P2X3和CGRP受体在不同胎龄人胚DRG的表达分布（可编辑）

P2X3和CGRP受体在不同胎龄人胚DRG的 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达分布（可编辑） P2X3和CGRP受体在不同胎龄人胚DRG的表达分布 分类????厂体彩事; ‘足硕士学位论文 论文题目:乾盎篡蒿鬟驴龄 学科专业: 人体解剖与组织胚胎学 研究生姓名: 吴海平 导师姓名及职称: 潘爱华副教授 中南大学 年月洲 ? 洲 舢 洲 ? 川 ? 分类号 密级 硕士学位论文 和冲受体在不同胎龄人胚 的表达分布 娩天 :., . ‘ 研究生姓名: 吴海平 学科专业: 人体解剖与组织胚胎学 学院系、所: 基础医学院 指导教师: 潘爱华 论文答辩日期丝:皇:塑 答辩委员会 中南大学 年月工作 的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不 包含为获得中南大学或其他单位的学位或证 书 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 而使用过的材料。与我 共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。 日期: 作者签名:黑鱼至 丝年』月翌日 学位论文版权使用授权书 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校 有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文, 允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内 容,可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科 学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》, 并通过网络向社会公众提供信息服务。 导师签名 作者签名:呈垒圣硕十学位论文 中文摘要 摘 要 目的:观察和冲受体在不同胎龄人胚脊神经节的分布 表达规律,探讨和冲受体在神经系统发育中的意义。 方法:收集引产死亡分钟内的人胚胎例,分别是第、、 、、个月胎龄组,第、、个月胎龄组各例,第、个月 胎龄组各例。解剖获取各组人胚脊神经节,%多聚甲醛后固定, 常规酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋。石蜡切片厚岬,运用尼氏 染色、免疫组织化学染色的方法,观察和心受体在第. 个月胎龄组的人胚脊神经节中的表达分布规律,结合图像分析技术并 运用.软件进行单因素方差分析,比较各胎龄组间阳性细胞 数目的差异性。 结果:在不同胎龄组人胚脊神经节神经元尼氏染色后,观察到 尼氏小体呈蓝紫色,均匀分布于胞浆内,细胞形态大小正常,随着胎 龄的增加,神经元有逐渐增大的趋势。 运用免疫荧光双标记方法,用特异标记卫星细胞的谷氨酰胺 合成酶抗体与或受体双标记,检测到和受 体表达在神经元内。 免疫组织化学显示受体免疫阳性产物呈颗粒状分布于脊神 经节的中小型神经元的胞浆和胞膜,呈均质状,较深染,核不着色。 受体在各胎龄组神经元中均有不同程度的表达;其中第个 月胎龄组中有中型神经元出现,且受体表达呈弱阳性。在 第?个月胎龄组中受体免疫阳性细胞数逐渐减少,各胎龄 组间比较差异显著尸.。 免疫组织化学显示冲受体免疫阳性产物呈颗粒状分布于脊神 经节的小型神经元的胞浆和胞膜,呈均质状,较深染,核不着色。在 第?个月胎龄组的神经元中冲受体阳性细胞较少,且呈弱 阳性;在第?个月胎龄组的神经元中心受体阳性表达逐渐硕十学位论文 中文 摘要 增强,阳性细胞数逐渐增加,各胎龄组间比较差异显著尸.。 结论: 和受体在人胚的表达和分布随胎龄变 化呈现一定变化规律。在人胚,受体阳性产物分布于中小 型神经元,随着胎龄的增加,受体阳性细胞数逐渐减少。冲 受体阳性产物分布于小型神经元,随着胎龄的增加,心受体阳性 细胞数逐渐增加。上述结果为进一步研究这两种蛋白在神经细胞发育 过程中的作用及伤害性刺激传导中的意义提供形态学依据。 关键词: 人胚,脊神经节,免疫组织化学染色 ,冲, 英文摘要 硕十学位论文 ?冲 : ?印 , 之锄. :锄, , , .印 . 疏“.. % ’ ,的, . ’秽 印 眄 印 嘶 . .. . . : ’ 硒 . ’ .伊 锄弱.印 锄 砌 . ”邪.印 ,锄阳 叭 锄 尸.. ? 印印 ?妒弱? .之 .,,,叫 、矶, 冲 尸..: 印? ?唱 印 .?. 印 驴 】【 . . 邳 .冲印. 印 仃 :,腿锄驴, ?英文缩略词简表 硕十学位论文 英文缩略词简表 中文名 英文缩写 英文全名 嘌呤受体 嘶 冲 降钙素基因相关肽 圮 印 植物凝集素谷氨酰胺合成酶。 雒 物质 殴 朗 三磷酸腺苷 ’ 顶臀长 背根神经节 锄酉 三叉神经节 锄结节状神经节 觚百 免疫组织化学 瑚锄仃 多聚甲醛 肌 衙 磷酸盐缓冲生理盐水磷酸盐缓冲液 二氨基联苯胺 ,’伽亿?啪 牛血清蛋白 硕十学位论文 目 录 目 录 摘 要??.??. 英文缩略词简表??~ 第一章 前言??. 第二章材料与方法? .实验人胚??.. .实验试剂及仪器??.... .实验方法??。 ..实验人胚胎龄确定和分组..人胚灌注固定?。 ..取材?. ..组织包埋 ..切片和烤片..脱蜡和水化??。 ..抗原修复 ..免疫荧光染色?. ..免疫组织化学染色..尼氏染色??. ..数据收集处理和统计学分析? 第三章结果。 .尼氏染色. .免疫荧光染色?. ..人胚中受体免疫荧光染色. ..人胚中受体免疫荧光染色??.. .免疫组织化学染色 ..人胚中受体免疫组织化学染色? ..人胚中冲受体免疫组织化学染色.. 第四章讨论。 . 受体在人胚中的表达分布及意义??。 . 受体在人胚中的表达分布及意义??。 硕十学位论文 目 录 第五章结论. 第六章 图片说明?. 参考文献 综苤 致射 在读期间发表的学术论文及相关成绩??. 硕十学位 第一章 前 言 神经系统的神经元发育、分化是目前研究的热门课题之一。研究胚胎神经 元如何发育及发育过程中相关蛋白的表达和分布规律,为进一步探讨胚胎时 期神 经系统神经元正常发育的相关机理提供形态学的依据。 受体为介导的配体门控性的离子通道受体家族?,目前已经克隆出 种不同的受体亚单位,每种亚单位都具有独特的药理学特性和分布特征心。 研究资料表明,受体与胞外的结合后,受体通道打开,允许、 、等阳离子通过,但以的通透性最为显著口。受体亚单位是饥 等?年从鼠的背根神经节中克隆出来的,利用原位杂交技术观察到受体 定位于背根神经节的小型神经元。研究发现此亚单位与注射后引起疼痛加剧 有关?。受体主要分布于孤束核、感觉神经元和交感神经元等?,并发现其 主要在脊神经节 西’的小型神经元表达,而这些小型神经 元大部分为痛觉神经元,尤其高度选择性的表达于与伤害性感受信号传导有 关的 小型神经元内。此后发现同聚体、、、及其异聚体广泛分布 于脊髓、神经胶质细胞、初级感觉神经元及其突触口。锄等随研究发现在大 鼠胚背根神经节、三叉神经节和结节状神经节的神经元中, 几乎全部表达受体阳性,出生后受体阳性细胞数降低,提示受体 与神经系统神经元发育成熟有关。小鼠和大鼠胚胎时期受体免疫阳性表达已 有 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 ,在人胚胎时期的神经系统发育过程中有何分布规律,及其在神经系统的 发育过程中起着怎样的作用还未见报道。 中的感觉神经元内含有丰富的神经活性物质,如物质,降钙素基因相 关肽 酣印,冲和钙结合蛋白等,受体阳性神 经元主要分布于的小型神经元,参与伤害性刺激的感受向中枢的传递阳。 受体作为一种神经递质,广泛的分布于中枢神经系统和周围神经系统中, 包括脑干的运动核团、脊髓前角的运动神经元和初级感觉神经元及其突起。在周 围神经系统中,冲受体主要参与传递和调节伤害性感受信息,参与神经肌接 头的发育与重塑,扩张血管,以及在神经组织损伤后再生的过程中发挥着重要的 作用“州羽。研究发现受体在大鼠纹状体和苍白球内具有独特的分布特征和 一定的生后发育规律朝.在鼠胚的,和中只有少量的细胞呈受 体免疫阳性饵。到目前为止,还未见到关于冲受体在人胚胎时期的分布规律 及其在神经系统发育过程中如何发挥作用。硕十学位论文 第一章 前言 在内感受伤害性刺激的神经元可分为种不同的化学类型西,一类是神 经生长因子依赖性的,含有受体结合;另一类是胶质源性营养因子依赖 性的,缺少神经肽,结合;受体主要与共存,说明受体只存在于 缺少神经肽的感觉神经元引。研究发现在鼠胚胎时期,几乎所有冲受体免疫 阳性细胞都表达受体,然而在成年鼠和受体只有少量的共表达旧。 骨癌小鼠模型中,当癌细胞侵犯时,在免疫阳性的外周神经纤维上受 体表达上调叼。偏头疼时,其调节因子出现在细胞外微环境中,可使三叉 神经元向脑干三叉神经核传入的敏化时间延长,这种敏化作用可使介导的 受体的表达和功能增强;在体外培养的三叉神经节,可诱导被 介导的离子电流上调博。可见参与调控受体痛觉信号向中枢的传导。 本研究主要用免疫组织化学染色的方法,在激光共聚焦显微镜下观察人胚 胎时期中和强受体的分布和表达规律,为进一步探讨胚胎时期 神经元正常发育成熟过程中的相关机理及在伤害性刺激传导中的作用提供 形态 学依据。 第二章 材料和方法 硕十学位论文 第二章材料与方法 .实验人胚 收集水囊引产后死亡分钟内的人胚例性别未分,第、、个月 龄组各例,第、月龄组各例,每例标本均经孕妇本人同意,符合医学伦 理学和法律规定,由长治医学院附属医院妇产科提供。 .实验试剂及仪器 试剂和设备 生产厂商 无水乙醇 湖南师范大学试剂厂 湖南师范大学试剂厂 %过氧化氢分析纯 上海国药集团 多聚甲醛 二甲苯 上海国药集团 二氨基联苯胺 切片机 姐,觚 【显微镜 锄 荧光显微镜 锄 锄 .图象分析系统 彻锄 多克隆兔抗一抗 多克隆兔抗一抗冲 舯 单克隆鼠抗一抗 . 舯 山羊抗兔二抗 中杉公司 辣根酶卵白素三抗 中杉公司 肿 树胶 舯 石蜡 上海国药集团 第二章 材料和方法 硕十学位论文 .实验方法 ..实验人胚胎龄确定和分组 收集水囊引产后死亡分钟内的人胚胎,测量其体重、顶臀长 .】【,和足长。根据孕妇的术次月经,参照国人胚胎发育表,结 合其体重、、足长与胎龄的关系确定胚胎胎龄,并记录分组表。妊? 周为第个月胎龄组,妊?周为第个月胎龄组,妊卜周为第个月胎 龄组,妊?周为第个月胎龄组,妊?周为第个月胎龄组。 表不同胎龄体重,,足长咖 ..人胚灌注固定 将收集的引产后死亡胎儿固定于实验台上,打开胸腔,经左心室插管入升 主动脉快速灌注生理盐水冲洗血液,剪开右心耳,从右心房流出淡红色液体 即可, 然后用%固定液按约/灌注,先快后慢;?冰箱静置小时后取 材。 .取材 从冰箱中取出人胚,解剖椎管,打开椎间孔,用自来水冲洗,分离腰部脊 神经节,取出脊神经节,浸入%固定液中?冰箱后固定? 小时,按照标本大小确定固定时间。注意解剖提取脊神经节时,须完全剥离脊 神经节表面神经外膜,以免神经外膜影响后续实验中浸蜡过程。取材过程中 观察 硕学位论文 第二章 材料和方法 神经节组织是否松软易碎,若组织松软易碎,说明组织固定欠佳,或胚胎死亡 时 间过长致神经组织分解,不符合实验 要求 对教师党员的评价套管和固井爆破片与爆破装置仓库管理基本要求三甲医院都需要复审吗 。 ..组织包埋 按常规包埋步骤进行,简述如下: .脱水:用%、%、%、%、%、%、%、%的酒精中梯度 脱水每次约;%酒精脱水,×次。 ×次。 .透明:纯二甲苯透明, .浸蜡:从低熔点到高熔点次,第一次石蜡的熔点在?一?,第二 次石蜡的熔点在??;/次,组织块较小的时间相应的缩短。 .包埋:用硬蜡,熔点一般在??,温度不得超过?,操作要迅速, 以防蜡液凝固,同时做标记。然后将蜡块保存,标本收齐后进行切片 ..切片和烤片 .切片:以的厚度进行切片,用毛笔轻轻将蜡片拖起,而后用眼科镊子夹 起放入伸展器的温水中水温一般低于蜡溶点肚?,在?左右,展平 后进行分片和捞片。切完一个蜡片后,需认真清理水面,以免组织碎片造成污 染。 .贴片:将蜡片捞起并附贴于涂有明胶的载玻片上,切片应放在载玻片左或 右/处中央,留出贴标签的位置。蜡片与载玻片之间应无气泡。 .烤片: 将已放置了蜡片的载玻片呈。斜置片刻,待载玻片上的水分流 下后插入切片架中,放入烤箱内烘烤,一般在?烤箱内过夜,经烘烤后蜡融 化,切片牢固地贴于载玻片上。 ..脱蜡和水化 .脱蜡:组织切片置于二甲苯中脱蜡,次。从烤箱中取出即脱蜡 .水化:无水乙醇、%、%、%浓度乙醇依此水化,/次。 , ..抗原修复 .自来水冲洗,蒸馏水冲洗 .. × .洗, .微波热修复:将切片放入盛有 ./枸橼酸钠缓冲液. 的容器中,置微波炉里中火加热×,中间取出冷却,然后取出放切片的容 器,室温下自然冷却,注意:不可将切片从缓冲液中取出冷却,以便使蛋白能 够恢复原有的空间构型 ..免疫荧光染色 兔抗和冲受体分别与双标免疫荧光染色步骤如下: 第二章 材料和方法 硕学位论文 × .抗原修复后切片. .洗, .%.%封闭, 室温 .加一抗兔抗:鼠抗:双标; 室温 冲兔抗:鼠抗:双标; ?冰箱过夜;同时用代替一抗,作为阴性对照。 × .. .洗, ,: ,:;羊抗鼠 .加二抗羊抗兔 室温避光 × .. .洗, .干燥,甘油封片。 荧光显微镜下观察。 ..免疫组织化学染色 兔抗和冲受体免疫组织化学染色按照常规染色步骤法进 行,概述如下:.抗原修复后切片用. .洗, .%甲醇 室温 .%.%% 一封闭, 室温 .:或:一抗兔抗, ?冰箱过夜;同时用代替一抗,作为阴性对照。 × .. .洗,室温 .二抗生物素化羊抗兔,:, × ...洗 室温.三抗,复合物辣根酶卵白素,:, × .. .洗, ..%.%现用现配显色, 镜下控制染色,. .终止反应 .常规梯度酒精脱水,二甲苯透明. .中性树胶封片。 .尼氏染色 .石蜡切片脱蜡、水化,蒸馏水洗; ..%焦油紫水溶液染色,约分钟; .蒸馏水洗,%的乙醇分化镜下控制,使背景近于无色: .纯乙醇迅速脱水,二甲苯透明,树胶封片. 硕学位论文 第二章 材料和方法 ..数据收集处理和统计学分析 每个标本随机取张免疫组织化学染色切片,显微镜同本 公司下观察并拍照。每张切片随机取个高倍视野×,对中 和冲受体免疫阳性细胞进行计数,实验数据采用均数?标准差?表 示,通过.软件对各组间均数进行单因素方差分析,尸.具有统计 学意义。 第二章结果 硕学位论文 第三章结果 .尼氏染色 焦油紫水溶液,可以用作显示尼氏小体的常用染料,经过酒精分色后可以清 晰显示脊神经节内神经元的形态和大小。各胎龄组均可见神经元胞体轮廓清 晰, 胞浆内尼氏小体呈蓝紫色。细胞核近似圆形,呈空泡状,其内有较少的染色质 颗 粒,核仁清楚,呈蓝紫色。 在第.个月胎龄组的人胚中,神经元比较小,细胞呈圆形或卵圆形, 随着胎龄的增加,神经元有增大的趋势,排列逐渐分散;第个月胎龄组的 中排列分散,细胞进一步增大,呈圆形、卵圆形、锥体型等多种形态。见图 .免疫荧光染色 ..人胚中受体免疫荧光染色 在人胚中,观察到受体阳性产物均匀分布于中小型神经元的胞 浆和胞膜,呈红色;谷氨酰胺合酶锄 ”?,是一种特异标记 卫星细胞的标志物,表达于卫星细胞的胞膜上,呈绿色。和双标后可见 卫星细胞围绕在神经元的周围。图、、 ..人胚中受体免疫荧光染色 在人胚中,观察到冲受体阳性产物均匀的分布于小型神经元的胞 浆和突起内,呈红色;表达于卫星细胞的胞膜上,呈绿色。和双 标后可见卫星细胞围绕在神经元的周围。图、、 .免疫组织化学染色 ..人胚中受体免疫组织化学染色 在不同胎龄人胚 神经元中均检测到受体的阳性表达产物。按照 内神经元的分类,直径在岬以下属于小型细胞,在岬之间为中型细 胞,岬以上为大细胞。免疫阳性产物呈颗粒状分布于中、小型神经 第三章结果 硕十学位论文 元的胞浆和胞膜,呈均质状,较深染,核不着色。在第.个月胎龄组的中 几乎全部是小型神经元,且表达受体阳性;在第个月胎龄组中有中型 神经元出现,且受体表达呈弱阳性。在第?个月胎龄组的中免疫 阳性细胞数逐渐减少。图、、、、、、、 ..人胚中受体免疫组织化学染色 受体免疫阳性产物呈颗粒状分布于的小型神经元的胞浆和突起 内,呈均质状,较深染,核不着色。在第?个月胎龄组神经元中受 体阳性细胞数较少,且呈弱阳性表达;第?个月胎龄组神经元中受 体阳性表达逐渐增强,阳性细胞数逐渐增加。图、、、、、、、 各组间内和冲免疫组化阳性产物细胞数比较见表、图 表不同胎龄组内和受体免疫组化阳性细胞平均数? 阳性细胞数各相邻组间进行方差分析,. 心阳性细胞数各相邻组间进行方差分析,.. ? ? ? ? 一硒堕 的 一?囫一 一眩?一 ? 的 鼷恒堪斟\牛籁霉器魈匿 渤. 钿 钿图不同胎龄组中和免疫阳性细胞平均数比较图 组问比较. 单位面积为一个高倍视野 硕十学位论文 第四章 讨论 第四章讨论 . 受体在人胚中的表达分布及意义 受体是可以被细胞外激活的配体门控性离子通道受体家族?,目前 已经克隆出种不同的嘌呤受体亚单位,受体是受体的一种亚型。 年受体从大鼠中克隆出来,利用原位杂交技术观察到受体定 位于小型神经元。本研究呈现人胚胎时期中受体的表达,结果显 示,在人胚胎时期的第?个月胎龄组的中神经元有增大的趋势,但仍然是 小型神经元,均表达受体阳性;在第个月胎龄组的中有中型神经元出 现,且受体表达呈弱阳性。研究发现在大鼠内可见大量的受体阳 性神经元胞体及弥散的神经纤维,且主要为小型神经元,几乎所有的阳性细 胞均结合植物凝集素?引。在大鼠和的神经元内阳性产物主要表达 于中小型神经元例。有研究 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 受体在成年大鼠的感觉通路中有一定表达, 相比之下在胚胎时期和新生阶段表达更为广泛啪。研究发现在鼠胚、和 中的神经元几乎全部表达受体阳性哺,与本研究的结果基本一致,可以 推测在感觉神经元中受体亚单位是受体家族中的显性受体亚单位。 在本研究中,我们观察到在中受体免疫阳性产物呈颗粒状分布于 中小型神经元的胞浆和胞膜,呈均质状,较深染,核不着色。在第?个月胎龄 时内的神经元胞体较小,外形呈圆形或是卵圆形,细胞密集,表明此时神经 元还没有成熟,随着胎龄的增加,胞体的直径有逐渐增大的趋势,但仍属于小 细 胞,均强表达,到第个月胎龄组有中型神经元出现,内受体表达 的阳性细胞减少,推测受体与调节细胞的成熟有关。研究发现受体在 鼠胚胎时期中几乎所有的神经元表达受体阳性砸,而出生后阳性细胞数 下降,与本研究结果基本一致,胚胎中后期随着神经系统的发育成熟,受体 表达下降;中受体的表达下降还可能与神经系统成熟过程中细胞的凋 亡有关。和即啪’?等研究发现受体广泛分布于胚胎时期和新生期的 鼠脑内,相比之下,其在胚胎时期的中枢神经系统中表达显著,在成鼠脑内分 布 有限,提示受体可能参与神经突的生长,当突触转导成熟后下降。在人胚第 个月胎龄组,神经元比较小,神经元还没有成熟,受体呈强阳性表达;随 着胎龄的增加,细胞突触逐渐形成,阳性细胞数逐渐下降,在中型神经元内 呈弱阳性表达,推测受体可能与突触形成有关,突触形成后表达下降。 肌【匏等研究发现在胚胎时期和出生后天的新生鼠的蜗神经节内受体 免疫阳性呈现短暂的阳性表达,认为受体介导的嘌呤信号在蜗神经节突触的 硕十学位论文 第四章 讨论 再生及听力出现之前神经传递的建立中起着重要的作用。在新生鼠的颈上神经节 交感神经元内,受体呈现短暂的表达,提示其可能与突触的形成有关,突触形 成后表达下降?。研究证明神经传导物质如在神经系统的发育过程中具有营 养支持的作用瞳?。胚胎时期受体在未成熟神经元的强阳性表达可能与为神经 元提供营养支持有关。在青蛙、鸡以及哺乳动物中,作为一种快速突触传递 的神经递质是不同器官和组织发育的关键调节剂嘲。而受体亚单位是介 导的门控性离子通道家族,在初级感觉神经传入过程中具有产生兴奋和调节突触 传递的作用乜射。在鼠的嗅觉通路中观察到、、受体亚单位阳性表 达,嘌呤信号出现在整个嗅粘膜中,表明受体亚单位可能参与了细胞的增生、 凋亡、嗅觉信号的产生和传导、粘液的分泌等功能啪。用免疫组织化学法在激光 共聚焦显微镜下观察到受体在小鼠咽部粘膜中表达的阳性结构,主要分布与 咽部粘膜内的感觉神经纤维,未见味蕾细胞呈受体阳性反应,但与每个味蕾 相连神经纤维及其终末端均呈受体阳性表达,着色很强,表明介导的 受体亚型在味觉信号的产生和传导中发挥着重要的作用乜。本研究发现在人 胚神经元内受体呈阳性表达,在胚胎中后期有下降的趋势,可见胚胎 时期受体在突触的形成,细胞的发育成熟,细胞的营养支持等方面发挥重要 的作用,出生后参与感觉信号的产生与传导。 生理学研究表明介导的受体参与痛觉及其它伤害性刺激信息向中 枢的传导啪,伤害性刺激的传导主要是经过的小细胞传向脊髓后角的第板 层。研究发现在大鼠存在受体表达,且主要存在于中、小型神经元, 大鼠坐骨神经损伤后受体阳性表达显著增加嘲。在鼠后背皮肤损伤引起 受体阳性神经元表达显著增加,椎间盘损伤后受体表达无显著增强啪, 可见机械性损伤后受体阳性神经元表达变化无差别,提示受体与伤害 性刺激的信号传导有关。重复皮下注射异丙肾上腺素制备心肌梗塞的老鼠模 型, 用免疫组化,砖锄和技术检测到实验组受体蛋白的升 高,提示受体与心梗中痛觉的传导有关一。用., 和免 疫荧光技术在小鼠的泪腺中检测到受体蛋白,可以利用受体刺激泪 腺,引起泪腺中和蛋白分泌增加四。用福尔马林致痛大鼠的足底,在脊髓 背角的第板层和相应的中受体阳性表达增高,说明受体可能参 与了感受伤害性信息由埝向脊髓背角的传导,是其产生伤害性防御反应的机 制 之一?。用去甲肾上腺素刺激大鼠,可以使大鼠中受体免疫阳性反 应表达上调,证明去甲肾上腺素有助于受体痛觉敏化作用的发生汹。用 和狮的拮抗剂.治疗骨癌小鼠,可以使骨癌小鼠的疼痛行为减轻,提示 和砀在痛觉的传导中起着重要的作用沸。可见受体亚型参与痛觉信硕十学位论文 第四章 讨论 号的转导和调节。 . 受体在人胚中的表达分布及意义 降钙素基因相关肽 . 印,主要表达于 的小型神经元,参与伤害性刺激信号的传导和调节口。是由个氨基酸残基 组成的一种活性肽,作为一种神经递质,广泛分布于中枢和周围神经系统,包括 脑干运动核团、脊髓前角运动神经元和初级感觉神经元及其突起。在周围神经系 统中冲参与传递和调节伤害性感受信息,扩张血管,改善血流,刺激乙酰胆碱 能受体的合成和积聚,参与神经肌接头的发育与重塑,具有神经保护及促进神经 组织损伤后的再生的作用州羽。 本研究发现,在人胚中,冲受体主要表达于小型神经元,在第?月 个胎龄组表达阳性细胞数较少,且呈弱阳性;在第?个月胎龄组阳性细胞 数逐渐增加,且呈阳性表达。随着胎龄的增加,神经元逐渐发育成熟,在 神经元中表达增强,表明对神经元后期的发育和分化具有一定调控作 用。觚砸’等发现在鼠胚胎的,等神经节内见到分布于小型神经元 但阳性细胞数比较少,出生后增加。受体广泛分布于豚鼠耳蜗的螺旋神经 元,骨螺旋板神经孔等部位,提示受体是耳蜗传入神经系统重要的神经递 质或神经调质,心受体可能通过调节螺旋神经元、毛细胞和支持细胞等影响 听功能,也可能影响耳蜗的血流呻,。研究发现在鼠胚的上橄榄复合体内存在 心受体免疫阳性产物,冲受体的阳性表达变化与上橄榄复合体的发育呈 一定的相关性,提示可能与突触基因的表达有关嗍。本研究发现在人胚的后期, 随着神经细胞的成熟及突触形成,表达增强,提示可能与突触基因 的表达有关。受体在大鼠的纹状体和苍白球内具有独特的分布特征和一定 的生后发育规律驯。可见受体不但分布于,耳蜗,可能还分布于某些 具有神经内分泌功能的细胞,由这些细胞释放和储存,发挥营养、修复和保护神 经元,促进神经元发育和成熟等作用。 在动物体内的电生理实验表明冲受体对物质具有调节作用,有利于痛 觉信号的传递?。受体介导的机械性伤害刺激的传导是借助促进在脊髓 背角的释放来实现的,受体具有强烈的扩张血管的作用,还能增强速激肽 对毛细血管通透性和血浆蛋白的渗出作用,刺激各种炎症介质释放和聚集,共同 形成神经炎症。向对热和压力刺激过敏的大鼠脊髓鞘内注射抗血清后,可 使其对热和压力的刺激反应转为正常,可见存在于初级传入神经的内源性冲, 可促进热和机械性痛觉向脊髓背角的传递们。因此受体阳性神经纤维在疼 讨论 硕十学位论文 第四章 痛、炎症及神经修复过程中起着重要的作用。周围神经损伤后受体发生明 显的时空模式表达变化,可参与早期向中枢神经系统传递损伤信号、激活 多种途径诱导神经再生,受体是神经再生过程中的非常重要的物质?。本 研究发现在胚胎时期,随着胎龄的增加,神经元逐渐发育成熟,冲受体在 中阳性表达增强,充分表明受体在神经元的分化、发育过程中的调控作用 日益明显。受体在中的阳性表达规律显示,受体可能参与神经 元在发育,分化中的调节功能,还与突触基因的表达有关。 中感受伤害性刺激的神经元可分为种化学类型阴引,一类是神经生长因 子依赖性的,含有冲受体,结合;另一类是胶质源性营养因子依赖性的, 缺少神经肽,结合;主要与共存,说明只存在于缺少神经肽的感 觉神经元中射。研究发现在鼠胚胎时期几乎所有表达受体阳性的神经元都 表达阳性聃,然而在成年鼠,和心受体只有少量的共表达。在口腔 癌的鼠模型中,随着癌细胞侵入的变化,三叉神经节内和阳性细胞数 增加,和在痛觉的传导中起着重要的作用?。体外培养的三叉神经节 实验中发现冲通过磷酸化,使受体表达和功能增强钔。据此可以 推测和受体在胚胎时期对神经元的发育成熟、分化、突触的形成以及 痛觉的传导等方面具有协同的作用。 硕十 现一定的变化规律。在人中,受体免疫阳性产物分布于中小型神经元, 随着胎龄的增加,受体阳性细胞数逐渐减少。受体免疫阳性产物分 布于小型神经元,随着胎龄的增加,冲受体表达逐渐增强,阳性细胞数逐渐 增加。上述结果为进一步研究这两种蛋白在神经细胞发育过程中的作用及在 伤害 性刺激传导中的意义提供形态学依据。 硕士学位论文 图示不同胎龄人胚尼氏染色 图示第个月龄组, ?神经元中的尼氏小体 岬 图. 示第个月龄组, 沁神经元中的尼氏小体 岬 图示第个月龄组, 神经元中的尼氏小体 图.示第个月龄组, ?神经元中的尼氏小体 璐 曲啪舭锄巧,’ 产岫量眦 肛 一 眦伽曲,,’ ? 即?吣 啪蛐锄巧,’ , 肛衄. ?嵋 仆啪蛐锄,’硕士学位论文 第六章图片说明 图示和受体在人胚胎中免疫荧光染色 图示在人胚?中,受体表达于中小型神经元红色 岬 图.示在人胚中,表达于卫星细胞的胞膜绿色 盯岫 图示在入胚沿中,和双标后,卫星细胞围绕在神经元的周围卵岬 ? 沁啪锄锄巧, 【蚰 舔船砷 啪锄盯咖 柚 岫岫伽粥.北 甜? 娩锄锄,,坞 ?? 勰懿 ??锄柚 璐 】岫岫他?%?.嗍 铲肛 廿龇 ? 锄锄,, 锄 圮? 鹪? ? 岫岫聆饥? ? 图示心和受体在人胚胎中免疫荧光染色 图 示在人胚?中,受体表达于小型神经元红色 卵岬 图. 示在人胚中,表达于卫星细胞胞膜绿色 产? 图. 示在人胚中,和双标后,卫星细胞围绕在神经元的周围 产岬 蛐 啪锄珂也 代 心鹪砷 锄盯铷豫?.邮 啪锄锄。 他 鹪鹤鲷 ? 锄姗 岫?.毋嘲 ?咂 雏 啪锄珂。 .. 啪嬲 鹪饥 岫他?册 始沁 岫 ?. 严岬 硕士学位论文 第六章图片说明 图 在?中免疫组织化学染色 图示人胚第个月龄组,受体分布于的小型神经元 产邺 图.示人胚第个月龄组,受体分布于的小型神经元 图.示人胚第个月龄组,受体分布于的小型神经元 岬 图示人胚第个月龄组,受体分布于的小型神经元 严岬珈旧锄锄,也 懈’研、 ?够 懿坞够 嫩.姗? 髓 岬 ,吣 蚰?锄缸啪劬啪觚锄叩,也 懿嘲?托船鹤 圮 铭纳 吣“姗岫缸. 啪劬。仆啪蛐锄,, 平伪? 嗽印衍、糯 吐 铲邮 硎删咖锄 璐 咖锄略 鼬 够 . 啪锄锄驴, 踟嬲彻 嗽印 锄曲盯 岫.铲 懿砷 沁璐 图 在中免疫组织化学染色 图.示人胚第个月龄组, 受体分布于的小型神经元 图示人胚第个月龄组, 受体分布于?的小型神经元 铲肿 图们示人胚第个月龄组, 受体分布于的中小型神经元 岬 图.示人胚第个月龄组, 受体分布于的中小型神经元 野岬 ?托也? 鹬 一 啪柚锄巧,量圮懿鸥? 他印佃 锄酏 砷 ’吣 眦蚰弧仃 圮伽胁?鹤 一 锄锄巧,吐 【他鼹 唧?心 讪 懈 吼岫?锄蚰够 岬?够锄巧, 懿佗路? 删 锄觚 山锄钉? 岫岫?锄旬呼 岬? 鹤 蛐锄哕, 懿嘲 帕郦 咖觚 啪姗吼盯砒岫锄呼 ? 硕士学位论文 图 心在中免疫组织化学染色 图.示入胚第个月龄组, 心受体分布于的小型神经元 ? 图.示人胚第个月龄组, 受体分布于的小型神经元 图.示人胚第个月龄组, 受体分布于的小型神经元 舯 图示人胚第个月龄组, 受体分布于.的小型神经元 俨岬口曲 柚锄巧,州沁 %佗?冲阳肋 鹊甜 锄白??圮沁憾 蛐啪缸 ? 岫. 一 啪觚咖, 【 懿懈伽 锄鼬盯 、?嬲删 鹊 舢岫锄蚰够 劬 . 啪柚啪巧,地【锣懿他伽帕凹 .锄盯廿 鹳砷耐 璐 蚰锄奶 岬 ? 啪锄伽驴,?啪 既懈 衙 啪嬲 璐 岫锄略 岬