酶工程论文

酶工程 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 生物的大部分化反应都是在应的催化下应行的。要应应应的存在及其含量体内学, 不能像应应化应品那应直接用重量或应应表示学体来, 而只能用催化某一特定反应的它能力应的活力表示。因此即来, 应定应活力是究应的特性以及好应制应生应利用研搞与 的一应必不可少的工作, 是衡量应制应应量的一应重要指应。但是, 应制应作应一应生物催 化应, 的活性的应应受多应因素影它响, 如底物应度、应解度、温p H 应、应解应应、激活物、 抑制应等。因而应活力的示应是一定件下的相应量条数, 应量之前必应先定衡量量确数的应位。应一应应～在特定件下;度可采用条温25?～pH等件均采用最适件,条条～每1min催化1μmol的底物应化应应物的应量定应应1应活力应位～应应位应应应应位个个称国 ;IU,。 蛋白应是应用最泛的一应应～了解其活性尤应重要～其活力是应的主要性能指应广 之一。应活力由应应应量应果推应得到它条个表示在应定的件下应催化一反应的能力。也, 就是在应位应应由于反应而使底物消失或者应物生成的量。蛋白应的活力是应制应生应内 厂与家控制批批之应应量应定性的主要方法也是在应用应制应应所必应要考应的主要性, 能指应之一。 而各应应都有相应的活力应定方法用溶解的酪素作应底物是最常应的蛋白应活力的应定, 方法其应点是应定应果的可重应性高应方法的应定应果主要用衡量应制应应品的应量的应来,, 定性。应于同一应应制应以酪素应底物的应活力的大小能反映其应同应底物作用的强弱,;但应于不同应应的应制应应底物酪素的作用性能不能完全反映应制应应其他底物的作并, 用性能因应应制应应底物的作用具有应一性。,, 应活力应定的基本步应, 应活力的应定方法有多应多应～应其要求是快速～应便～准确应活力应定一般包括应段。首先在一定件下～应底物反应一段应应～然后再应定两个条与 反应液中底物或者应物的应化量。一般应应如下步应。几个 ;,根据应催化的应一性～应应适宜的底物～配置一定应度的底物溶液。所使用并1 的底物必应均一致～到应催化反应所要求的应度。在应定应活力的应候～所使用的匀达 底物溶液一般要求新应配制～有些反应的底物溶液也可应先配置后置于箱中保存冰应用。 ;,根据应的应力性应～定应催化反应的度～学确温、底物应度、激活应应度等反应2pH 条温温件。度可以应应室;?,、;体温?,、应反应最适度或其应用的度温它温～2537 应是应催化反应的最适～底物应度应应大于等。反应件一旦定～在整条确pHpH5Km 个尽温反应应程中应量保持恒定不应。故此～反应应在恒槽中应行～保持的恒定是pH通应采用一定应度的应激活应等～应适量添加。 ;,在一定得件下～一定的应液和底物溶液混合均～适应应下反应应始的应应。条将匀3 ;,反应到一定得应应～取出适量的反应液～用各应生化应应技应～应定应物的生成量运4 或底物的少量。应了准地反应应催化反应的应果～应量采用快速、应便的方法～立减确尽 即应出应果。若不能及应应应出应果的～应要及应应止反应～然后再应定。应止应反应的方法多。常用的有,很 ?反应应应一到～立取出适量反应液～置于沸水浴中～加应使应失活～即 ?加入适宜的应失活应性应～如三应乙酸等～使应应性失活～ ?加入酸和溶液～使反应液的碱迅速应催化反应的最适离～而使从pHpH反应应止～ ?取出的反应液立置于低箱、粒堆或应溶液中～使反应液的将即温冰冰冰温 度迅速降低至?以下而应止反应。在应应反应应程中～要根据应的特性、反应底物和应10 物的性应以及应活力应定的方法等加以应应。 首先是蛋白应的提取 首先应使应溶于提取溶应之中, 利用应溶液应行活力应定。应量少应活力的应失尽减, 蛋白应的提取宜在低下应行温, 一般应0一5? , 且在整提取应程中不应行应度应拌个, 以免应生大量泡沫, 使应应性。同应, 应使应可能地溶解于提取溶应之中尽, 但又要防止应应应应应致一些重金子、应蛋白中的一属离s H 被化而使应活力应失氧, 提取应应应应12 小应。精确称取1.0 克左右应制应, 用提取溶应溶解定容至50 毫升, 于4 ? 箱中浸取冰12 小应。浸取液应应应, 取应液应其应活力。应定应应应液用提取溶应应行适稀应。将当 其次的各应蛋白应应活力应定原理和方法应应 一, 福林法;,因应上期做应相应应应～所以应程叫其他方法应应学 蛋白应在一定的度下和温条件下水解酪素底物应生含有基的基酸酚氨如pH ,(酪酸、色酸等氨氨在性件下碱条将福林应应应原生成应应和应应用分光光度应) ,,( Folin) ,,应定应算其应活力。福林法反应件如下。条, 温度和蛋白应的反应度应温?其他应应?国应。:1398 166 30 ,40 () 应由应的应应定。反应应应决pH ::10min 固应粉体或液应体在一定度和温应件下条水解酪素应生μ酪氨1g (1ml ) ,pH ,1min 1g 酸应一应活力应位个以μμ表示。,/ g (/ ml) 、福林应应的制应,1 于磨口回流置中加入二水应酸应装、二水应酸应、水2000ml100g25g 、,磷酸、应应酸～小火沸应回流～取下回流冷却器～700ml8650ml100ml10h 在通应中加入橱硫酸应、水和数滴应应水,～再微沸、以除去50g50ml9915min多余的应;冷后仍有应色需要再加应水～再煮沸除去应量的应,～冷却～加水定容至 ～混～应应～制得的应应应匀黄瓶呈金色～应存于棕色中。1000ml 使用液,一福林应应二水混合～应。份与份匀 、酸应溶液碳2c=0.4mol/L 称碳取无水酸应用水溶解定容至并42.4g,1000ml、三应乙酸3c=0.4mol/L 称取三应乙酸～用水溶解定容至并65.4g1000ml、应化应溶液氧4c=0.5mol/L 称取应化应～用水溶解定容至氧并20.0g1000ml、应酸溶液及5c=1mol/L0.1mol/L 应溶液冲6 磷冲酸应液;适用于中性蛋白应a pH=7.5): 称取水酸应二应磷～加水溶解定容至并。120.5g1000ml硼酸应液;冲适用于性蛋白应碱bpH=10.5): 甲液,取称硼砂～加水溶解定容至并19.08g1000ml.乙液,取应化应称氧加水定容至并4.0g,1000ml.使用液,取甲液乙液混～用水稀应至匀500ml.400ml,1000ml.上述各应应液均冲需应校正。pH 酪素溶液7.10g/L 称取酪素～精至确～用少量应化应溶液应后～加氧湿1.000g0.001g0.5mol/L入适量的各应适宜应液应冲～在沸水浴中应加应应应拌～至完全溶解～冷却pH80ml 后～应入容量中～用适宜的应液定容至瓶冲冰刻度应～溶液在箱里保存～100ml 有效期应三天。 酪酸应准液氨8.L- 称取应先于应氏度干燥恒重的酪酸氨～精至确用a105L-0.1000g0.0002g 应酸溶解定容至～应酪酸应准溶液即氨1mol/L60ml100ml 吸取酪酸应准溶液氨。用应酸定容至即得b1mg/ml10.00ml0.1mol/L100ml. 酪酸应准溶液。氨100 µg/mlL- 应定, 先酪素溶液将放入恒水浴中～应应温A30?0.2??5min.按下列操作,B 应管空白, 应管;应式应～操作三个平行式应,A(B ? ? 加应液 加应液 1.00ml 1.00ml ?～30?0.2 ??2min ?30?0.2,2min?? 加三应乙酸 应, 加酪素 匀;应,匀2.00ml(1.00ml ? ? 加酪素;应, 加三应乙酸 匀应,匀1.00ml2.00ml( ? ? 取出止静应应 取出止静应应10min ,10min , ? ? 取应液 取应液1.00ml1.00ml ? ? 加酸应溶液碳加酸应溶液碳5.0ml 5.0ml ? ? 加福林应应使用液加福林应应使用液1.00ml 1.00ml ?应色应色30?0.2,??20min ?30?0.2,??20min 于波应～用比色皿～应管应空白应其吸光度680nm10nmA 、应算1 ,,X=A×K×410×n=25×A×K×n 式中,应品的应活力,,X----,µg,µml); 应品平行应应的平均吸光度～A----- 吸光常～数K----- 反应应应的应应～体4------ml; 反应应应10----10min. 稀应倍数～N----- 所得的应果表示至整。数 、应果允应应差2 平行应应相应应差不得超应,。3 二　法应应信公司提供Lohlein - Volard (LVU) () 碱条性酪素溶液在应准件下应行应降解反应加应酸使反应应止当酪素被蛋白水解应分解,,之后用硫酸应沉氧淀未降解的酪素。应液用应化应溶液滴定应液中的酸包括加入应止,,反应的应酸和酪素降解应生的酸。酪素降解越多应液中的酸就越多沉淀就越少滴定,,,用应化应溶液的量氧氧增多。滴定所耗应化应的量直接反映蛋白应活力大小。通应耗用 的量可应得应制应的活度。碱即法反应应准件如下条LVU : 温度?　　应:37 pH : 8. 2 反应应应:60min 定应应在上述应准件下条?下应酪素反应与降解酪1LVU (37 ,pH 8. 2) ,60min 1.725mg 素所需应的量。 三 　胰数应应化倍法 胰应能促应酪蛋白的水解作用胰应量越多水解的酪蛋白越多。因此用定量的酪蛋白,,和不同量的应作用胰水解一定应应后用醋酸应或醋酸指示应应应反应溶液的应到酪,,() pH 蛋白的等应点附近未被水解的酪蛋白呈白色沉淀析出而水解应物应不会沉淀应定,,,恰好使定量的酪蛋白完全水解的应量应定活度的据。根据此应应的应和应度胰确胰体,可应算出应应酪蛋白的应化能力胰以倍数应。控制应水解反应最适的件应胰条,() pH89 ,温度应??40 1 另外附加一部分福林法和法的比应LVU 由于影应活力应定应果的因素多响很包括应粉的均性、应的溶解性、应液的匀放置应, 应、反应应应和取量操作应差等通常同一应应的活力应定应果应差在,根据表,,5 %10 % ,1的应定应果因此可应应在相同的反应和度下温应准件条?应于3 ,pH (LVU pH 8. 2 ,37 ) ,制革常用蛋白应福林法和两两应应活应定方法的应果一致。比应应方法的操作应程,LVU ,福林法的反应应应应短但步应应多且应应由于液的取用量应小体反应应应短容易造(10min) ,,,,成平行应应应的应差。法反应应应应反应应应控制应的应定应来差应小在其应应滴定LVU (60min) ,,操作中由于在自应滴定应上应行减来少了人应操作应的应差平行应应应应果相差小可信,,,,度高法底物酪素的应度大福林法底物酪素溶液应度低。因此;LVU (50g/ l) ,(10g/ l) ,两应方法均可作应制革常用蛋白应活力的应应比应应方法的应两缺点福林法快速更适,,,合大量应活力应定。 四 　应应 蛋白应活力是蛋白应的主要性能指应之一用溶解的酪素作应底物应定蛋白应活力具有, 原料易得应定应果的可重应性高的应点是最常应的蛋白应活力的应定方法。但应于不同应,, 应的应制应应底物酪素的作用性能不能完全反映应制应应其他底物的作用性能。应于并, 蛋白应活力的应定以不同的着色蛋白应作应底物应定的应活力可表征蛋白应应皮内不同,, 蛋白应成分。因应底物的来源和制应比应困应因此应于蛋白应活力的应应仍以酪素应主。,