δ阿片受体激动剂DADLE对脓毒症大鼠肝组织高迁移率族蛋白1水平的影响

δ阿片受体激动剂DADLE对脓毒症大鼠肝组织高迁移率族蛋白1水平的影响 δ阿片受体激动剂DADLE对脓毒症大鼠肝 组织高迁移率族蛋白1水平的影响 2012年1月第50卷第3期基础研究? j5i阿片受体激动剂DADLE对脓毒症大鼠肝组织 高迁移率族蛋白1水平的影响 陶玉龙唐成武?冯文明鲍鹰朱呜 浙江省湖州I市第一人民医院外科浙江省湖州市第一人民医院分子外科研究所.浙江湖州313000 【摘要]目的研究8阿片受体激动剂DADLE(D—Ala2一D—LeuS-enkephalin)对脓毒症大鼠肝组织高迁移率族蛋白1 (HMGB1)水平的影响.方法将96只Sprague—Dawley(SD)大鼠分为假手术组(SO),脓毒症组(SEP),DADLE组『制 模后立即给药DADLE(5mg/kg,腹腔内注)1,每组32只.采用改良盲肠结扎穿孔方法(CLP)建立大鼠脓毒症模型,于 制模后6h,12h,18h,24h每组各取8只处死取材,WesternBlot法检测肝组织HMGB1水平.结果12h时SEP 组和DADLE组HMGB1水平与S0组相比均明显升高(P<0.051,且DADLE组明显低于SEP组(P<0.051:18h时 SEP组和DADLE组HMGBl水平达到最高.同样DADLE组明显低于SEP组(尸<0.05);24h时SEP组和DADLE组 HMGBl水平较18h有所降低,但DADLE组仍明显低于SEP组(P<0.05).结论DADLE能明显降低脓毒症大鼠 肝组织HMGB1水平. 【关键词】DADLE;脓毒症;高迁移率族蛋白1 [中图分类号】R826.3【文献标识码】A【文章编号】1673—9701(2012)03—0007—02 Effectofdelta-opioidreceptoragonistDADLEonlivertissueHMGB1level inratwithsepsis TA0YulongTANGChengwuFENGWenmingBA0YingZHUMg DepartmentofHepatobiliarySurgeryandMolecularSurgery,theHuzhouCtiyFirstPeople'SHospital,ZhejiangProvince, Huzhou313000,China [Abstract]ObjectiveTostudytheeffectofdeha-opioidreceptoragonist(DADLE)onlivertissueHMGB1levelinratwith sepsis.MethodsAllof96SDratswererandomlydividedintoshamoperatedgroup(so),septicgroup(SEP),andDADLE group(DADLE).Septicmodelwasproducedbycecalligationandpuncture(CLP1.InSOgroup.theabdomenwasopenedwith— outanyothertreatment.InDADLEgroup,DADLEwasadministeredatadoseof5mL/kgbyintra—peritonealinjectionaf- terCLP.Ratsweresacrificedat6h,12h,18hand24hafterCLP.LivertissueHMGB1levelwasdeterminedbyWest— errBlot.ResultsLivertissueHMGB1levelsofSEPandDADLEgroupbegantoincreaseat12h,andreachedthepeak around18hafterCLP.Notably,livertissueHMGB1levelsofDADLEgroupat12h,18hand24hweresignificantlylow— eredthanthoseofSEPgroup<0.05).ConclusionDADLEcansignificantlydecreaselivertissueHMGB1levelofseptic rat. [Keywords]DADLE;Sepsis;High-mobilityGroupbox1Protein 脓毒症是严重感染,创伤及大手术等应激状况时常见的 并发症.已经成为当今重症监护室的首要死亡原因l11.脓毒症 时多种炎症因子参与了脓毒症的病理过程,高迁移率族蛋白 B1(highmobilitygroupbox1protein,HMGB1)作为潜在晚期炎 性因子.是脓毒症致死效应的重要炎性介质,是致急性肝损 伤(ALI)的一种重要的细胞因子121.干预HMGB1可有效防止 MODS的发生与发展_]-41.8阿片受体激动剂DADLE(D—Ala2- D—LeuS-enkephalin)是一种人工合成的非选择性8阿片受体 激动剂,我们以往的研究发现DADLE能明显减轻脓毒症大 鼠肝组织损伤【51.本研究旨在探讨其对脓毒症大鼠肝组织 [基金项目】2009年度浙江省湖州市第二批科技计划项目(2009YZ12) '通讯作者 HMGB1水平的影响,从而对DADLE在脓毒症中对肝组织的 保护作用进行初步阐述. 1材料与方法 1.1实验材料 DADLE(D-Ala.Leu-enkephalin)分子式C29H39N507, 购自美国Sigma公司. 1.2动物分组及脓毒症模型建立 清洁级健康SD雄性大鼠96只,体重270,320g,南上海 斯莱克实验动物有限责任公司提供,随机分为DADLE组,假 手术组(SO组)和脓毒症组(SEP组),每组32只,参照 Wiehterman等[63的改良的肓肠结扎穿孑L(CLP)方法建立大鼠 脓毒症模型.假手术组除不施行CLP,其余操作同SEP组, CHINAMODERNDOCTOR中国现代医生7 ? 基础研究? DADLE组在模型建立后立即腹腔注射浓度为0.5mggmL的 DADLE(剂量:5mL/kg体重).CLP后6h,12h,18h,24h每 组断颈处死8只大鼠. 1.3肝组织HMGB1蛋白水平检测 将肝组织蛋白转印至硝酸纤维素膜后在封闭液巾与一 抗(兔抗HMGB1多克隆抗体,购白美国BDPharmingen公 司)结合,然后与二抗(辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG, 购自北京中山生物技术有限公司1室温孵育.采用化学发光 反应试剂盒进行发光.暗室曝光后底片经图像 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 系统 (LEICAQ一5501W,德圄Leiea公司)处理,根据各条带的吸 光度值进行定量分析. 1.4统计学处理 采用SPSS10.0软件进行处理,计量资料以(2+s)表示,多 组间比较采用方差分析,组间两两比较采用q检验,P<0.05 为差异有统计学意义. 2结果 DADLE对脓毒症大鼠肝组织HMGB1水平的影响见表1. CLP后6hSEP和DADLE组肝组织HMGB1水平开始升高, 但三组间无统计学意义(P>0.05);12h时SEP组和DADLE 组HMGB1水平与SO组相比均明显升高(P<0.051,且DA— DLE组明显低于SEP组(P<0.05);18h时SEP组和DADLE 组HMGB1水平达到最高.同样DADLE组明显低于SEP组 (JP<0.05);24h时SEP组和DADLE组HMGBI水平较18h 有所降低,但DADLE组仍明显低于SEP组(P<0.05). 表1各时间点肝组织HMGB1水平比较(2+s) 注:与SEP组比较,P=0.0157;与SEP组比较,P=O.0011;与SEP 组比较.P<0.05 3讨论 本研究采用的大鼠CLP模型与临床相关性较强的脓毒 症模型,血中内毒素水平,细胞因子升高幅度.内毒素检出率 及细菌培养(包括革兰阳性菌和革兰阴性菌1阳性率高,单纯 的抗炎治疗在此模型失败都与临床相似l7l. 脓毒症时细菌产生内毒素导致大量炎症因子释放,包 括早期炎症因子(如TNF—和IL一1B)和晚期炎症因子(如 HMGB1).正是这些炎症因子,导致组织器官的损伤_8_I然 8中国现代医生CHINAMODERNDOCTOR 2012年1月第50卷第3期 而.一些针对早期炎症因子的治疗在临床上并未收到良好 的疗效.因为早期炎症因子在炎症发展的早期阶段就已经 开始释放,并未给拮抗治疗留下足够的时间窗.况R.,在全 身炎症反应启动之后再使用TNF—ot和IL一1B的抑制剂也 无法取得明显的疗效l1UI.有学者发现,使用抗HMGB1抗体 能明显减少脓毒症小鼠的死亡率,即使是在脓毒症发生 24h之后仍有明显的保护作用…1,这意味着钊对HMGBl的 治疗策略具有良好的时间窗,我们以往的研究也发现,DA— DLE在CLP后4h给药仍能对脓毒症大鼠起到保护作用, 其机制可能与抑制晚期炎症子HMGBI表达有关1121, 此.HMGBI可能是治疗脓毒症的新靶点.本研究『t1DADIE 组肝组织HMGB1水平在12h,18h和24h均明显低于 SEP组,表明DADLE能明显抑制肝组织HMGB1的表达,减 轻急性肝损伤,从而对脓毒症大鼠肝损伤起到一定的保护 作用. 【参考文献】 [1】AngusDC,Linde—ZwirbleWT,LidickerJ,eta1.Epidemiologyofsevere sepsisintheUnitedStates:analysisofincidence,outcome,andassoeiat— edCOSTSofcare[J].CritCareMed,2001,29:1303-1310. 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