高效液相色谱法测定盐酸西替利嗪血药浓度及其药动学研究

高效液相色谱法测定盐酸西替利嗪血药浓度及其药动学研究 高效液相色谱法测定盐酸西替利嗪血药浓 度及其药动学研究 中南药学2009年4月第7卷第4期CentralSouthPharmacy.April2009,Vo1.7N【).4 测得3批样品中补骨脂素的平均含量为65.85mg? 瓶一.异补骨脂素的平均含量为62.91mg?瓶,,根据生 产的实际情况,拟定补骨脂酊中补骨脂素,异补骨脂素的含 量限度均应?50mg?瓶,. 3讨论 补骨脂酊采用6O乙醇制备,故采用加甲醇直接稀释 定容的方法制备样品溶液.在本文的色谱条件下能够排除其 它组分的干扰,并使两个含量测定组分达到有效分离.样品 溶液的制备方法简单.是本方法的特点之一. 本试验考察了不同柱温(2O,25,30,35C),不同流 动相组成比例甲醇一水(55:45,45:55,40:60,35: 65),不同流速(0.8,1.0,1.2mI?rain)对测定结果 的影响,结果表明考察范围内温度和流速的变化对于测定结 果的影响较小,2个目标峰的分离度均>1.5,RSD<~3. 流动相中甲醇的组成比例达到45以上时,2个目标峰的分 离度<1.5.不能达到有效分离,因此流动相中甲醇的比例 最好固定为4O. 3批被测样品中补骨脂素异补骨脂素的含量差异比较 大,可能是因为不同产地,不同批次投料用的补骨脂药材中 补骨脂素,异补骨脂素含量差异所致.为了有效控制产品质 量,因此建议所用药材最好选取道地药材成GAP控制产地 的药材. 参考文献 ',,,,, Eli中国药典2005年版.一部Es].2005:129.附录114—116. E2]梁爱民,徐立,陈刚,等.高效液相色谱法测定复方补骨脂冲 剂中补骨脂素和异补骨脂素的含量Jj.药学实践杂志? 2007,25(5):334336. E3]鸟宁奇.永格.高效液相色谱法测定补肾酒中补骨脂素与异补骨 脂素的含量EJ].时珍国医国药,2005,16(12):12641265. [4黄怀鹏,史桥,申丽娟,等.再生胶囊的质量标准研究[J]. 中成药,2008,30(10):附15一附17. [s]李晶,文萍,李才堂.乐孕宁颗粒含量测定方法研究[J.医 药导报,2008,27(11):1402—1403. [6_杨帆,邓红,陈美娟.等.HPIc测定"骨炎1号"方中淫羊 藿苷,补骨脂素及异补骨脂素的含量[J7.中成药.2005,27 (2):170—172. [-73王永生,白雪媛,王恩思.高效液相色谱法测定慢肠灵胶囊中 异补骨脂素含量[J].中国医院药学杂志,2008.28(3): 247—248. (收稿日期:2008—1229;修回日期:200903—04) 高效液相色谱法测定盐酸西替利嗪血药浓度及其药动学研究 刘茜,洪倩倩,赵辉,李贺,钟丽丽,杜红文,王楠(沈阳药科大学,沈阳110016) 摘要:目的建立高效液相色谱测定血浆中盐酸西替利嗪浓度的方法,并研究其药动学行为.方法18名受试者 单剂量口服盐酸西替利嗪10mg后,采用HPIC法测定血药浓度,应用AIC法判别房室模型,并利用DAS软件计 算药动学参数.结果血浆中西替利嗪在20.0,1000ng?mI线性关系良好(r一0.9981),平均回收率为 103.4,日内RSD~7.79.日间RSD~12.8%.最佳房室模型为二室模型(w一1/,AIC=一j.565),单剂 量口服10mg盐酸西替利嗪后的药物动力学参数q为(2.73?7.66)h,8为(0.076?0.049)h,f为(0.88? 0.34)h.t178为(22.3?26.4)h,(为(268?67.8)ng?mI,,AUC036为(1598? 395)ng?h?mI, AU为(1786?427)ng?h?mI.结论该分析方法简单,快速,准确,精密度高,适用于人血 浆中盐酸西 替利嗪浓度的测定.盐酸西替利嗪的血浆药动学参数与国内外文献报道基本一致. 关键词:盐酸西替利嗪;高效液相色谱法;血药浓度;药物动力学 中图分类号:R927.2,R969.1文献标识码:A文章编号:1672—2981(2009)04—027104 Determinationofcetirizinehydrochlorideinhumanplasma byHPLCanditspharmacokinetics lIUQian,HONGQian,qian,ZHAOHui,LIHe,ZHONGLi—li,DUHong— wen.WANGNan(ShenyangP口r— mac'eutic,alUnii~ercity.Shenyang110016) Abstract:ObjectiveToestablishanHPICmethodforthedeterminationofcetirizinehydrochl orideinhumanplasma, 作者简介:洪倩倩,女,硕士研究生,主要从事体内药物分析及药物代谢,药物动力学 研究工作,Tel:(024)23986298.E-mail: qianqian6260@126.COIII*通讯作者:刘茜,女.副教授,主要从事体内药物分析及药 物代谢,药物动力学研究工作,Tel:(024) 23986298,E-mail:lqzm@yahoo.com.cn 濑 CentralSouthPharmacy.April2009,Vo1.7No.4中南药学2009年4月第7卷第4期 andtostudyitspharmacokinetics.MethodsEighteenvolunteersreceivedasingleoraldoseof 10mgcetirizinetablets andtheplasmaconcentrationofcetirizinehydrochloridewasdifferentiatedbyHPLCmethod .Thecompartmentmodel wasdifferentiatedbyAICmethodandDASprogramwasusedtocalculatethepharmaeokinet icparameters. Results Thecalibrationcurvewaslinearwithin20.O,l000ng?mI_.(r一 0.9981).therecoverywas103.4%,andtheRS— Dsofintra-dayandinter-daywere?7.79and? 12.8Y00,respectively.Theoptimalcompartmentmodelfitthetwo- compartmentmodel(Wi一1/,AIC一一 5.565).Thepharmacokineticparametersofthevolunteersaftertakinga singledoseof10mgofcetirizinehydrochloridewereasfollows:awas(2.73?7.66)h 0.049)h一, 一,J3was(O.076? tmawas(O.88?0.34)h,t123was(22.3?26.4)h,Cwas(268? 67.8)ng?mL_.,AUCo-l{6was(15984-395) ng?h?mL,andAUwas(1786? 427)ng?h?mI.ConclusionThemethodissuitabletodeterminethe concentrationofcetirizinehydrochlorideinhumanplasmabecauseitisrapidandsensitive.T hepharmacokineticparam— etersofcetirizinehydrochloridearesimilartothosereportshomeandabroad. Keywords:cetirizinehydrochloride;HPIj|,;plasmaconcentrationpharmacokinetics 西替利嗪为抗组胺药物羟嗪为的活性羧酸衍生物,不 易透过血一脑屏障,与血浆蛋白结合率高,作用强而持久. 西替利嗪为新一代H受体阻断药,选择性与组胺靶细胞上 的H受体结合,阻断组胺H受体而发挥抗组胺作用. 临床用于治疗皮肤,呼吸系统,眼睛的过敏性疾病,包括荨 麻疹,特应性皮炎,过敏性鼻炎,过敏性哮喘,气道反应性 增高性咽喉炎EC. 本文建立了HPLC法测定健康志愿者口服盐酸西替利 嗪后的血药浓度,从药动学出发,判别其房室模型,计算药 动学参数,并分析其药动学特征,为开展盐酸西替利嗪临床 血药浓度监测及其临床应用提供依据. 1材料与仪器 1.1药品与试剂 盐酸西替利嗪片(山西津华晖星制药有限公司,规格: 10mg?片,,批号060501);盐酸西替利嗪对照品(山西 津华晖星制药有限公司,纯度99.5);内标盐酸羟嗪对照 品(中国药品生物制品检定所,纯度98.6,批号: 100266—200201);甲醇,乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析 纯. 1.2『义器 高效液相色谱仪(日本日立公司),配备I一7420型紫 外可见检测器(日本日立公司),L一711O泵(日本日立公 司),N3000色谱工作站(浙江大学),DAS统计计算软件 (中国药理学会数学药理专业委员会);TGL一16G型离心沉 淀机(上海安亭科学仪器厂);Xw一8O型涡旋混合器(上 海手术器械厂);循环水式多用真空泵(郑州长城仪器厂); BS124S型Sartorius电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限 公司). 2方法与结果 2.1研究对象 18名健康男性受试者,年龄20~30岁,体重指数19, 24,无继往病史和药物过敏史,精神状态良好,平时很少服 药,不吸烟,不嗜酒,试验前2周内未服用任何药物,经全 面体检正常,血常规,肝,肾功能及心电图检查均正常.实 验期间统一清淡饮食.采血期间禁烟酒和含咖啡类饮料,避 免剧烈运动.受试者于试验前签署知情同意书,并经伦理委 员会审批同意. |i 2.2研究方法 l8名健康受试者单剂量口服盐酸西替利嗪片10mg, 用200mI温开水送服.服药前1H晚上食用清淡食品, 并禁食10h.受试当日空腹服药,服药后2h可饮水, 4h统一进清淡饮食.于口服给药前(0h)和服药后 0.25,0.5,0.75,1,1.5,2,3,4,6,9,12,24h, 由肘正中静脉取血5mL,并立即移入经肝素处理的离心 试管中,离心(3000r?min-.)5min,分离血浆,于 一 20C冰箱中保存. 2.3血浆中西替利嗪浓度测定 2.3.1色谱条件色谱柱:DiamonsilX)DSc18柱(200mmX 4.6rrgn,5舯);柱温:30?;流动相:乙腈一0.01rml?L-磷 酸二氢钾(25:75);流速:1.0mI?min-;检测波长: 229niTl. 2.3.2血浆样品处理取血浆500I,加入内标溶液 100I(5.0g?mI_.),甲醇100L,涡旋混合1min, 加入甲醇900L,涡旋混合5min,离心(10000r? min)10min,取上清液氮气流下吹干.残渣加入乙酸乙 酯3mL,1O磷酸溶液300L,涡旋混合5min,离心 (10000r?min_1)10min,取下层溶液100L,进样 2OuL. 2.4房室模型的判别一 采用AIC(Akaike'sinformationcriterion)法.公式为 AIC=N1r1RP+2P;Re=?Wi(C—Ci);P一2n 式中,N为实验数据的个数;Re为残差平方和;P是 所设模型参数的个数;为隔室数;Wi为权重系数;Ci为 第i次取样时血药浓度的实测值;Ci为第i次取样时血药浓 度的理论计算值.AIC值愈小,则认为该模型拟合愈好. 2.5数据处理及统计分析 受试者的血药浓度一时间数据用DAS2.0处理,计算 AIC值及其他药动学参数. 2.6结果 2.6.1专属性空白血浆色谱图,空白血浆加对照品色谱 图,受试者给药后血浆样品色谱图(见图1).结果表明, 空白血浆中的内源性物质不干扰西替利嗪和内标羟嗪的测 定. 中南药学2009年4月第7卷第4期CentralSouthPharmacy.April2009,Vol?7No?4 B 2l10 (广—丁——1]—百—?1tlmin—了—————— j 16i 15 主 14 C t/min 图1西替利喋商效液相色谱图 FiglChromatogramofcetirizineintheplasma A.空白血浆色谱图(chromatogramofblankplasmasample);B.空白血浆加对照品及内标色谱图(chromatogramofblankplasmawithcetl rizinereferencestandards.lutionandinternalstandard);C.受试者服药1.5h后血浆样品色谱图(chromatogramofplasmasampleafterthe drugadministration1.5h);1.内标羟嗪(internalstandardhydroxyzine);2.西替利嗪(ceurizine) 2.6.2标准曲线与定量下限取西替利嗪对照品溶液.用度进行6样本分析.另取空白血浆按"2.3.2"项下操作? 空白血浆稀释成浓度分别为2O.0,50.0,100,250,500,向所得的下层溶液中加入西替利嗪标准溶液适量,配制成相 l000ng?mI'的标准血浆样品,按"2.3.2"项下操作并应浓度进样分析.以提取后的色谱图峰面积与未经提取直接 测定.以待测物浓度为横坐标.待测物与内标物的峰面积比进样获得的色谱图峰面积之比.考察样品的提取回收率;内 值为纵坐标.用加权(W--1/x.)最:j~---乘法进行回归运标经同样方法进行处理.计算 提取回收率(见表2). 算.求得直线回归方程为y—1.91×10一.X一4.O0×10.表2方法的提取回收率 ,一O.9981.西替利嗪在2O.O,1000ng?mI线性关系良Tab2ExoftJ1e 好.最低定量限为2O.0ng?nd. 2.6.3精密度与准确度取空白血浆及对照品溶液.按 "2.3.2"项下的方法配制低,中,高3个浓度的质量控制 (QC)样品,每个浓度进行6样本分析.根据标准曲线.计 算QC样品的测得浓度,结果见表1. 表1方法的精密度与准确度(n=6) Tab1PImandaccuracyoflhemethod(n=6) 2.6.4提取回收率取空白血浆及对照品溶液,按 "2.3.2"项下制备低,中,高3个浓度的QC样品,每个浓 2.6.5样品稳定性本试验考察了西替利嗪血浆样品 一 2O?放置20d的稳定性,血浆样品经历2次冷冻一解冻循 环的稳定性以及西替利嗪血浆样品经沉淀蛋白,提取处理后 室温放置12h的稳定性,RSD均??15.表明西替利嗪 血浆样品在上述条件下稳定. 2.6.6房室模型的判别取W,一1,1,C.1/Ce进行AIC 计算,结果见表3. 表3盐酸西替利嗪AIC判别结果 lhb3AICtestof删试m崎山?hl出 AIC AE RE R2 112.587 ll429.579 1.373 0.824 1l0.608 9562.218 1.024 0.845 53.935 14450.165 0.662 O.999 58.509 27212.15 1.O2 0.998 0.0b0 28536.21 0.439 其中,1,1/C,1/为权重系数. 受试制剂的AICm一一5.565.最佳房室模型为:一级 吸收的二室房室模型,W.一1/. 2.6.7血浆样品测定结果l8名受试者Ll服lOmg盐酸西 替利嗪后的平均血药浓度一时间曲线见图2. 2.6.8药动学研究最佳房室模型为一级吸收的二室房室 模型,主要药动学参数见表4. i《萋 ^b_0 47O1一 ,一 CentralSouthPharmacy.April2009,Vo1.7No.4中南药学2009年4月第7卷第4期 06l21824 图218名受试者口服10mg盐酸西替利嗪后的平均血药浓度时间 曲线 Fig2Meanconcentractiontimecurveofcetirizinehydrochlorideaf— terasingleoraldoseofl0mginthe18subjects 表418名受试者口服10lag盐酸西替利嗪后药物动力学参数 4H翻1Il帕】IdI咄pa阿lers0f刚DdIaasingle dine0f10mgintk18subjeas 药物动力学参数一 (phamaceuticatparameters)土 AUCo36/ng?h?mL一 AUC0一../ng?h?mL, tma/h C/ng?mI一 d/h 口/h ,1B/h Ka/h一1 Vd/F/I C1/F/L?h一 MRT36/h MRTn一../h 1598?395 1786?427 0.88?0.34 268?67.8 2.73?7.66 0.0764-_0.049 22.3?26.3 13.7?12.6 42.04-28.6 6.46?2.63 6.96--+-1.54 9.85士2.O0 3讨论 本试验采用HPIC法测定人血浆中西替利嗪的浓度, 血浆样品经沉淀蛋白,提取后,血浆中内源性物质不干扰待 测物的测定.样品预处理经沉淀蛋白后再提取,较文献一中 高氯酸沉淀蛋白干净,对仪器的污染较小.盐酸西替利嗪显 弱碱性,血浆样品预处理采用乙酸乙酯正提和稀磷酸反提两 步操作,提取回收率达到75以上.邹敏等一采用替米沙 坦作为内标,本实验采用西替利嗪的还原产物一羟嗪作为内 标,它与西替利嗪结构相近,两者在整个色谱分析中的行为 具有可比性,且在本色谱条件下有较好的分离度,使分析方 法更精确,重现性更好.本方法具有快速,准确,灵敏度高 的特点,适合盐酸西替利嗪制剂的药动学研究. 本文较为全面地考察了盐酸西替利嗪的药动学,判别其 房室模型,给出并分析了多个药动学参数,为临床用药提供 更多参考. 通过研究发现,分布相0t(2.73?7.66)h_1远大于消 除相p(0.076?0.049)h,,符合二室房室模型的特点. 一 级吸收速度常数Ka为(13.7?12.6)h一,达峰时间 为(o.88?0.34)h,表明受试者口服盐酸西替利嗪后,吸 收迅速,起效快.盐酸西替利嗪体内消除半衰期t.为 (22.3?26.3)h,疗效持续时间长.马明等所研究论文表 明该药与食物同服可使其达峰时间轻度延长,峰浓度降低约 3O.表观分布容积V/F为(42.0?28.6)L,与国内文 献报道的盐酸西替利嗪的/F(39.1?8.8)9]相似,但 较国外文献报道的左旋西替利嗪的Vd/F(0.41?0.10)I? kg-.值大,说明其在体内分布较左旋西替利嗪分布广泛. 参考文献,/,,,,,—, [1]徐亚杰,林建阳.HPLC测定人血浆中的盐酸西替利嗪I-J]. 华西药学杂志,2007,22(4):446—447. 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