农药产品分析的质量控制农药产品质量检测与判定（可编辑）

农药产品分析的质量控制农药产品质量检测与判定（可编辑） 农药产品分析的质量控制农药产品质量检测与判定 1 农药产品质量检测与判定 农药产品分析的质量控制原药含量分析制剂含量分析 报告人: 潘灿平杂质分析 中国农业大学 Email: panc@//0>. 原药产品质量的指标规定 制剂产品质量规定( FAO 规格 视频线规格配置磁共振要求常用水泵型号参数扭矩规格钢结构技术规格书 ) (FAO 规格)According the FAO Manual[i], the activeThe active ingredient content of technical ingredient content of technical materials concentrates and formulated pesticides should be expressed as: should be expressed as:"The [ISO common name] content shall be“The [ISO common name] content shall be declared not less than.g/kg and, when declared g/kg or g/l at 20 ? 2?C, and, determined, the mean measured content when determined, the mean measured shall not be lower than the declared content shall not differ from that declared content." by more than the following tolerances:”As the tolerances for pesticide product generally correspond to the 95% confidence level,thus standard deviation of the variability of active ingredient content, ST, can be derived from the tolerance intervals T specified for the mean measured content of the product: ST T/1.96,T: tolerance intervals, a.i. 可变化范围 ?ST:a.i.可变性 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 偏差 12 2 S S S m T C S Ra S C n 建立新的可信范围? 2 2 within laboratory Sra ? 1.5 CIPAC Sr S S ra r : Sra ~ Sr + S Ra 2 2 2 2 ' 2 2 + + S S S L Sp A S S S T Ra m T 2ST' 获得较窄范围 ST 的可能性 增加分析的重复次数? 2 2 S S ra r + S Ra 增加分析方法的精密度? 2 2 2Uncertainty andcompliance limits 原药产品分析: 有效成分的最低值Testing the minimum active ingredient content of technical active ingredientThe mean a.i. content should not be significantly lower than the declared contentInterpretation with expanded uncertaintyTesting the minimum active ingredient content of technical The FAO Specification declares the active ingredient minimum a.i. content, e.g. 950 g/kg. The mean a.i. content should not be significantly lower than the declared contentxμ ts μ ??x + q x,μn x x n 1 X U 时 Impurity tests 2 产品质量分析的重要要素可靠的分析方法: CIPAC、AOAC、 国标、行业if the measured impurity is significantly exceeds 标准、经过验证的企业标准、权威文献报道的方 the specified limit or not法可靠的分析实验室质量控制手段: 内部质 量控制 IQC; 外部质量控制 ts m ??x -公认的原则: 采用标准分析方法;开发并验证用 于质量控制的分析方法、使用实验室熟练掌握的 n 分析方法 3FDA 实验室检查中发现的一些问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 : 测量值的组成 Laboratory System 2002: 212 Inspections US Method Validation Training/Qual Observed value: 13% 4% Controls. General xi m + B + e Stability Program 35% 21%whereM: 平均值B is bias ; Inadequatee is 随机误差; Records 27%μ is 真值; often not known * Reference: Albinus D’ Sa, FDA, CDER Office of Compliance, from AAPS, Nov. 2002 presentation. 单个实验室内部的误差来源 B B 1- 每个分析测试员之间的差异, A 2- 仪器之间的差异, 3- 实验试剂与消耗品之间的差异, C 4- 一定时间内以上1、2、3的差异, D A: Sr;B: run bias; C: lab bias; D: method bias 测量不确定度的来源 在实际分析工作中,不确定度典型的来源包括: 1)对样品的定义不完整或不完善; 2)分析的方法不理想; 3)取样的代表性不够; 4)对分析过程中环境影响的认识或控制不完善; 5)对仪器的读数存在偏差; 6)分析仪器计量性能(灵敏度、分辨力、稳定性等)上的 局限性; 7)标准物质的标准值不准确; 8)引进的数据或其他参量的不确定度; 9)与分析方法和分析程序有关的近似性和假定性; 10)在表面上看来完全相同的条件下,分析时重复观测值的 变化等。 4结果精密度的表述 不确定度计算: 例X AverageXi +- t * Sigma * / Squarerootn ?n=测定次数; Sigma: 方法的重复性; t:一定容错概率下包含因子; Xi:平均值 Pesticide Residue Workshop, April 28th, 2009, Beijing 不确定表述实例 分析中的三个重要因素 3 inter-linking parameters in analysis 参比物质之间的关联 方法验证否? 方法验证 fit for purpose? 可溯源性 TRACEABILITY 不确定度 结果的可信范围 UNCERTAINTY Pesticide Residue Workshop, April 28th, 2009, Beijing 可溯源性通过一系列的比较来实现 何时进行方法验证 International Primary Standards, set by SI International Committee of Weights and Measures Units CIPM Paris 1,2,3 F 新方法开发 1,2, 3 F F or P Primary Maintained by National 现有方法的适应(新的基质等) Measurement Institutes standards 1 P or F 标准方法的改良 1 P or F 质量控制显示分析方法有偏离 Used by industry and checked 1 2 P or E periodically against Primary 不同实验室之间方法交换 Industrial reference standards standards 1 仪器、操作人员改变 P 1 新的试剂与配件 P Industrial working standards 2 已验证方法长时间未采用 P 2 实验室管理或相关的改变 P 2 新的协作研究方法 P Balances, thermometers, pressure 2 经过验证但未经协作研究验证 P + E gauges etc found in laboratories 2 文献报道、有方法的特征参数 P + E 1,2,3 文献报道、无方法的特征参数 F F: full validation; E: extensive validation; P: partial validation; 5The definitions used in the requirements for extension of CIPAC analytical methods to other formulation typesConcentration range. The range of concentrations from the highest concentration of the analyte in a collaborative trial to 50 % of the lowest concentration. 方法应 方法 用Minor change. e.g. the change of the procedure for the 验证 preparation of the sample solution without any further dilution of sample and calibration solutions. The change may be required by the physical nature of the formulation or by interference from formulation components. 方法优化Major change. A change of the basic principles of the method e.g. change of chromatographic conditions etc农药分析方法 验证的内容(1) 农药分析方法验证的内容(2) 灵敏度 Sensitivity: 不同浓度样本的响应大小 准确性 Accuracy: 与真值的偏离程度 特异性 Specificity: 分析物定性的考察 添加回收率Recovery: 测定样本中分析物全部 线性范围 Linearity: 分析的可靠范围(定量分析的基 的能力 础) 重现性 Reproducibility精确性 Precision: 结果之间的接近程度 稳定性 Stability 分析方法各步骤中分析物稳 定性 抗干扰能力 重要的参考: CIPAC 分析方法指南 分析范围 Deviation from the AOAC- 讨论 CIPAC procedureRegulatory laboratories are forced to deviate from the CIPAC procedure if they have to analyze a number of different pesticide productsas they cannot change columns and eluents after each product or on daily basis due to cost and time restrictions? deviation: at the determination step? sample preparation? extraction can be carried out according to the CIPAC or AOAC procedure ; use of large amount of very expensive analytical standards? Solution? 6Application of CIPAC method: Q: 双柱验证-定量分析的例子假设采取内标法测定某杂质, CVra Blank formulation or no interference proof are 1.5%. 对同一个提取液的含量分别进行3 necessary when apply with new formulations. 次测定。CPSIL8CB 0.535 mg/ml :no interface proof by different columns etc CPSIL5CB 0.562 mg/mlQ:两次的结果是否有差异 - 是否色 The use of "multi pesticide analytical methods" 谱柱中有干扰物? Method Validation for the active substance xx 2 2 1 2 2 n ?1s + n ?1s 1 1 2 2 t 特异性:干扰物 3% area s 1 1 p线性: + ?20%:r0.99: 3×2 or 1*5level + n + n2 s 1 2 p n n 1 2Accuracy: 回收率, 需要测定干扰物质影响和方法精密 度。重复性: 至少5个重复, 符合改良的Horwitz 方程。% Analyte Proposed acceptable RSDrThe calculated t value is 4.018,Horwitz value x 0.67 %RSDR 21-0.5 logC ?t2α0.05, ν4 2.776100 1.34 ; 50 1.49201.71; 10 1.90The difference is significant 5.9238%. The 52.10; 22.41 results indicate the possibility of impurity 12.68; 0.253.30 Method Validation for relevant impurities 不同含量下 回收率要求特异性: 证明在有效成分、或者其它杂 质 存在时可以检出某一杂质线性范围准确性: 回收率精密度 ?LOQ 7实验室质量控制 外部质量控制手段 实验室内质控 实验室间质控初步实验室间研究: 由两个或多个实验室自我 控制外部质控 参加, 评价一种方法, 确定其是否具备条 件作为协作研究的对象。发现随机误差和新出发现系统误差和实验 现的系统误差 室间数据的可比性评价分析质量的稳定评价实验室的测试系实验室间检测能力测试 Performance 性 统和分析能力 Test:是分析的基础、必有效的校核是参加与 分析经仔细制备的均匀样本, 以证实和考核实验 需、常规 标准实验室的比对 室或分析人员的试验水平。 实验室内部控制手段 国际 能力验证要 求国际指南ISO/IEC指南43:1997。正在由ISO/CASCO-WG28 进行修订,修订后将变更为国际标准,代号为方法验证中采用已知 repeatability σ and r ISO/IEC17043,预计在2010年发布; reproducibility σRISO13528的发布。该标准经过多年的准备和讨论,于2005年 发布实施。为能力验证提供统计上的支持。ISO/IEC 17011:及时监测 accuracy, σ and σ parameters r R 2004《合格评定-认可机构通用要求》(GB/T27011-2005)ISO/IEC 指南43《利用实验室间比对的能力验证》统计学原理和手段. (GB/T15483,IDT)有力工具之一:ISO13528:2005《利用实验室间比对的能力 验证中的统计方 法》ISO/IEC 17025:2005《检测和校准实验室能力的通用要求》 (GB/T27025-2008) 统计控制图 The control charts 统计控制图 The control chartsISO15189:2003《医学实验室-质量和能力 的专用要求》 8单一样本的测试-II 单一样本的测试-I一定时间内结果稳定性? ----》统计控制建立 CD 值:critical difference图 ?CR=f * σsqrt2 如果试验结果不能提供充足数据建立统计控制图: ? f CR factor depends on the probability level to ? 平行分析次数 be associated with the critical difference and on ? 添加回收、线性关系 the shape of the distribution. 单一样本的测试 - IIIthe repeatability limit r2.8 σ rthe reproducibility limit R2.8 σR For R and r, the probability level is 95% and we assume an approximately normal distribution Under these conditions, f is 1,96 and f sqrt2 is 2,77 we use a rounded value of 2,8. CVr values of accepted CIPAC methods data are compiled from CIPAC Handbooks H-K CV values of accepted CIPAC methods r CV % r CV calculated from r values, extracted from CIPAC volume H-K r 6 5 4 3 2 1 0 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 analysis 9 Control limits? Control limits?What is the within laboratory What is the within laboratory reproducibility SR of the repeatability Sr of the method? method? 1 2 2? xx ? i? i s ? n ?1? The within laboratory reproducibility of the method is the SD of all measurements calculated with eq. 2.5: SR 0.02632Note: Sr ? SR! 两个实验室间对同一样本分析结果的比较: 实验室内部两组结果的比较研究lab. 1 n results giving a mean 1group 1 n results giving a mean of y 1 1 of y 1group 2 n results giving a mean of y 2 2lab. 2 n results giving a mean 2the SD of y -y is: 1 2 of y 2 ?112 σσ ?+? under repeatability conditions, the SD r ?nn12 11 2 22 2 y -y is: σσ+ σ+σ+ σ 1 2 Lr L r nn 1 2and the critical difference for |y -y | at 95% 1 2 probability level is:and the critical difference for |y -y | is: 1 2 1 1 CD+ 28σ 2 1 1 r 2 2nn 2 CD+ 28.σσ 28.1?? 12 Rr 2nn 2 12 方法 A与B的比较研究 Lab 1 Lab 2 R -R 1 2 Method A Method B or reference method 1 0.0266 0.0259 0.0007 Replicate 1 Replicate 2 Average Replicate 1 Replicate 2 Average Difference 0.4500 y 0.9121x + 0.0054 2 0.0256 0.0279 -0.0023 0.4000 2 R 0.9697 87 0.532 0.545 0.5385 0.518 0.524 0.521 0.0175 0.3500 3 0.0710 0.0709 0.0001 0.3000 88 0.52 0.53 0.525 0.538 0.523 0.5305 -0.0055 0.2500 4 0.0334 0.0352 -0.0018 0.2000 89 0.535 0.531 0.533 0.527 0.519 0.523 0.01 0.1500 5 0.0087 0.0062 0.0025 0.1000 90 0.517 0.526 0.5215 0.513 0.531 0.522 -0.0005 0.0500 6 0.0123 0.0118 0.0005 91 0.529 0.523 0.526 0.521 0.528 0.5245 0.0015 0.0000 0.0000 0.1000 0.2000 0.3000 0.4000 0.5000 7 0.0269 0.0249 0.0020 8 0.2810 0.2910 -0.0100 s 0.007447 Average 0.0046 Ara 9 0.3550 0.3800 -0.0250 SD 0.009127 dif 10 0.2610 0.2240 0.0370 t 1.126991 calc 11 0.1030 0.0920 0.0110 t 2.776 crit 12 0.1240 0.1370 -0.0130 13 0.4450 0.3610 0.0840 10测试结果的评价与表达 测试结果的评价与表达 例: 例:分析结果的有效性与表示 分析结果的有效性与表示 σ and σ of the measurement method are known. r R乐果乳油分析 CIPAC E p.69 r 7 g/kg at 463 g/kg a.i. content R 20 g/kg at 463 g/kg a.i. content 18 resultsWe obtain 2 test results: x 451 and x 457 g/kg 1 2 ?|x -x | 6 r, so the final quoted result is 1 2 451 +457/2 454 g/kg. 当测定费时、花费较大时结果的评价 当测定费时、花费较大时结果的评价 例: 例:分析结果的有效性与表示(续) 分析结果的有效性与表示(续)又例 如: x 453 and x 468 g/kg 1 2 ?|x -x | 15 r. We shall obtain 2 further results. 1 2 ?x 460 and x 450 g/kg, 3 4 ?the CR f4 σ0.954 r ? r 2.8σ , σ r/2.8 7/2.8 2.5 g/kg r rf4 3.6, therefore CR 3.6*2.5 9 0.954We calculate x -x 468 -450 18 9 minIn this case the median (中值) of the 4 results is reported as the final quoted result. 450, 453, 460, 468, so x 453 + 460/2 456 g/kg? 如果x -x CR, 则结果应表示为四次测定的平均 min 值。 分析同一样本的重复性考察 分析同一样本的三个部位的考察 RATIO of AS/IS Content Average SD CV 1.12616 39.35703 39.28324 0.10436 0.26565 对同一样本的三个部位分析 结果应符合: 1.12193 39.20945 C-Cmin 3.31*r/2.8 1.10382 38.39576 38.31078 0.12017 0.31366 1.09893 38.22581 1.11266 38.75563 38.59627 0.22537 0.58391 1.10351 38.43691 每两个重复分析间至少满足: C-Cmin: 0.97245 A?Amin?3.64*CV*Xmean 3.31*r/2.8: 1.773214 r1.5 11