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肠杆菌科多重耐药菌KPC酶的筛查.doc.doc

肠杆菌科多重耐药菌KPC酶的筛查.doc

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2017-10-21 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《肠杆菌科多重耐药菌KPC酶的筛查.docdoc》,可适用于考试题库领域

肠杆菌科多重耐药菌KPC酶的筛查doc肠杆菌科多重耐药菌KPC酶的筛查【摘要】目的:对某院肠杆菌科细菌耐碳青霉烯类抗生素的KPC酶情况进行筛查与讨论。方法:对年月至年月期间在我院多个科室临床分离的肠杆菌科细菌株进行药敏试验筛选将筛选出的耐药菌株通过改良后的Hodge实验以及PCR扩增实验来筛查KPC酶情况并对结果进行分析。结果:在检测的株细菌中有株对头孢类抗生素耐药占所有菌株的。同时在这株耐药菌株中共发现株对碳青霉烯类抗生素耐药。对株菌株进行改良后的Hodge实验证明株细菌确实具备耐药性同时经过PCR扩增实验发现株细菌均含有KPC。结论:产KPC型基因的肠杆菌科细菌在我院已经存在应引起本院的高度重视。【关键词】手足口病心肌酶谱全血细胞计数【中图分类号】R【文献标识码】A【文章编号】()我们通过对年月至年月期间在我院多个科室临床分离的肠杆菌科细菌进行KPC酶筛查并对检查结果进行统计分析现将分析结果报告如下。资料与方法一般资料选取我院多个科室临床分离的肠杆菌科细菌株为研究对象。经过药敏试验后发现这些菌株共有株对头孢菌素耐药在对这些耐药菌株进行初步筛选后发现共有株菌株对于碳青霉烯类抗生素耐药。检查方法药敏试验临床标本按《全国临床检验操作规程》(第版)进行接种分离。单个菌落使用VitekCompact进行细菌鉴定、药敏实验及MIC值测定。按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准配合AES高级专家系统进行结果判定和分析修正。质控菌为大肠埃希菌ATCC。改良Hodge实验按照年CLSI标准进行。在生理盐水中准备麦氏标准浊度的大肠埃希菌ATCC(指示菌)用生理盐水稀释倍按常规药敏实验操作规程接种到直径为mm的MH平板晾干min后在平板中央贴上厄他培南药敏纸片(ug)。接种碳青霉烯类抗生素耐药或中介的菌株以大肠埃希菌ATCC作阴性对照。接种时以无菌接种环取在血平板上过夜的待测菌落个从平板边缘向中心划mm长的直线。需氧孵育h后观察结果在划线与抑菌圈交叉处细菌有增强生长的趋势(典型为苹果蒂样生长)为阳性否则为阴性。PCR扩增及测序依照相关文献设计并合成碳青霉烯酶KPC检测引物引物序列见表。扩增条件为:初变性minminminmin个循环后延伸min。扩增阳性产物送往测序公司进行序列测定DNA序列用NCBI网站(wwwncbinlmnihgov)的Blast程序进行比对确定基因型。统计学分析所有数据经SPSS软件处理计量资料以均数标准量(XS)表示采用T检验。P为差异有统计学意义。结果药敏试验结果通过我们的研究发现在检测的株细菌中有株对头孢类抗生素耐药占所有菌株的。同时在这株耐药菌株中共发现株对碳青霉烯类抗生素耐药。改良Hodge实验结果通过我们的研究发现对株菌株进行了划线培养。经过培养后观察株菌株划线与抑菌圈交叉处有增强生长的趋势出现苹果蒂样生长这一结果说明株菌株结果为阳性。PCR扩增及测序结果对株待测菌进行PCR扩增PCR产物在琼脂糖凝胶中电泳均得到KPC目的基因条带。PCR阳性产物经测序Blast程序比对证实均为blaKPC。讨论近些年碳青霉烯类抗生素对于肠杆菌科细菌的治疗在临床上是比较常见的。碳青霉烯类抗生素抗菌谱广、抗菌活性强尤其适用治疗由产ESBLs或AmpC酶细菌所引起的严重感染现已成为治疗革兰阴性多重耐药细菌感染的一线用药。然而随着此种药物的使用广泛度在不断提高已经有大批相关工作者发现肠杆菌科细菌已经对此药物产生了耐药性尤以肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌为代表的肠杆菌科细菌最为明显。近些年已经有文献报道产KPC型碳青霉烯酶为肠杆菌科细菌耐碳青霉烯类抗生素的重要原因。KPC酶是年美国从肺炎克雷伯菌中分离到的一种新型碳青霉烯酶主要为质粒介导属于Ambler分类的A类Bush分类的f组能够水解碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素类和氨曲南等多种抗生素克拉维酸对KPC酶有抑制作用。到目前为止国内外已经在肠杆菌科多个菌属中检测出KPC酶包括:肺炎克雷伯菌、Cubana沙门菌、产酸克雷伯菌、阴沟肠杆菌、阿氏肠杆菌、粘质沙雷菌、奇异变形杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌等。目前国内外研究已发现种KPC亚型其中KPC检出率最高。虽然通过常规诊断方法和一些实验室辅助诊断技术可以对肠杆菌科细菌耐药性进行鉴别分析但是关于该类细菌对碳青霉烯类抗生素耐药性以及对KPC较为全面且准确的筛查技术在临床上还没有很好的办法。近几年已经有很多相关学者把注意力放在改良Hodge实验和PCR扩增技术对于KPC的鉴别筛查工作上并取得了不错的进展。谢宁等人通过对该院分离的肠杆菌科细菌使用药敏试验进行耐药性检测发现其检出率将近所有细菌的一半。同时其还检测出株细菌对碳青霉烯类抗生素耐药性。为了进一步分析该耐药性的可靠性以及是否存在KPC其通过改良后的Hodge实验以及PCR扩增进行筛查结果发现有两株细菌耐药且存在KPC。通过我们的研究可以发现在检测的株细菌中有株对头孢类抗生素耐药占所有菌株的。同时在这株耐药菌株中共发现株对碳青霉烯类抗生素耐药。对株菌株进行改良后的Hodge实验证明株细菌确实具备耐药性同时经过PCR扩增实验发现株细菌均含有KPC。这一结果也与国内其他学者的研究结果相一致说明产KPC型基因的肠杆菌科细菌在我院已经存在应引起本院的高度重视。参考文献冯雅君沈萍杜小幸等产碳青霉烯酶KPC肺炎克雷伯菌局部流行J浙江医学():孙迪迪张亚琴杨雪华株医院感染病原菌分布与耐药性分析J中国感染控制杂志():

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