eb病毒dna定量报告单

eb病毒dna定量报告单 EB病毒感染的实验室指标 EB病毒感染的实验室指标 2016-03-08儿科助手 EBNA二聚体带状模型 EB病毒(Epstein-Barrvirus，EBV)属于4型疱疹病毒，类似其他疱疹病毒科的病毒，EBV感染包括增殖性感染(或称活动性感染)和潜伏感染两种状态，EBV感染人淋巴细胞和上皮细胞，初次感染后病毒可长期在人上呼吸道上皮细胞或淋巴组织中潜伏，潜伏感染和终生携带是EBV感染的重要特征。人群对EBV普遍易感，大多数人初次感染发生在儿童或青少年时期并可终生携带，在中国，8岁以上人群90,以上血清学阳性。 传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis，IM) 是典型的EBV初次感染 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 现;值得注意的是在免疫抑制(如器官移植)、遗传缺陷(如X连锁淋巴组织增生)或潜伏感染的反复激活的情况下，EBV感染可能导致不良预后，如发展成为慢性活动性EB病毒感染(CAEBV)和EBV相关的噬血性淋巴组织 增生(EBV-HLH)。另外EBV还与儿童及成人的淋巴瘤等多种肿瘤发病有关。因而及时准确的实验室诊断有助于临床对EBV感染的时相、机体状况和发生不良转归的风险进行评估，这对于儿童EBV感染性疾病的诊断及预后至关重要。 一、EBV—DNA测定 EBV-DNA阳性是EBV存在的直接证据。由于潜伏感染的存在，正常人外周血单个核细胞中也常有低载量的EBV-DNA检出(通常低于200拷贝数,m1)。在活动感染发生时EBV在人淋巴细胞中大量增殖(IM患者一般可达103,105拷贝数,m1)并释放到血浆或淋巴液中。随着感染的控制，EBV感染进入潜伏状态，血浆或淋巴液中的病毒颗粒迅速消失，而外周血淋巴细胞中的EBV仍将以潜伏状态保持较高滴度数月,1年。对于复发性感染外周血EBV-DNA载量会更高，CAEBV可达105,106拷贝数,ml甚至更高，EBV-HLH一般在104,106拷贝数,ml之间。由于不同感染状态下病毒的状态和分布不同，EBV-DNA测定结果的解释因标本来源的不同而有不同。 1(全血:淋巴细胞是EBV感染的靶 细胞，淋巴细胞中潜伏期EBV的存在和活动感染后长达数月的持续阳性使得该检测结果不能反映现症感染，也不适合急性感染如IM的诊断。因此外周血单个核细胞EBV-DNA定量测定更适合复发感染如CAEBV、EBV-HLH或移植相关EBV感染的诊断和检测。本 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 的一个缺陷在于单个核细胞分离 步骤 新产品开发流程的步骤课题研究的五个步骤成本核算步骤微型课题研究步骤数控铣床操作步骤 繁琐，自动化程度低，定量结果受单个核细胞的分离效率影响较大。为解决这一问题，有研究者使用吸附法抽提全血DNA进行定量，现有大量商品化的抽提系统可供使用，抽提步骤自动化程度大大提高，且定量结果与分离单个核细胞的测定结果具有良好的相关性。 2(血浆或血清:血浆中的EBV-DNA来自活动感染期由感染淋巴细胞中释放的病毒颗粒，感染被控制后血液中游离的病毒颗粒和EBV-DNA又被免疫系统迅速廓清。因此血浆或血清中的EBV-DNA只有活动期感染时为阳性，恢复期和潜伏感染为阴性，这使得血浆EBV-DNA成为一个很好反映活动感染的指标，在IM、EBV-HLH和淋巴瘤等急慢性活动感染患者的血浆中均可检出，而潜伏感染者多 为阴性。 3(上呼吸道标本如唾液、口腔含漱液和咽喉拭子:具有取材方便的优点，但由于EBV在绝大多数人咽喉部定植，无论潜伏感染或活动性感染均可检出，常用于流行病学调查和鼻咽癌方面的一些检查，对IM和其他儿科相关EBV感染的诊断价值有限。 就EBV-DNA检测的方法学而言，商品化的EBV-DNA测定试剂盒自20世纪90年代末上市以来，EBV-DNA的测定经历了从半定量、竞争定量到荧光定量的演化，现一般采用荧光定量PCR的方法，分析性能良好，但迄今为止仍无权威的参考物质，市场上多数试剂盒仍使用自制的以质粒为基础的标准品，适宜的第三方质控品也不易得到，这为EBV-DNA测定的标准化带来了一定的障碍。 二、EBV相关抗体测定EBV初次感染时，机体首先产生针对其壳抗原(viral capsid antigen，VCA)的IgM抗体(VCA-IgM)，然后是壳抗原低亲和力的IgG抗体(VCA-IgG)，随着抗体亲和力的成熟，感染后期机体将产生高亲和力的VCA-IgG和核心抗原抗体(EBNA-IgG)并 持续终身。在急性感染中后期还会一过性早期抗原抗体(EA-IgG)出现。而IgA型的抗体与EBV进入上皮细胞有关，持续高滴度的IgA抗体被认为和鼻咽癌有关。 血清中的EBV相关抗体主流检测方法为ELISA、化学发光和免疫荧光法，临床应用非常广泛，但由于针对不同抗原或不同亚类的抗体具有不同的临床意义，相关抗体的组合测定有助于感染类型和时相的判断，检验项目的合理选择和正确解释就显得非常重要。 VCA-IgM是最常用的EBV初次感染的指标，然而部分患者可能因VCA-IgM缺失而导致漏诊;低亲和力的VCA-IgG在初次感染的早期出现，也可作为初次感染 的诊断指标。EBNA-IgG和高亲和力的VCA-IgG都在感染后期才出现并可终生携带，被视为恢复期或既往感染的指标;对于免疫功能正常的个体，EBNA-IgG与VCA-IgG结合可用于初次感染和复发感染以及感染时相的判断。 EA-IgG产生晚于VCA-IgG，慢性活动感染时可持续阳性，根据荧光模式差异 EA可分为弥散型(D)和局限型(R)。结合其他抗体检测结果，EA抗体通常用于复发感染相关疾病的诊断。 除EBV核酸和抗体检测外，感染者的细胞免疫功能检测、恶性EBV感染性疾病易感基因检测以及EBV基因分型也正越来越引起临床的重视。 1(感染者的细胞免疫功能检测:EBV感染者的细胞免疫功能通常通过流式细胞术进行测定，淋巴细胞亚群方面IM患者主要体现在CD3+和CD8+细胞的增高;EBV-HLH患儿典型特征为NK细胞减少;而CAEBV患者的典型特征为2系以上血细胞计数的减低。抗EBV免疫依赖于特异性的细胞免疫，T细胞向Thl,Th2的极化状态很大程度上决定了免疫杀伤和免疫逃避，通过测定细胞因子、极化相关转录因子以及外周血白细胞CCR3,CCR5表达水平可反映T细胞的极化状态，从而对机体抗病毒免疫功能进行评估。 2(恶性EB病毒相关疾病易感基因检测:X连锁淋巴组织增生是一种X染色体连锁的先天性免疫缺陷病，患者对EBV感染高度敏感，发病急，常表现为暴发 性IM、HLH、低丙种球蛋白血症、恶性淋巴瘤等，预后很差，70,以上患儿于10岁前死亡，因此早期诊断并及时进行骨髓移植至关重要，相关的遗传学突变包括X染色体上的SH2D1A和XIAP等基因。另外基因PRFl、UNC13D、STXll、STXBP2也可能与原发性HLH有关。 EBV作为儿童时期感染的一种常见病毒，具有导致严重疾病的潜能，常规的血清学、分子生物学和分子病理学手段已广泛应用于EBV感染及EBV相关疾病的诊断。EBV的血清学检查和核酸载量测定是当前EBV感染相关疾病实验室检查的最主要手段，VCA-IgM和低亲和力的VCA-IgG对现症EBV感染具有重要意义，对于IM等急性、亚急性EBV感染而言，血清学检查优于在恢复期还保持很高载量的EBV-DNA。婴幼儿、器官(或骨髓)移植者、HIV感染者、肿瘤化疗患者等免疫功能不全的受检者，血清学检查可能带来漏诊，对于此类患者还应结合 EBV-DNA载量进行判断。 EBV-DNA载量的检测对CAEBV、EBV-HLH的诊断价值高于VCA-IgM血清学检查。 相对于EBV的核酸以及血清学检测， 对EBV感染患儿的免疫学功能评估、易感基因的检测等近年来正成为EBV相关疾病实验室诊断研究新的热点。随着方法学的成熟和诊断价值的进一步明确，可望成为EBV相关疾病诊断、监控及预后判断新的强有力的工具。 资料来源: 马展，张泓(儿童EB病毒感染的实验室诊断(中华检验医学杂志(2015，38(4):223-225( 篇二:EB病毒检测Q&A Q:EB病毒检测的样本类型多样，主要有外周血、血浆和咽拭子三种，三者检测的意义有何不同, Q:外周血、血浆和咽拭子三种样本，在检测EB病毒时，各自的阳性率有什么不同,造成阳性率差异的原因是什么, A:由 EBV 感染引起或与 EBV 感染有关的疾病主要有传染性单核细胞增多症、burkitt淋巴瘤和(来 自:www.XIelw.Com 写 论文网:eb病毒dna定量报告单)鼻咽癌等。 检测意义:三种样本的检测意义无明显差异: 从临床患者的个体诊治研究扩大到临床患者 群体特征的研究,可了解EBV流行状况,临床特点,以及诊治、预后、预防等, 对于临床及时准确的诊断和治疗有重要意义。临床医生需综合分析,及早做 相应的检查才能做出正确的诊断,并进行合理治疗。 病毒感染及分布:EB病毒感染后，在口腔部和延腺的上皮细胞内增殖，然后感染B淋巴细 胞大量进入血液循环后致全身性感染，并且可以终身潜伏在人体淋巴细胞中， 不少相关研究报道鼻咽癌患者血浆中存在EB 病毒 DNA，并认为血浆 EBV DNA可能是由肿瘤细胞裂解而来，其含量水平是反映鼻咽癌肿瘤消长情况的灵敏、可靠的指标，可用于鼻咽癌的诊断、协助TNM分期和评价临床疗效等 对于EB 病毒急性感染如传染性单核细胞增多症，由于在感染初期，EB病毒只 存在于淋巴细胞中并增殖，疾病没有发展到细胞裂解程度，故外周血血浆中EBV DNA 含量极低甚至不存在， 当 EBV DNA 含量低于方法学的最小检出限 时，就不能被有效检出。 外周血:我们公司外周血提取试剂经红细胞裂解液去除红细胞后，提取的是外周血单个核细 胞内的EBV DNA，与病毒生活史或者疾病发展无明显关联，即使疾病病程没有发展到细胞裂解程度，也能检测到体内感染的EBV DNA。Stevens等推荐全血标本作为临床首选标本，因为采用血浆或咽拭子标本检测时定植在细胞内的病毒会被漏检。 任何临床症状背景下外周血样本都适合进行EBV DNA检测，且阳性率及定值 结果相对血浆更高。 前期没有使用外周血样本检测的原因是公司一步法提取试剂对外周血提取效 果不佳，磁珠法提取步骤复杂，柱提法需要外购且操作复杂。 血浆:血浆检测 EBV DNA含量可以协助临床判断鼻咽癌的分期、转移、复发、预后和指 导临床监测鼻咽癌患者的疗效。但在传染性单核细胞增多症等临床感染率上明显低于外周血的检测阳性率，故在 检测非burkitt淋巴瘤和鼻咽癌的样本时，我们检测血浆与外周血样本的阳性率不会有明显差异。但是在传染性单核细胞增多症等疾病检测方面阳性率就明显低于外周血的检测阳性率，在传染性单核细胞增多症等患者检测方面不建议检测血浆样本。 我们检测血浆样本是因考虑到血浆样本提取步骤相对简单，能减少操作。 但只建议在检测burkitt淋巴瘤和鼻咽癌患者样本时使用 咽拭子:EB病毒是儿科住院感染的重要病原体，病毒传播途径主要为唾液，多数感染后无 明显症状或引起轻度咽炎和上呼吸道感染、肺炎、支气管炎等。EB病毒感染后的初期，主要在口腔部和延腺的上皮细胞内增殖， EB病毒大量存在于唾液腺及唾液中，且早于血液等其它体液，因此，咽拭子标本(鼻咽分泌物)更好，阳性率高，且标本采集方便，易被患儿及家长接受。 参考文献: 外周血血浆和白细胞 EBVDNA 检测的比较(秦娟， 何雅军) 血浆EB 病毒DNA含量定量检溅对鼻咽癌的诊断(陈向军 余滋中 李国义) 实时荧光定量PCR法检测鼻咽癌患者血浆游离EB病毒 DNA的临床应用(曾刚毅) 荧光定量PCR法检测鼻咽癌患者全血和血浆标本EB病毒DNA的比较研究(刘涤瑕) 荧光定量PCR检测儿童EB病毒感染的临床研究(刘玉静 崔晓梅 李俊) 小儿咽拭子EB病毒DNA-PCR临床应用(汤春波 ) 荧光定量检测EB病毒感染标本的选择(张润书 郭大丽 安会波) Q:EB病毒检测时，采用PCR方法检测核酸与采用酶联免疫检测抗原抗体的结果有什么差异,产生差异的原因是什么, A:ELISA检测 E B V各项抗体是临床诊断EBV感染的重要指标之一， 但它实际上是检测人体对EBV感染的免疫反应状态，无法检测病毒自身，也就无法更准确灵敏地反映EBV感染的情况。例如EBV VCA-I gM抗体的检测，仅在EBV首次感染急性期可见抗体滴度有明显升高，恢复期和健康携带者抗体滴度稳定 在低水平，再次感染或免疫抑制患者往往不表现此抗体的升高。 1062例患儿EBV-DNA阳性率为46.61%,EBV-IgM阳性率6.78%,不同年龄段的儿童由于免疫系统发育处于不同阶段,对EB病毒的免疫应答可能存在差异。 EBV是条件致病病毒，一般情况下它可以寄生在咽喉部位，咽部上皮细胞上有EB病毒受体，当机体免疫力下降或进行一些创伤性治疗时，病毒会乘机侵入血液系统，进而通过血液循环播散至全身，可累及全身各器官系统。这也说明了,,,感染最早发生的部位是咽部。因此，咽部上皮细胞内,,,的复制比血液中VCA-IgM出现的要早，检测咽拭子EBV-DNA以确诊小儿EBV感染可以比血清学检测更早给临床提供诊断依据，故检测结果存在差异。 EB病毒感染IgM抗体与病毒DNA的相关性分析 (柳文菊 杜昆) 篇三:EB病毒感染 病毒是最小的一类微生物，基本结构包括核心、衣壳，部分衣壳外包有囊膜，核心含病毒的遗传物质(DNA或RNA)和核蛋白。 病毒感染的过程 病毒附着于细胞表面—与细胞表面病毒受体结合—进入细胞内—潜伏感染—病毒血症期—经血液或淋巴在体内传播。 病毒感染的检测， 病毒分离:特异性强，但时间长，技术要求高 病毒抗原的检测:检测到抗原即可诊断该病毒感染，但不能说明急性、慢性感染或病毒携带状态，需结合抗体 病毒核酸检测:常用PCR 原理:双链DNA分子—高温解链—降温后与特异性互补引物结合 可诊断病毒感染，但不能说明急性、慢性及病毒携带状态。如人感染EBV及HHV6后，建立终身潜伏感染，咽部长期不定时的排出病毒。因此PCR检测的样本最好直接取自受累的组织或器官。 病毒特异性抗体检测 急性感染，特别是原发感染早期，首先出现IgM，一般持续2-3个月消失，感染1周左右IgG爱是出现，逐渐升高，数周或数月达高峰，逐渐降低至一定水平后持续很长时间或终生存在，只要IgG 滴度进行性升高，可诊断为病毒的急性感染，一般是2分血清标本，间隔2-4周，如抗体滴度达4倍以上增高，可诊断为急性感染，但不能做出早起诊断。如IgM阳性，考虑为病毒急性或近期感染，但不能确定传染性。 EB病毒抗体四项 1.VCA-IgG(衣壳抗原) 疾病早期即可出现，可持续终生 2. VCA-IgM 疾病早期即可出现，1-2周后可消失 3.EA-IgM(早期抗原) 疾病急性期可出现， 3-5周高峰后逐渐消失 4.NA-IgG(核心抗原) 出现于发病后,,,周，阳性的效价亦较低，但可持续终生。如发现该抗体，则提示感染实际早已存在。 EBV抗体四项的判断 一，EBNA-IgG(+) CA-IgG(+),EA-IgG(+)/CA-IgM(+):复发(再激活)。 高亲和力的CA-IgG:既往感染。 二，EBNA-IgG(-)， CA-IgG,IgM(-)，无感染 CA-IgG(+): CA-IgM(-)和高亲和力的CA-IgG，EA-IgG(-)为既往感染，EA-IgG(+)为复发 CA-IgM(+)和低亲和力的CA-IgG，原发感染。 胡老师: EB抗体四项:EBCA-IgG EBCA-IgM EA-IgA(IgM) NA-IgG 4阴性，只要1,2有一项阳性(其余可阳性可阴性)即为原发感染 1阳性，4阳性，余阴性为既往感染。 1,4阳性，同时2和(或3)阳性为既往感染再激活。 传染性单核细胞增多症 由EB病毒原发感染引起 其他病原如CMV、弓形虫等为类传单。 有免疫缺陷的注意淋巴组织细胞增殖性疾病 EB病毒为双链DNA病毒，属疱疹病毒类 人疱疹病毒包括:人疱疹病毒I型(口型)、人疱疹病毒II型(生殖器型)、 水痘带状疱疹病毒、EB病毒、CMV病毒、人疱疹病毒6、7、8型 传播:呼吸道(接吻病)，输血也可传播。年龄越大症状越重。 机理:EBV—咽喉(淋巴结肿大)—血液(病毒血症)—全身(肝脾、淋巴系统)—B细胞、T细胞(传单感染B淋巴细胞，免疫缺陷病者易感染T淋巴细胞、自然杀伤细胞，更易引起淋巴增殖性疾病，淋巴结活检可以检测感染了什么细胞)—细胞毒性T淋巴细胞(异淋) CD系列:CD4降低，CD8升高，CD4/CD8下降，NK下降，异淋升高。 全血DNA10 、10以上，血清DNA升高且持续时间长，注意慢活EB。 诊断1典型症状:三联征为发热、咽峡炎、淋巴结肿大，部分有肝脾 肿大、皮疹 其他症状:眼肿、鼻塞、打鼾(淋巴回流障碍) 2原发EB病毒感染的证据(如无症状，EB抗体四项提示原发感染，则可诊断原发EB病毒感染，依据抗体四项结果，亦可诊断EB病毒既往感染，EB病毒既往感染再激活) EBVCA-IgG+(低亲和力),CAIgM+. VCA-IgM抗体初期为阳性，以后转阴 双份血清VCA-IgM抗体滴度,倍以上增高 EA抗体一过性升高 VCA-IgM抗体初期阳性，EBNA抗体后期阳转 3其他需完善的检查:包括:血常规、细胞形态(异淋升高考虑传单可能性大，但不是确诊依据，其他病毒感染异淋也可升高)、血沉、CRP、生化全项、风湿三项、心电图、腹部B超、CD系列，骨穿、凝血功能、根据病情酌情增减检查项目。 其实传单不必须查DNA(DNA一定为阳性) 但EBDNA阳性可能为1原发感染 2再激活 3既往感染、潜伏感染 抗体是关键:VCA-IgM早期出现，VCA-IgG同时早期出现，甚至可早于VCA-IgM，故VCA-IgG阳性，VCA-IgM阴性也可为原发感染，但要诊断传单一定要有典型症状(一般VCA-IgM阳性更被认可)，且再复 查时IgM应该转为阳性了。EA-IgA(IgM)亦早期出现，稍晚于CA-IgM，NA-IgG4-6周以后出现，持续终生，NA-IgG阳性一定为既往感染。 慢活EB:1持续或反复出现传单样症状，大于6月(或3月)2高拷贝DNA 3组织中查到EB病毒，EBER阳性 (EB抗体阳性，VCA-IgG升高，EA-IgA升高，EB-DNA阳性，NA-IgG也可阳性了(4-6周已出现了) 全血DNA大于10 、10以上，血浆/血清DNA持续阳性(拷贝数10 .5以上很有意义)，要做活检。 小男婴，EBV阳性，且有症状，一般较重，需注意有无免疫缺陷，要详细询问家族史、有无夭折情况。 传单治疗: 1(一般治疗:急性期应卧床休息，加强护理，避免发生严重并发症。脾脏显著增大时尤应避免剧烈活动，以防破裂。 2(抗病毒治疗:更昔洛韦5mg/Kg次，Q12h，静点，抑制病毒复制，缩短病程，一般认为最多2周。或阿昔洛韦10mg/Kg次，Q8h(肝损害严重的偶尔 用)。 抗生素对本病无效，只用于伴发细菌感染时。禁用氨苄青霉素、头孢曲松(易过敏，或发生药超)。 3. 调节免疫: 病情重的患儿可给予丙种球蛋白调节免疫，激素不常规应用，更昔洛韦治疗不理想，应用2周仍无效，应考虑其他可能，如噬血,免疫缺