毒后，才能移出污染区，妥善包装后移交专门机构进行销毁，不得循环使用。 3.4.1废弃物分类 按照物理特性分类，主要有液体、可燃性物质与不可燃性物质。不可燃性物质又可分为金属和非金属类。分类有助于选择适宜的消毒方法。 3.4.2 消毒方法 液体类消毒应注意消毒剂被废液稀释后，最终稀释浓度必须保持在有效消毒浓度。计算消毒剂用量应以需处理的废液总量为分母。可燃性物质应遵循先消毒后焚烧的程序。焚烧应由环保部门认可的专业机构进行，防止造成环境污染；不可燃物质中非一次性用品应遵循先消毒后清洗，清洗后常规消毒包装后再使用的程序。一次性用品应按照先消毒后深埋的程序进行。 常用消毒剂配制浓度与物理消毒方法 3.4.2.1  含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯2000-5000mg/L）适用于废液缸、溢出物 3.4.2.2 75%乙醇 适用于实验室桌面、生物安全柜工作台面和仪器表(非光学部件) 3.4.2.3 2%戊二醛 以上浸泡消毒时间为器具保持在液面下1030 min。 3.4.2.4 高压蒸汽消毒，121℃，保持1520min; 3.4.2.5 干燥空气烘箱消毒（干烤消毒），140℃，保持23h。 3.4.2.6 流式细胞仪内置的废液收集桶应按照HIV实验室废液处理方法和规程进行消毒。 3.4.2.7 标识与登记 所有消毒剂都应明确标记浓度。配制好的消毒剂应标明配制时间。 3.5 个人防护 个人防护应符合国家有关艾滋病实验室标准的要求。 尽管流式仪激光束属于低能量激光。但在实施仪器维护和检修过程中，应注意避免激光束对眼睛的直接照射。 3.6 人员培训与考核 CD4+T淋巴细胞检测的管理人员和检测人员应接受与工作相关的技术培训。所有工作人员必须经过HIV检测技术和省级以上艾滋病实验室安全培训，包括CD4+T淋巴细胞检测上岗培训和定期复训。接受实验室生物安全责任人和实验室管理人员的监督。实验室的安全责任人要对工作秩序和环境的安全负责，所有工作人员都有责任保护自己和他人的安全。 3.7 突发事件处理与报告 遵循国家HIV检测实验室有关突发性生物安全事件处理程序和认定原则进行登记上报和应急处理。 第四章  质量保证 实验室的质量保证是为达到质量目标而制定的一套规范行为的标准。质量保证的目的是持续为病人提供准确可靠的检测结果。实验室的质量保证要考虑自接受样品到发出检测报告过程中所有可能影响检测结果的因素。包括行政支持、实验室管理、环境要求、人员培训和质量控制等多方面的内容(见图2)。有关行政支持、实验室管理和环境等要求按照“全国艾滋病检测技术规范”和“全国艾滋病检测工作管理办法”的规定执行。工作人员应在实验室管理、CD4+T淋巴细胞检测技术和质量保证等方面得到全面培训。