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寄生虫病学粪便检查
一、概述
粪便检查是蠕虫病生前诊断的重要方法之一。因为绝大多数的寄生性蠕虫都是寄生在消化道内的，所以它们产生的卵、幼虫或节片也都是随着宿主的粪便排出体外的。 二、实验目的
,、学会用涂片法、沉淀法和漂浮法来检查粪便中的蠕虫卵和球虫卵囊等。
,、在显微镜下辨别虫卵和卵囊，并且能与粪便中的非寄生性物质相区别。 三、实验方法及器材
方法:1、在显微镜下辨别虫卵和非寄生性物质 2、直接涂片法 3、饱和盐水漂浮法
4、水洗沉淀法 5、离心沉淀法 6、尼龙筛淘洗法 器材:双目显微镜 带虫卵的羊粪 带虫卵的牛粪 玻片 盖玻片
四、操作过程
1、在显微镜下辨别虫卵和非寄生性物质
用工具挑取一粒绿豆或者黄豆大小的粪便置于玻片上涂匀盖上盖玻片直接低倍镜辨别虫卵和非寄生性物质
2、直接涂片法:
滴水(在载玻片上滴上,,,滴甘油水或清水)--取样(用工具挑取一粒绿豆或者黄豆大小的粪便)--与水混合--搅拌均匀--将粗的粪渣拨去--摊匀(厚薄程度以能透视下面的字体为宜)--镜检(三片以上)
优点:该方法操作简便、快速且不需要很多仪器设备，对各种虫卵都有检出的可能。
缺点:捡出率很低。
甘油水:甘油:水,,:,
3、饱和盐水漂浮法
(,)、原理:应用比重较虫卵大的溶液作为漂浮液，使虫卵或卵囊等漂浮于液体表面，以便于我们收集。
(,)、优缺点: 优点:操作简便，特别是对大多数的线虫卵及球虫卵囊等比重较轻的虫卵，本办法具有特别的效果，检出率很高。因此，在兽医预防和诊断的工作中应用十分广泛。
缺点:对比重较大的虫卵(如吸虫卵、棘头虫卵)检出的效果很差。
,、取粪样(,,,,g)置于容器内--加少量的饱和盐水--搅拌成糊状--再加盐水(约,,,,,倍)搅拌均匀--过滤--静置(,,,,,分钟)用铁丝圈沾取粪液上浮膜--镜检。
4、水洗沉淀法
1)原理:寄生虫虫卵的比重比水重，可自然沉于水底。因此可利用自然沉淀的方法，将虫卵集中于水底便于检查。沉淀法多用于比重较大的虫卵如吸虫卵和棘头虫卵的检查。
2) 优缺点:
优点:多适用于检查吸虫卵、棘头虫卵和绦虫节片，特别是在同一种粪样收集量较多的时候，多采用该方法，该方法操作简便。
缺点:对比重较小的虫卵检出率则非常低，如线虫、球虫卵囊等。
取样(10,50g),置于容器内,先加少量的清水,搅拌成糊状,再加水(20,30倍),搅拌均匀,过滤(40,60目),将制备好的粪液置于容器内,加满水,静置(20,30分钟),倒去上清液(约2?3),再加水,搅拌,静置(随着粪液逐渐变稀，静置的时间可以相对缩短，但不能少于5分钟上),反复操作至液体透明为此,倒去上清液，留下少量的水,吸取沉淀物镜检(所取的沉渣不能太浓，否则在镜检时视野模糊)。
5、离心沉淀法
取样(3g),加清水(10,15ml),搅拌,过滤(40,60目),称量,离心(1500,2500转?分，时间为1,2分钟),吸去上清液,再加水,搅拌,称量,再离心(一般离心两次),吸去上清液,吸取沉淀物镜检。
6、尼龙筛淘洗法
优缺点:该方法操作迅速、简便，特别是对比重较大的虫卵检出率很高，但对比重较小的虫卵检出率几乎为零。
操作方法
取样(5,50g),加清水(10倍),搅拌,过滤(经两层过滤，一层为40,60目金属筛，另一层为260目尼龙筛),将第一层留下的粗粪渣倒去,将尼龙筛中混浊的粪液用清水淘洗(直至液体透明为此),滤干尼龙筛中的水,收集沉渣(用少量的水沿网壁淋洗),置于烧杯中,静置,倒去上清液,吸取沉淀物镜检。
五、作业
1、描绘镜检时所见到的虫卵;
2、比较实验中所用粪检方法的优缺点。
1 材料与方法
1.1 实验材料
六安市附近某养鸡场提供一只典型球虫病鸡。
1.2 试剂和仪器
2.5%重铬酸钾溶液、饱和食盐水溶液、生理盐水、吸管、40目铜丝筛、260目尼龙筛、研钵、平皿、双目生物显微镜(型号:XS-200,江南光电集团)、低速离心机(型号:800，江苏天由有限公司)、电热恒温培养箱等。
1.3 卵囊的分离与培养
取病鸡盲肠，刮取其内容物和黏膜，研碎后加生理盐水搅匀，经40目铜丝筛和260目尼龙筛过滤，滤液2000r/min，离心10min，收集沉淀。沉淀置2.5%重铬酸钾溶液中，在29?恒温培养箱内培养成熟，然后将成熟的卵囊液置4?冰箱中保存备用。
1.4 球虫卵囊的接种
1.4.1 显微镜镜检球虫卵囊数
取冰箱中在4?保存的孢子化卵囊悬液，2000r/min，10min，弃上清，同上速度和时间离心3~4次，洗去重铬酸钾;加饱和食盐水漂浮，吸取上层漂浮液于另一离心管中，加人大量生理盐水离心沉淀，弃上清，再加生理盐水离心(速度和时间同上)，然后将最终沉淀(卵囊悬液)做倍比稀释。
用牙签沾取稀释后的卵囊液，点在载玻片上，显微镜下观察，利用血球记数板记数，观察卵囊中子孢子的成熟程度，卵囊中有4个子孢子形成，说明此球虫已经具有感染性。
1.5 虫种鉴定
观察1.4.1中获得卵囊形状、颜色、大小等特征，记录最短孢子化时间，并分别随机测量50个孢子化卵囊，孢子囊大小，并将测量数据进行差异显著性检验(F检验)。参阅有关文献进行虫种鉴定[3-8]。
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