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医学论文-固金方抑制裸鼠移植瘤生长及肿瘤血管生成的实验研究

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医学论文-固金方抑制裸鼠移植瘤生长及肿瘤血管生成的实验研究医学论文-固金方抑制裸鼠移植瘤生长及肿瘤血管生成的实验研究 固金方抑制裸鼠移植瘤生长及肿瘤血管生成的实验研究 【关键词】 固金方 Lewis肺癌细胞 微血管密度 血管内皮生长因子 恶性肿瘤的生长和转移有赖于瘤体内血管的形成,抗肿瘤血管生成治疗日益成为人们研究的重点。固金方是我们临 床上多年来治疗呼吸道肿瘤的有效方剂,配合化疗具有增强免疫力,减毒增效的作用[1]。我们在前期工作的基础上,对其作用机理进行探讨,本实验重点观测固金方对Lewis肺癌细胞生长及其血管生成的影响。 1 材料 1.1 动物昆明种雌性裸小鼠,...

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医学论文-固金方抑制裸鼠移植瘤生长及肿瘤血管生成的实验研究 固金方抑制裸鼠移植瘤生长及肿瘤血管生成的实验研究 【关键词】 固金方 Lewis肺癌细胞 微血管密度 血管内皮生长因子 恶性肿瘤的生长和转移有赖于瘤体内血管的形成,抗肿瘤血管生成治疗日益成为人们研究的重点。固金方是我们临 床上多年来治疗呼吸道肿瘤的有效方剂,配合化疗具有增强免疫力,减毒增效的作用[1]。我们在前期工作的基础上,对其作用机理进行探讨,本实验重点观测固金方对Lewis肺癌细胞生长及其血管生成的影响。 1 材料 1.1 动物昆明种雌性裸小鼠,体重18~22g,由河北医科大学实验动物中心提供。 1.2 用药固金方,购自河北省中医院,并经医大中 药系鉴定。环磷酰胺0.2 g/支,上海华联公司产品,批号:01014。 1.3 瘤细胞株Lewis肺癌细胞株购自中国科学院上海细胞生物研究所。 1.4 试剂及仪器CD34单抗及免疫试剂盒,购自北京中山生物技术公司;德国Leica切片机;CS-B型摊片烤片机;ACS-EAS电子天平(上海天平仪器厂生产)。 2 方法 2.1 移植瘤动物模型制备瘤种细胞株从冻存的液 氮内取出,复苏后分别接种于小鼠左后肢皮下,接种后7~10 d,选择肿瘤生长旺盛且无破 溃的动物,颈椎脱臼致死,固定于板上,消毒操作部位皮肤后切开,用无菌玻璃匀浆器研磨, 磨匀后放入无菌容器内,加生理盐水适量稀释成1?3~1?4的瘤细胞混悬液,每只鼠种0.2 ml接种于右前肢腋窝下,整个接种时间在30 min内完成。 2.2 动物分组及给药接种后随机分成4组,每组10只。?模型组:每只灌胃0.2 ml生理盐水,1次/d;?对照组:环磷酰胺按20 mg/kg腹腔注射,1次/d;?固金方组:按12.5 g/kg(稀释为每毫升含药1.25 g,相当于成人剂量10倍)灌胃,1次/d;?固金方加环磷酰胺组(简称"联合组"):每日分别灌胃固金方(剂量同固金方组)及腹腔注射环磷酰胺(剂量同对照组)。灌胃开始于接种后 第2天,各组用药时间均为6周。 2.3 观察项目及检查方法接种给药6周后处死动物。观察下列项目: 2.3.1 瘤体积、瘤重用游标卡尺测量瘤体长径和短径,计算瘤体积,瘤 体积=?ab2/d(a长径,b短径)绘制增殖曲线。肿瘤抑制率=(模型组平均瘤重-给药组平均瘤重)/模型组平均瘤重×100%。 2.3.2 MVD检测实验终末小鼠死亡时将肿瘤组织 剥离,甲醛固定,石蜡埋切片, SP法进行CD34免疫组化染色。结果判定:任何胞浆内染成 棕色的内皮细胞或内皮细胞团,均按独立的微血管计数。计数时先于低倍镜下选择癌灶浸润 最明显处,然后在200倍镜下计数5个视野内微血管数目,取其平均值做为MVD。 2.3.3 肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)mRNA半定量分析采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术。?组织总RNA摄取;?RNA鉴定和定量;?CDNA合成、PCR扩增。VEGF引物序列为:上游5′-TGTGCTGGCCTTGGTGAGGT-3′,下游 5′-TGTGCTGGCCTTGGTGAGGT-3′;β-actin引物序列为:上游 5′-TTCCAGCCTTCCTTCCTGG-3′,下游 5′-TTGCGCTCAGGAAGGAGCAAT-3′。取PCR产物电泳,对电泳条带进行吸度峰值下 面积积分,将VEGF(β-actin×100)作为VEGF mRNA 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达水平的相对参数。 2.4 统计学分析 应用SPSS 11.0统计分析软件进行统计学分析。 3 结果 3.1 不同治疗对肿瘤的抑制作用在实验过程中发现,联合组、固金方组、对照组接种后移植瘤出现较模 型组晚约1周,且固金方组有一动物直到接种后25 d,即中药治疗24 d才出现肉眼可见的肿瘤生长,联合组则有一动物直到实验结束尚未见肿瘤生长,而模型组无此现象。为了排除 接种失败,我们所有的实验结果均剔除此2例。按固金方组、联合组分别为9个动物,进行统计分析。从表1可以看出:对照组、固金方组、联合组的移植瘤体积、瘤重均明显小于模 型组。固金方组抑瘤率虽略低于对照组,但经统计学分析无显著性差异(P>0.05)。联合组抑瘤率明显提高(P<0.05),这些结果表明固金方有与环磷酰胺相似的抑瘤效果,两者联合 抑瘤效果明显提高。表1 不同治疗对肿瘤的抑制作用(略) 3.2 各组小鼠肿瘤组织MVD表达比较各组荷瘤鼠肿瘤组织中均检测到MVD的表达,其表达水平分别为:模型组 (31.96±4.24);对照组(15.11±3.55);固金方组(14.98±3.01);联合组(7.13±1.65)。与模型组相比,对照组、固金方组、联合组肿瘤组织MVD表达均明显下降(P<0.05);与对照组比较,固金方组MVD表达;差异无显著性(P>0.05);与对照组、固金方组比较,联合组MVD表达下降更多(P<0.05)。 3.3 各组小鼠肿瘤组织中VEGF mRNA表达量的测定提取的总RNA经2%琼脂糖凝胶电泳后(每一样品均出现清晰的28S和18S带条)。各组肿瘤组织β-actin mRNAPCR产物电泳各带明暗、宽窄均匀一致,而 各组肿瘤组织的VEGF mRNAPCR产物电泳则显色不均一。与模型组比,对照组、固金方组、联 合组肿瘤组织VEGFmRNA表达量均明显下降(P<0.05);与对照组比较,固金方组VEGFmRNA表达量虽有下降的趋势,但未明显差异(P>0.05);与对照组、固金方组比较,联合组VEGFmRNA表达量表达下降更多(P<0.05)。各组小鼠肿瘤组织VEGFmRNA的表达见表2。表2 RT-PCR-方法各组小鼠肿瘤组织VEGFmRNA的表达比较(略) 4 讨论 转移是恶性肿瘤的基本生物学 行为,也是临床肿瘤治疗失败的主要原因,目前认为,在肿瘤侵袭转移过程中,最关键的是 肿瘤微血管和淋巴管的生成,相关研究正成为肿瘤研究的一个热点。血管内皮生长因子(VEGF)是促进肿瘤微血管生成的重要因子,同时也是一种血管通透性诱导因子,可增加微血管特别 是毛细血管后静脉和小静脉的通透性,是已知最强的血管通透剂,其与肿瘤新生血管的形成 和血行转移的关系已得到了广泛证实,是肿瘤微血管生成和侵袭转移的关键因素。近期国内 外文献报道[2],多种细胞毒化疗药物在体内外实验中显示出抗血管生成活性,这些药物如 环磷酰胺,紫杉醇、长春花碱等,KlementG等[3]的近期实验显示活性增殖的内皮细胞较 增殖肿瘤细胞对化疗药物更敏感,将这样低浓度的化疗药物长期持续使用,避免了常规化疗 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 中内皮细胞在化疗间歇期的恢复,增加了其抗血管生成效果,起到了抑制肿瘤细胞的作 用。因此,国外将这种连续的规律的低剂量化疗称为抗血管生成化疗。本实验应用连续环磷 酰胺治疗荷瘤小鼠,检测到MVD,VEGF表达水平较模型组下降,证实了环磷酰胺持续的给药 计划的抗血管生成作用。多位学者[4~6]研究证实,部分中药提取的有效成分可以抑制肿 瘤血管生成,如中药薏苡仁提取脂溶性抗癌化合物-康莱特注射液,人参提取物-人参皂苷Rg3,其抗肿瘤的作用机制之一即与抑制肿瘤血管生成有关。固金方是中药复方,其成分复杂,从 我们的研究可以看到,与模型组相比,瘤体积、瘤重量均受到抑制,瘤组织内在MVD,VEGF表达下降;与化疗药合用时其抑制作用更加明显,提示其抑瘤的作用机理可能与下调MVD,VEGF的表达有关。【参考文献】 [1]胡冬菊,杨 倩,刘经选.加味百合固金方对局部 晚期肺癌化疗减毒增效作用临床观察[J].新中医,2007,13(1):327. [2]Gately S,kerbel R,Antiangiogenic sheduling of close cancer chemotherapy Cancer 2001,7(9):427. [3]Klement G,Huang P,MayerB,etal.Differences in therapeutic indexes of combination nutronomic chemotherapy and an anti-VEGFR-2 antibody in multidrug-resistant human breast cancer xenografts[J]. Clin Cancer Res 2002;8(1):221. [4]张 良.康莱特注射液对血管生成的影响[J].临床肿瘤杂志,2000,20(4):313. [5]潘小民,叶大凤,谢 幸,等.人参皂苷Rg3对药卵巢癌的严重联合免疫缺陷鼠的抗肿瘤血管生成作用的 研究[J].中华妇产科杂志,2002,37(4):227. [6]高 勇,王生军,许 青,等.人参皂甙Rg3抑制肿瘤新生血管生成形成机制研究[J].肿瘤防治研究,2001,28(3):179.
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