坤舒康颗粒抗大鼠棉球肉芽肿形成及其作用机制[Word文档]

坤舒康颗粒抗大鼠棉球肉芽肿形成及其作用机制[Word文档] 坤舒康颗粒抗大鼠棉球肉芽肿形成及其作用机制 关键字: 坤舒康颗粒抗大鼠棉球肉芽肿形成及其作用机制 本文为Word文档，感谢你的关注, [摘要] 目的 ,^察坤舒康颗粒对大鼠棉球肉芽肿的抑制作用，初步探讨其作用机制。 方法 将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药地塞米松组(阳性组)及坤舒康颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组10只。除假手术组外，其余大鼠麻醉后，于左前肢腋下植入灭菌棉球20 mg。坤舒康各剂量组大鼠分别灌胃不同剂量坤舒康混悬液(20、10、5 g/kg体重)，阳性药组大鼠灌胃地塞米松混悬液(0.08 g/kg体重)，连续给药14 d。末次给药后麻醉，取出棉球，干燥称重;取胸腺、脾脏，称重，计算胸腺、脾脏指数;股动脉取血，分别 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 血浆6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、血栓烷B2(TXB2)及血清白介素-1β(IL-1β)、一氧化氮(NO)水平。 结果 与假手术组比较，模型组大鼠的胸腺及脾脏指数明显降低(P 0.05)，坤舒康颗粒高剂量、中剂量组大鼠血浆6-keto-PGF1α、TXB2及血清IL-1β、NO水平均明显降低(P < 0.01或P < 0.05)。 结论 坤舒康颗粒对慢性肉芽肿性炎症具有抑制作用，其抗炎作用机制与抑制炎症介质释放有关。 [关键词] 坤舒康颗粒;棉球肉芽肿;6-酮前列腺素F1α;血栓素B2;白介素-1β;一氧化氮 [] R9 [] A [] 1673-7210(2017)01(b)-0012-04 Inhibitive effect and mechanism of Kunshukang Granules on the formation of cotton ball granuloma in rats ZHANG Zhong1 SU Hongning2 LIU Jiao3 REN Yanqing3 ZHANG Hongzhu3 1.Dispensary of Traditional Chinese Medicine， Tangshan Qianxi Traditional Chinese Medicine Hospital， Hebei Province， Qianxi 064300， China; 2.Dispensary of Traditional Chinese Medicine， the Forth Hospital of Shijiazhuang， Hebei Province， Shijiazhuang 050000， China; 3. Department of Pharmacology， School of Pharmacy， Hebei College of Traditional Chinese Medicine Hebei Traditional Chinese Medicine Dispensing Granule Engineering Technology Research Center， Hebei Province， Shijiazhuang 050200， China [Abstract] Objective To study the inhibitive effect and possible mechanism of Kunshukang (KSK) Granules on cotton ball granuloma model. Methods Sixty SD rats were randomly divided into 6 groups: control group， model group， Dexamethasone group， high dose KSK group， middle dose KSK group and low dose KSK group. All groups except control group rats were implanted 20 mg cotton ball in left armpit. The rats in every dose KSK groups were administrated KSK suspension (20， 10， 5 g/kg)， and the rats in Dexamethasone group were administrated Dexamethasone suspension(0.08 g/kg) for 14 days. Then the cotton ball were removed， dried and weighed. All rats were fetched and weighed thymus and spleen， taken blood into analysis 6-keto-PGF1α， TXB2， IL-1β and NO. Results Compared with sham-operated group rats， the thymus and spleen index of model group rats were significantly reduced (P < 0.01)， and the level of 6-keto-PGF1α，TXB2， IL-1β and NO of model group rats were significantly raised (P [Key words] Kunshukang Granules; Cotton ball granuloma; 6-keto-PGF1α; TXB2; IL-1β; NO 坤舒康颗粒为石家庄第四医院制剂，是河北省新版农合药品目录品种。本品主要由丹参、蒲公英、赤芍等药组成，具有清热利湿、解毒活血、化瘀止痛功效，主要用于腹痛带下、症瘕积聚、小腹胀满疼痛等病症的治疗[1]。本品在临床应用多年，显示其对慢性盆腔炎的治疗效果显著，但其作用机制不明[2]。本研究通过建立大鼠棉球肉芽肿慢性炎症模型，观察坤舒康颗粒的抗炎作用，并初步探讨其作用机制。 1 材料与方法 1.1 实验动物 SD大鼠，清洁级，雌性，体重180,200 g，由河北医科大学实验动物中心提供，实验动物使用许可证号SYXK(冀)2011-0047，动物合格证号1509046。动物在河北中医学院中药药理实验室分笼饲养，恒温恒湿，普通饲料，自由饮水。 1.2 药物与试剂 坤舒康颗粒(石家庄第四医院，批号20150825)。取200 g坤舒康颗粒，加0.5% CMC-Na混匀，定容至100 mL，即得坤舒康颗粒高剂量混悬液(2 g/mL);将坤舒康颗粒高剂量混悬液稀释1/2，即得坤舒康颗粒中剂量混悬液(1 g/mL);将坤舒康颗粒中剂量混悬液稀释1/2，即得坤舒康颗粒低剂量混悬液(0.5 g/mL)。庆大霉素注射液(8万U，河南润弘制药股份有限公司，批号1506172)。醋酸地塞米松(0.75 mg，天津天药药业股份有限公司，批号150114)。将醋酸地塞米松片研碎，精密称取800 mg，加0.5% CMC-Na混匀，定容至100 mL。血栓烷B2(TXB2)放射免疫 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 药盒(北京普尔伟业生物科技有限公司)，6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)放射免疫分析药盒(北京普尔伟业生物科技有限公司)，白介素-1β(IL-1β)放射免疫分析药盒 (北京普尔伟业生物科技有限公司)，一氧化氮(NO)分析试剂盒(南京建成生物工程研究所)。 1.3 实验器材 ML204分析天平(瑞士Mettler toledogo公司)，DHG-9023A电热恒温鼓风干燥箱(上海合恒仪器设备有限公司)，5417R型离心机(德国Eppendorf公司)，756MC型紫外-可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，全自动γ放免分析仪(北京金泉水科技有限公司)等。 1.4 模型建立、分组给药 将60只大鼠随机分成6组，分别为坤舒康颗粒高剂量组(20 g/kg体重)、中剂量组(10 g/kg体重)、低剂量组(5 g/kg体重)，阳性药地塞米松组(阳性组)(0.08 g/kg体重)，模型组，假手术组，每组10只。除假手术组外，其余各组大鼠以10%水合氯醛麻醉后，于左前肢腋下近背部位置以碘酒消毒，切开1 cm长小口。取灭菌棉球约20 mg，另加庆大霉素1 mL，从小切口植入皮下，随即缝合皮肤，建造慢性炎症模型。假手术组大鼠仅施以手术操作，但不植入棉球。从手术当日开始，各组大鼠灌胃给药或蒸馏水，容量为10 mL/kg体重，连续14 d。剖开胸腔、腹腔，采集胸腺、脾脏，腹主动脉取血，用于指标的检测。 1.5 指标检测 1.5.1 称取肉芽干重 末次给药后禁食12 h，对大鼠进行麻醉，打开大鼠原手术切口，将棉球同周围结缔组织一起取出，剔除脂肪组织，放置于60?干燥箱中烘干12 h，称重。将称得的重量减去棉球重量即得肉芽干重。 1.5.2 计算胸腺指数和脾脏指数 迅速剖开大鼠腹腔和胸腔，切取胸腺和脾脏，称重，并计算与体重之比，为胸腺指数和脾脏指数。 1.5.3 检测血液生化指标 大鼠股动脉取血5,10 mL，置于放有0.1 mL 1%肝素生理盐水溶液的试管中，制备血浆，检测6-keto-PGF1α及TXB2含量;另取股动脉血，置于离心 管中，静置，待血液凝固后，将其离心分离血清(3000 r/min，10 min)，小心吸出上清，检测白介素1β(IL-1β)及一氧化氮(NO)含量。 1.6 统计学方法 采用SPSS 19.0统计软件对数据进行分析，计量资料以均数?标准差(x?s)表示。各组间采用单因素方差分析，均数间两两比较采用LSD-t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 坤舒康颗粒对大鼠棉球肉芽肿的影响 坤舒康颗粒高剂量组及阳性组大鼠的肉芽干重明显低于模型组，差异有统计学意义(P < 0.05)。见表1。 2.2 坤舒康颗粒对大鼠胸腺及脾脏指数的影响 与假手,g组比较，坤舒康颗粒各剂量组、阳性组及模型组大鼠的胸腺、脾脏指数均显著降低(P 0.05)。见表2。 2.3 坤舒康颗粒对大鼠血浆6-keto-PGF1α及TXB2含量的影响 与假手术组比较，模型组大鼠血浆6-keto-PGF1α及TXB2水平显著升高(P 0.05);坤舒康颗粒高剂量组、中剂量组及阳性组TXB2含量均显著降低(P < 0.01)，坤舒康颗粒低剂量组则明显降低(P < 0.05)。见表3。 2.4 坤舒康颗粒对大鼠血清IL-1β及NO含量的影响 与假手术组比较，模型组大鼠血清IL-1β及NO水平显著升高(P 3 讨论 慢性盆腔炎是指女性内生殖器官及周围的结缔组织、盆腔腹膜发生的炎症，为女性的常见病、多发病，发病率高达30%[3-4]。此病因为反复发作、缠绵难愈，可引起盆腔粘连、盆腔痛、异位妊娠、不孕等后遗症，给患者及家属带来极大痛苦[5]。现西医多以抗生素进行治疗，此法对盆腔炎急性发作期效果较好[6-7]。而慢性盆腔炎发展过程中已无病原 体存在，其机制主要与炎性浸润造成局部组织抗氧化能力下降，代谢减慢，血流障碍有关，患处发生粘连或水肿[8]。因此抗生素对慢性盆腔炎疗效并不显著[9]。 近年来，中医药治疗慢性盆腔炎因疗效显著，不良反应轻微受到广泛关注[9-10]。中医认为，慢性盆腔炎多属湿热之邪侵袭冲、任、带脉，以致冲任失调、带脉失约。湿邪侵袭机体，多因饮食不节，过食辛辣肥甘之品，损伤脾土，脾失健运之职，水谷精微不能上输以生血，反聚为湿。湿邪郁久化热，流注下焦，损伤任、带二脉而为带下病。湿热内蕴，最易阻遏气机。气为血之帅，能够行血，气机不利，不能运血畅行，以致血行受阻。妇人以血为本，气血调和则五脏安和，经脉通畅，冲任充盈。若气滞血瘀，则冲任胞脉不畅，经血滞于胞宫。或湿热之邪侵犯胞宫血海，破血妄行，冲任被扰，则行经日久不止，造成月经不调。湿邪停聚日久，凝聚而成痰饮，痰饮、血瘀、气滞蕴结胞宫而成,Y瘕，冲任受阻，不通则痛。治疗多以用清热、祛湿、理气、活血为法[11]。石家庄市第四医院院内制剂坤舒康颗粒，是由蒲公英、当归、赤芍、丹参、川芎、醋三棱、醋莪术、黄芩和泽泻组方而成。其中，蒲公英清热解毒，消肿散结;黄芩清热燥湿，泻火解毒;泽泻利水消肿，渗湿，泄热;三药共用以清下焦湿热。当归补血活血，通经活络;赤芍能清血分实热，散瘀血留滞;丹参活血调经，祛瘀止痛;川芎活血行气;四药同用活血补血兼用。三棱为血中气药长于破血中之气，莪术为气中血药，善破气中止血;二药伍用，气血同治，活血化瘀，行气止痛，化积消,Y。全方具有清热利湿、解毒活血、化瘀止痛功效，临床主要用于慢性盆腔炎的治疗，但其作用机制不清[12-13]。现代研究显示，坤舒康颗粒组方中包含的清热药、活血化瘀药、祛风湿药均有抗炎作用，推测本药治疗慢性盆腔炎的作用应该与抑制慢性炎症反应过程有关[14-16]。因此，本实验采用大鼠棉球肉芽肿模型，观察坤舒康颗粒的抗炎作用，并分析其可能的机制。 棉球肉芽肿为常用慢性炎症模型，是在局部植入异物(棉球)连续造成刺激，引起迟发型变态反应，形成幼稚的结缔组织即肉芽肿[17]。本研究通过观察药物对肉芽重量的影响，以判断其抑制慢性炎症反应的效果。实验结果显示，坤舒康颗粒高剂量组大鼠棉球肉芽肿重量明显低于模型组，可见本药有较好的抑制慢性炎症作用。 在慢性炎症反应的过程中，存在着炎症细胞和免疫细胞功能的紊乱[18]。其中，IL-β及NO的合成和释放均会出现异常。IL-β能够促进炎症细胞的趋化和黏附，吸引并活化中性粒细胞渗出到炎症区，还能够增加血管壁通透性、刺激血小板活化因子和前列腺素类物质的释放[19]。NO是炎症反应和免疫应答中关键性的调节物质，能够影响炎症反应的进程。NO通过促使白细胞与血管内皮细胞发生黏聚，产生过氧化物造成细胞损伤，扩张血管平滑肌，使血管通透性增加，造成组织水肿，从而加重炎症反应。TXA2和PGE2均为花生四烯酸(AA)的代谢产物，同属前列腺素类，是重要的炎症因子。其中PGE2能够舒张小血管，增加微血管通透性，引起水肿;PGE2还是一种重要的止痛物质，是引起炎性疼痛的主要原因。TXA2除能引起炎症反应外，还能促进血小板聚集，加重血管损伤。但TXA2和PGE2均不稳定，半衰期很短，极易代谢为更为稳定的TXB2和6-keto-PGF1α[20]。在本研究中，所复制的棉球肉芽肿大鼠模型血浆TXB2、6-keto-PGF1α及血清IL-β、NO水平明显升高，符合慢性炎症反应的病理改变，表示造模成功。 本研究结果显示，坤舒康颗粒各剂量组大鼠的胸腺指数、脾脏指数与模型组相比，无显著性差异，而阳性组则显著降低，表示坤舒康颗粒应用14 d对胸腺、脾脏这两个免疫器官没有显著影响，初步证实本药的安全性高于地塞米松。以坤舒康颗粒进行治疗，可使棉球肉芽肿模型大鼠血浆TXB2、6-keto-PGF1α及血清IL-β、NO水平明显降低，证实该药的抗炎作用机制与抑制炎症介质释放有关。 [参考文献] [1] 冯梅梅，陈新磊，孟瑞雪.坤舒康颗粒治疗慢性盆腔炎500例疗效观察[J].河北医药，2008，30(4):474. 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