毛细管电泳-安培检测法测定中药四季青中的6种活性成分

毛细管电泳-安培检测法测定中药四季青中的6种活性成分 毛细管电泳-安培检测法测定中药四季青中 的6种活性成分 第39卷第3期 2010年3月 辽宁化工 LiaoningChemicalIndustry Vo1.39,No.3 March,2010 毛细管电泳一安培检测法 测定中药四季青中的6种活性成分 唐祝兴,张东瑾,王巧玲 (1.沈阳理工大学环境与化学工程学院,辽宁沈阳110159; 2.沈阳市化工学校医药系,辽宁沈阳110122;3.沈阳医学院,辽宁沈阳110034) 摘要:采用毛细管电泳一安培检测法(CE—AD),同时测定了中药四季青的主要活性成分异香 草酸,龙胆酸,山奈酚,槲皮素,咖啡酸和原儿茶酸.考察了工作电极电位,pH值,运行缓冲液的浓度,分 离电压和进样时间的影响.在最佳的试验条件下,50mmol/L硼砂缓冲溶液(pH=9.0)为运行缓冲溶 液.工作电极为直径300m的碳圆盘电极,检测电位为+0.95V(vs.SCE).被测物的线性范围超过3 个数量级.该方法成功的被应用于实际样品的分析,获得了令人满意的结果. 关键词:毛细管电泳;安培检测;四季青 中图分类号:0657.8文献标识码:A文章编号:1004—0935(2010)03—0332—04 在中国,传统中药被广泛的用于预防和治疗 各种疾病数千年.低毒性和良好的治疗效果使得 中药在许多领域受到广泛的关注….其中中药 四季青为冬青科植物,广泛地分布在中国南部地 H0 异香草酸龙胆酸 OH O OH HO HO OH 疗支气管炎,肺炎,溃疡,烫伤和冻疮等都有很好 的效果. 四季青的主要活性成分包括异香草酸,龙胆 酸,山奈酚,槲皮素,咖啡酸和原儿茶酸.图 1为这些化合物的分子结构示意图. H0 山柰酚 槲皮素咖啡酸原儿茶酸 图1异香草酸,龙胆酸,山奈酚,槲皮素,咖啡酸和原儿茶酸 一 些相关的研究 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明山奈酚,槲皮素和其他 一 些黄酮类化合物具有抗过敏,抗氧化和消炎作 用.现代研究也证实了一些酚酸类物质具抗癌 O OH OH 基金项目:沈阳理工大学博士启动资金. 收稿日期:2009.12-23 作者简介:唐祝兴(1974一),男,副教授. 第39卷第3期唐祝兴,等:毛细管电泳一安培检测法测定中药四季青中的6种活性 成分333 性.因此建立灵敏,简单,快速和准确的检测方法 对四季青的品质监督具有重要的意义. 由于中药组成特别复杂,且不同产地的中药 活性成分的差异较大,影响因素繁多,如气候,生 长区域和收获时间等,使得四季青的活性成分不 易测定.高效液相色谱法(HPLC)目前已经用于 测定四季青中酚酸类成分J.毛细管电泳技术 与安培检测法(AD)联用,对电化学活性物质具有 更高的灵敏度和选择性.本方法通过CE—AD 检测法建立了一种简单,快捷的同时测定中草药 四季青的主要活性成分异香草酸,龙胆酸,山奈 酚,槲皮素,咖啡酸和原儿茶酸的方法,取得了满 意的效果. 1实验部分 1.1仪器与工作条件 自组装毛细管电泳一电化学检测装置系 统【6—73:包括高压电源(0,30kV)(中国科学院 上海原子核研究所);75em长的熔融石英毛细管 (i.d.25Ixm,0.d.360m,PolymicroTechnolo— gies,PhoenixAZ,USA),三维定位调节器. 三电极系统即直径为300txm的碳圆盘工作 电极,饱和甘汞参比电极,Pt丝对电极.CHI 830B电化学系统(CHInstruments,Austin,Texas, USA)为安培检测器,与1台安装了WindowsXP 系统的电脑相连.使用前,碳圆盘电极表面依次 用金相砂纸,氧化铝粉末抛光,再用蒸馏水超声清 洗5min.使用时,将其安装在三维定位仪上,借 助放大镜,仔细调节好电极的位置,使毛细管与工 作电极在一条直线上,且与端口尽可能靠近,毛细 管口应对准工作电极圆心.毛细管在使用前要用 0.1mol/L的NaOH清洗. 1.2试剂 异香草酸和龙胆酸购自Sigma(St.Louis. Mo,USA).山奈酚,槲皮素,咖啡酸和原儿茶酸 购于中国药品检验所.中草药四季青购于一家药 店.配置异香草酸,龙胆酸,山奈酚,槲皮素,咖啡 酸和原儿茶酸储备溶液(分别为2.0×10g/ mL),保存于4?的冰箱中.实验时溶液用运行 缓冲液(50mmol/L硼砂缓冲液,pH=9.0)稀释 到所需浓度.使用前,所有的溶液通过0.22m 的聚丙烯膜过滤. 1.3样品处理 将中草药四季青磨成粉并精确称1.0000g, 每份称好的样品用20mL80%的乙醇(分析纯) 超声溶解30min.首先用滤纸过滤,然后用上述 浓度的乙醇溶液洗涤3遍.最后将滤液和洗涤液 合并,用乙醇(4+1)定容至50mL.在实际样品 分析中,0.5mL样品溶液用运行缓冲液(5O mmol/L硼砂缓冲液,pH=9.0)稀释至1mL. 所有的溶液通过0.22m的聚丙烯膜过滤后才 能直接进样进CE—CD检测,使用前保存于4c【= 的冰箱中. 2结果与讨论 2.1电泳条件的选择 2.1.1工作电位的选择 工作电位的选择直接影响到实验方法的灵敏 度,检测限和稳定性.通过流体伏安法选择合适 的检测电位.当工作电压高于+0.6V(VS. SCE)时,被分析物在工作电极上都会产生氧化 电流.当工作电压在+0.6V和+0.95V(VS. SCE)之间时,峰电流的增大加速.当工作电压超 过+0.95V(VS.SCE)时,基线噪音和本底电流 也明显提高,造成了基线不稳,对检测法的灵敏度 和稳定性都造成很大的影响.因此,选择最佳工 作电位为+0.95V(VS.SCE),此时本底电流不 高,信噪比达到最大值.同时,工作电极稳定性较 好,重现性较高. 2.1.2运行缓冲液pH值和浓度的选择 本实验选用硼酸盐缓冲体系作为运行缓冲 液,因为它可以与被分析物形成可溶性的配位阴 离子_8J.运行缓冲液的酸度直接影响毛细管表 面的zeta(')电势,从而影响电渗流(EOF)的方向 和速率,同时溶液的酸度也决定样品中各组分分 子的荷电情况,从而影响组分的迁移时间和分离 度,故对运行缓冲液的酸度进行优化是获得较好 分离条件的关键.研究了在pH8.0,9.2范围内 迁移时间与pH值的关系.当pH值增大时,被分 析物的迁移时间相应变长,当pH更高时,不但分 析时间变长而且容易产生氧化物.当pH低于 8.7时,异香草酸和龙胆酸不能被完全分离.因 此,选择pH9.0为硼酸盐缓冲液的优化酸度.除 了pH值,缓冲液的浓度也是一个重要的参量. 334辽宁化工2010年3月 缓冲液的浓度可以影响峰高及其分离情况.经过 条件实验,最终选择50mmol/L硼酸盐缓冲体系 (pH9.0). 2.1.3分离电压和进样时间的选择 对一定长度的毛细管,分离电压决定了电场 强度,可以影响电渗流和被分析物的迁移速率. 随着分离电压的增加,所有化合物的迁移时间都 变短.而当分离电压大于l8kV时,基线噪音增 大.纵上所述,选择分离电压为18kV,所有物质 在21min内完全分离.进样时间决定了进样量 的多少,影响峰电流和峰形.选择分离电压为l8 ,进样时间为2s到10S进行实验,研究进 kV时 样时间对峰电流的影响.随着进样时间的增加, 峰电流增大,当进样时间大于8S时,峰电流变化 缓慢,但是峰形明显展宽.在本实验中,选择进样 时间为8S(18kV). 综上所述,得到的最佳分析条件如下:工作电 位为+0.95V(VS.SCE),分离电压为18kV,进 样时间8S,运行缓冲液为50mmo]/L硼酸盐缓冲 溶液(pH9.0).在最佳实验条件下,6种被分析 物的电泳谱图如下(图2),从图中可以看出,所有 物质在21min内完全分离. 图22.0×10.g/mL的标准溶液图谱 峰:l一异香草酸;2一龙胆酸;3一山奈酚;4一槲皮素;5一 咖啡酸;6一原儿茶酸. 2.2线性范围,检出限及重复性实验 2.2.1线性范围 讨论了峰面积与分析物浓度的线形关系.通 过对一系列不同浓度的标准混合样品(浓度从 0.1#mL到200mE)进行分析测定,所得到的 线性方程如表1所示. 2.2.2检出限 检出限可以由3倍信噪比来决定.通过对一 系列不同浓度的所有物质(浓度从0.03g/mL到 0.20g/mL)进行分析测定,可知所得异香草酸, 龙胆酸,山奈酚,槲皮素,咖啡酸和原儿茶酸的检 出限,结果见表1. 表1线性方程和检测限 化合物线性 Y=a 方程 +bx/(')/(w 检出 g"m 限 L.1) Y为峰面积,为浓度(mg/mL). 2.2.3重现性 同一天内连续进样一定浓度(每组分20g/ mL)的被测物标准混合溶液7次,异香草酸的峰 面积和迁移时间的(RSD)分别为2.7%和 2.3%,龙胆酸为2.4%和1.9%,山奈酚为3.1% 和2.5%,槲皮素为2.2%和1.9%,咖啡酸为 3.1%和1.4%,原儿茶酸为2.9%和1.5%. 3样品的测定及回收率实验 在优化条件下,四季青的活性成分得以确定. 四季青的电泳图谱见图3. 图3四季青实际样品图 峰:1=异香草酸,2=龙胆酸,3=山奈酚,4=槲皮素.5: 咖啡酸,6=原儿茶酸. 通过加入异香草酸,龙胆酸,山奈酚,槲皮素, 咖啡酸和原儿茶酸的标准样品,相应的活性成分 异香草酸(峰1),龙胆酸(峰2),山奈酚(峰3), 槲皮素(峰4),咖啡酸(峰6)和原儿茶酸(峰6) 能被定性确定.每种成分的含量可以通过线性方 程来求得,结果分别为:0.76,1.54,1.22,1.41, 第39卷第3期唐祝兴,等:毛细管电泳一安培检测法测定中药四季青中的6种活性 成分335 0.74,5.87"g/g.在最佳实验条件下,又进行了 回收率的实验来验证方法的精密度和准确性,回 收率在95.5%,104.3%之间, 说明 关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书 方法精密度 好,灵敏度高. 参考文献 [1] [2] [3] L.N.Li,PureApp1.Chem.,1998,70:547—554. S.Miao,Z.M.Bi,P.Li,J.ChinaPharm.Univ.,2003,35 127—13O. J.B.Xie,P.Li,J.ChinaPharm.Univ.,2002,33:76—77 [4] [5] [6] [7] [8] IJ.P.Liao,P.Li,J.ChinaPhann.Univ.,2004,35:205— 206. Y.H.Cao,C.G.Lou,Y.Z.Fang,J.N.Ye,J.Chroma- togr.A,2001,943:153—157. Y.Z.Fang,X.M.Fang,J.N.Ye,Chem.J.Chin.Univ., 1995,10:1514—1518. C.G.Fu,L.N.Song,Y.Z.Fang,Ana1.Chim.Acta, 1999,399:259—263. S.Hoffstener—Kuhn,A.Paulus,E.Gassmann,H.M.Wid— met,Ana1.Chem.,1991,63:1541—1547. DeterminationofSixKindsofActiveIngredientsofSiJiQingby CapillaryElectr0ph0resisWithAmperometricDetection TANGZhu—xing,ZHANGDong-jin,WANGQ?一ling (1.SchoolofEnvironmentalandChemicalEngineering,ShenyangLigongUniversity,Shenyang110159,China; 2.ShenyangChemicalIndustrySchool,Shenyang110122,China; 3.ShenyangMedicalCollege,Shenyang110034,China) Abstract:Amethodbasedoncapillaryelectrophoresiswithelectrochemicaldetectionhasbeendevelopedforseparationandde— terminationofisovanillicacid,gentisicacid,kaempferol,quercetin,caffeicacidandprotocatechuicacidinSiJiQing.The effectsofworkingelectrodepotential,pHandconcentrationofrunningbuffer,separationvoltageandinjectiontimewereinvesti. gated.Undertheoptimumconditions,theanalytescouldbeseparatedina50mmol/Lboratebuffer(pH9.0).A300Ixmdiam. etercarbondiskelectrodehasagoodresponseat-4-0.95V(versusSCE)forallanalytes.Theresponsewaslinearoverthreeor- ders.Themethodhasbeensuccessfullyappliedtotheanalysisofrealsample,withsatisfactoryresults. Keywords:Capillaryelectrophoresis;Amperometricdetection;SiJiQing (上接第316页) 3结论 经过试验,对南阳思达特公司生产的甲基磺 酸亚锡溶液被氧化变色问题的处理结果为:将其 甲基磺酸亚锡配制成电镀及电子工业中经常用到 的浓度40%,50%,60%,70%时,为防止溶液被氧 化变色,影响电镀效果,在该不同浓度溶液中加人 抗氧化剂对苯二酚,可以有效抑制甲基磺酸亚锡 的氧化变色,从而改善其在电镀应用中的使用效 果,抗氧化剂对苯二酚的较佳加人量为0.3100 mL溶液. 参考文献 [1]李峰,王泉.重铬酸钾滴定法测定甲基磺酸亚锡中的sn 和sn的含量[J].应用化学,2003,32(4):51—53. [2]郭光美,王云清,段惠敏,等.氟硼酸盐锡铅合金镀液中锡, 铅含量的测定【J].电镀与涂饰,2000,19(3):29—31.[3] 徐红娣,邹群.电镀溶液分析技术[J].北京:化学工业出版社, 2003:165—170. [4]危青,张平民.硫酸亚锡的制备方法[J].广东有色金属学, 2001,11(1):32—35. [5]崔志明,刘安昌.甲基磺酸铅(?),甲基磺酸亚锡(?)的制 备[J].电镀与精饰,2001,23(4):26—27. StudyontheOxidizingDiscolorationProblemofStannousMethanesulfonateSolution Chuan-jiang,LIDan,LIQiu—hong (1.HenanChemicalTechnicalSchool,Kaifeng475000,China; 2.CollegeofChemical,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450002,China) Abstract:Theoxidizingdiscolorationproblemofstannousmethanesulfonatesolutionwasso lvedbyaddinghydroquinoneantioxi— dant.Throughexperiment,thebestdosageofhydroquinonewasdetermined. Keywords:Stannousmethanesulf0nate;Antioxidant;Hydroquinone