【doc】老年大鼠血脂、载脂蛋白-胆固醇、过氧化脂质含量及单胺氧化酶活性与还少丹的干预作用

【doc】老年大鼠血脂、载脂蛋白-胆固醇、过氧化脂质含量及单胺氧化酶活性与还少丹的干预作用 老年大鼠血脂、载脂蛋白-胆固醇、过氧化 脂质含量及单胺氧化酶活性与还少丹的干 预作用 中国临床康复第9蕾第用2005—06—2l出版 ChineseJournalofClinicalRehabilitcaionJune212005Vo1.9.23 老年大鼠血脂,载脂蛋白一胆固醇,过氧化脂质含量及 单胺氧化酶活性与还少丹的干预作用 刘群良,张月娟,胡松,谭怪,胡梅,阳力争.张克纯 爿: 55 ? 中医康复研究? 湖南中医学院生物化学教研室,湖南省长沙市410007 通讯作毒:刘群良,女,1952于出圭,.湖南省长沙市人,汉族,1977年湖南中医学院毕 业 ,副教授,主要从事生物衰老与抗衰老机制的研究. qwchen@public.cs.hn.cn 湖南省教育厅资助课题(02C291) 中圈分类号:R541文献标识码:A文章编号:167I一5926(2005)23—0155—03 收稿日期:2005—04—30修稿日期;2005—05—20(0VNZSM/YI) Contentsofbloodlipids,apolipoprotein-cholesterol,lipid peroxidationandtheactivityofmonoamineperoxidasein agingFatsandtheinterventionaleffectofHuanshaodan LiuOun—liang,ZhangYue—juan,HuSong,TanFeng,HuMei,Yang Li-zheng,ZhangKe—chun,DepartmentofBiochemistry,HunanCollege ofTraditionalChineseMedicine,Changsha410007,HunanProvince, China Correspondenceto:LiuQun—liangAssociateprofessor.Departmentof Biochemistry,HunanCollegeofTraditionalChineseMedicine.Chang— sha410007.HunanProvince,Chinaqwchen@public.cs.hn.cn Supportedby:agrantfromHunanDepartmentofEducation,No. 02C29l 30Accepted:2005—05-20 Abstract A蹦:ToinvestigateinfluenceofHuonshaodanwhichconsistsof Chineseherbsoftuberfleeceflowerroot.preparedrehmanniarootand desertlivingcistanche,onthecontentsofbloodlipids,apolipopro—tein— cholesterolandlipidperoxidationandtheactivityofmonoamineperoxi— dase. M眶THODS:Theexperimentwascarriedoutinthelaboratoryof molecularbiology.HunanCollegeofTraditionalChineseMedicinein April2005.Twenty.fourhealthySDagingratswererandomlydivided intocontrolgroup(n:12)andtreatmentgroup(n=12).Ratsinthe treatmentgroupreceivedgastricperfusionofHuanshoodandecoction (consistedofChineseherbsoftuberfleeceflowerroot,prepared rehmanniarootanddesertlivingcistanehe),2mLfcontaining7gcrude drug)perday;Thoseinthecontrolgroupweretreatedwithgastric perfusionofsalineofthesamevolume,5dayseveryweek,andthey drankthedrugfreelyintheother2daysintheweek.theyweread—minis— tratedfor80days,Bloodsamplesweredrawnafterbeingfastedfor12 hours,thecontentsofbloodlipidsandapolipoprotein—cholesterolwerede— tected,theactivityofglutathioneperoxidaseandcontentofmalondialde— hydeinscramweredetermined;Braintissuewastakenouttodetectthe activityofmonoamineoxidase. RESULTS:Twenty-oneagingratswereinvolvedintheanalysisofre—suhs. ?Thecontentoftriglyceridewasobviouslylowerinthetreat—mentgroup thaninthecontrolgroupf(0.97?0.1l1,(1.50?0,931mmol/L,t:l1.98, P<0.0l1.?Thecontentoflowdensitylipoproteincholesterolwasmarked— lylowerinthetreatmentgroupthaninthecontrolgroup[(1.99~0.11),(2,94 :to.12)mmol/L'拄18.68,P<0.01】.?Theactivityofglutathioneperoxidase wasobviouslyhigherinthetreatmentgroupthaninthecontrolgroup 【(37.34~2.00),(31.51~2,33)nkat/L't=6.25,P<0.01】.?111econtentof malondialdehydeinthetreatmentgroupwasmarkedlylowerthanthatin thecontrolgroup『f13.79~1.0I),(I7.70?1.41)nmol/mL,t:5.12,P <0.011.?Theactivi—tyofmonoamineperoxidasewasremarkablylower inthetreatmentgroupthaninthecontro1group『f0.07?o.0I).『0.24 0.02)nkat/拄13.27,P<0.0I1. CoNCLUS10N:(Huanshoodancandecreasetheserumcontentsof trislycerideandtotalcholesterolinrats.andinereasetheratioofhigh densitylipoproteincholesteroltolowdensitylipoproteincholestero1. anditplaysaroleagainstatherosclerosis.?Huanshoodaneffectively improvestheactivityofserumglutathioneperoxidase,inhibitstheac— tivityofmonoamineperoxidaseinthebrainofrats.andplaysitsrole againstaging. L.uQLZhangYJ.HuTanF,HuM,Yang11.,ZhangKCContentso1blood lipids.apolipoprotein-cholesterol,lipidperoxidolionandtheoctivilyo1 monoornineperoxidaseinagingrotsandtheinlervenlionoleffecto1Hu,an. slmodan.ZhongeuoLinchuangKan~u2005:9l23?55—7[China】 刘群良,张月娟,胡松,谭峰,胡梅,阳力争,张克纯.老年大鼠血脂,载脂蛋白一胆固 醇,过氧化脂质含量及单胺氧化酶活性与还少丹的干预作用Ull中国临床康复, 2oo5:9123}:155—71www.zglckfcorn1 摘要 目的:探讨由何首乌,熟地,肉苁蓉等中药组成的还少丹对大鼠血脂,载 脂蛋白一胆固醇,过氧化脂质含量和单胺氧化酶活性的影响. 方法:实验于2005-04在湖南中医学院分子生物学实验室完成.24只健 康SD老年大鼠,随机分为对照组和药物组,每组12只.药物组用还少 丹水煎液(由何首乌,熟地,肉苁蓉等中药组成)灌胃2mLf含生 药7g)/(kg.d),对照组用等量生理盐水灌胃,5d/周,另2d自由饮 水,给药80d.大鼠禁食12h后取血,检测血脂和载脂蛋白一胆固醇的 含量,测定血清谷胱甘肽过氧化物酶活性和丙二醛含量,并取脑组织测 定单胺氧化酶活性. 结果:21只老年大鼠进入结果分析:?_三酰甘油含量:药物组明显低于 对照组[(0.97+0.11,1.50~0.93)mmol/L,(l1.98,P<0.01)1.?低密度 脂蛋白一胆固醇:药物组明显低于对照组【(1.99_-+0.11,2.94?o.121mmoI/L. (t=l8.68,P<0.01)1.?谷胱甘肽过氧化物酶活性:药物组明显高于对 照组[(37.34~2.00,3I.51?2.33)nkat/L,(t=6.25,P<0.0111.?丙二醛含 量:药物组明显低于对照组f(13.79?I.01,I7.70~1.41)nmol/mL,(t : 5.12,Jp<0.0I)】.?单胺氧化酶活性:药物组明显低于对照组 【(0.07~0.01,0.24~0.02)nkat/g,"=13.27,P<0.0111 结论:还少丹能降低大鼠血清中三酰甘油,总胆固醇的含量,提高高 密度脂蛋白胆固醇/低密度脂蛋白胆固醇的比值,起到抗动脉粥样硬化 的效应.?有效地提高大鼠血清谷胱甘肽过氧化物酶活性,抑制大鼠脑 内的单胺过氧化物酶活性,产生抗衰老的作用. 主题词:抗衰老;血脂;丙二醛 O引言 还少丹来自明代《济阳纲目》卷六十四,它是中医 补肾抗衰的重要古方之一.该方具有益精补髓,壮元 阳,却病延年.发白返黑的功效,故有令人"返老还童, 青春常驻"之美名.该方能有效地提高老~F/Jx鼠超氧化 物歧化酶和过氧化氢酶的活性,并能延缓老年小鼠端 粒长度的缩短,从而延长细胞寿命.为了更进一步证实 还少丹的抗衰老作用机制,本文观察了老年大鼠的血 脂,载脂蛋白一胆固醇,谷胱甘肽过氧化物酶活性,单 胺氧化酶活性及丙二醛等检测指标. 1材料和方法 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 :随机x,/照试验. m-J~,:湖南中医学院生物化学教研室. 材料:实验于2005-04湖南中医学院分子生物学实 验室完成.24只健康SD老年大鼠,21月龄,由湖南农业 大学实验动物中心提供(动物合格证号:SCXK(湘)2003— 0003),雌雄各半,雄性大鼠体质重(580.-680)g,雌性大鼠 体质重(430-530)g,清洁级,在温度为l8-29?,湿度为 40%,70%环境下饲养.还少丹水煎液,由何首乌,熟 地,肉苁蓉等中药组成.主要试剂:谷胱甘肽过氧化物 酶,单胺氧化酶和丙二醛的测定试剂由南京建成生物 工程研究所提供.主要仪器:岛津CL一7200自动生化分 析仪由日本岛津生产;UV一9200紫外分光光度计和 VIS一7220可见分光光度计由北京瑞利分析仪器公司 生产. 设计,实施,评估者:实验设计为第一,二作者,实 施为第四,五,六作者,评估为第七作者,均经过相关实 验内容t~,JtI. 方法:动物分组与给药方法24只老年大鼠分为对 照组和药物组,每组12只.药物组用还少丹水煎液灌 156 ISSN167l一5926CN21—1470/RgTII自老年大鼠血脂,载脂蛋白一胆固醇,过氧化 脂质含量及 —.zg~comkf23385083@sino.com拼艮'寻.单胺氧化酶活性与还少丹的干预作用一 胃2mL(含生药7g)/(kg.d),对照组用等量生理盐水灌 胃,灌胃5d/周,另2d自由饮药,给药80d后,大鼠 禁食12h,取血,应用自动生化分析仪检测血脂和载 脂蛋白一胆固醇的含量.参照文献【1】的方法,麻醉状态 下大鼠断头取血,测定血清谷胱甘肽过氧化物酶活性 和丙二醛含量并取脑组织测定单胺氧化酶活性. 主要观察指标:?大鼠血脂变化.?大鼠血清谷 胱甘肽过氧化物酶活性和丙二醛含量的变化.?大鼠 脑组织单胺氧化酶活性的变化. 统计学分析:由第三,四,五作者使用SPSS统计 学软件统计处理,数据以均数?标准差 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 示,组间比较 采用t检验. 2结果 2.1实验动物数量分析:纳人大鼠24只,实验过程 中因灌胃失误对照组死亡1只,药物组死亡2只,进 入结果分析为21只. 2.2还少丹对老年大鼠血脂和载脂蛋白一胆固醇的含 量影响见表1. 表1还少丹对药物组和对照组大鼠血脂,载脂蛋白一胆固醇的影响血) .I?为总胆固醇.TG为三酰甘油,HDL-C为高密度脂蛋白胆固醇,LDL-C为低密 度脂蛋白胆固醇 由表1可见,药物组大鼠三酰甘油,总胆固醇,低 密度脂蛋白胆固醇均显着低于对照组大鼠,高密度脂 蛋白胆固醇组间虽无显着性差异,但高密度脂蛋白胆 固醇/总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇/低密度脂蛋 白胆固醇的比值显着高于对照组大鼠,表明还少丹具 有降低血脂,提高高密度脂蛋白胆固醇/低密度脂蛋 白胆固醇比值的作用. 2.3还少丹对老年大鼠谷胱甘肽过氧化物酶活性,单 胺氧化酶活性和丙二醛含量的影响结果见表2. 表2还少丹对药物组和对照组大鼠谷胱甘肽过氧化物酶活性,单胺 氧化酶活性和丙二醛含量比较) 由表2可见,药物组大鼠谷胱甘肽过氧化物酶活 性显着高于对照组大鼠,而丙二醛含量和单胺氧化酶 活性显着低于对照组大鼠,表明还少丹具有清除自由 基,拮抗活性氧,降低脑内单胺氧化酶活性的作用. 3讨论 老年人心,脑血管疾病的发病率较高,而动脉粥 样硬化是心,脑血管疾病的病理基础.一般认为动脉 粥样硬化是由于脂类代谢紊乱,血浆胆固醇含量过多, 沉积在动脉血管内膜上,形成粥样斑块,导致血管狭 窄,甚至阻塞,从而影响受累器官的血液供应.因此.血 浆胆固醇的含量增加,是动脉粥样硬化和心血管疾病 的危险因素;另一方面,细胞代谢过程中不断产生自由 基,自由基可形成过氧化脂质,而过氧化脂质对小动脉 发生损伤作用,可引起动脉纤维性变,从而导致动脉粥 样硬化及心血管疾病.因此在抗动脉粥样硬化方面,主 要是调节脂类代谢和抗自由基损害.从中医中药的角 度来看,众多的学者对它进行了广泛的研究,安红梅等 认为肾虚者具有患脑动脉硬化症的危险性,这与Il缶床 上年老肾衰者脑动脉硬化症发病增加的情况一致.郑 源庞[21等用补肾护脉胶囊改善动脉粥样硬化患者自觉 症状有效率为70%.张保亭论述补肾中药可能是通 过降低血脂,减轻氧自由基,过氧化脂质等对血管内皮 细胞的损伤作用,其机制与刘春生在《选药 指南 验证指南下载验证指南下载验证指南下载星度指南下载审查指南PDF 》中记 载的"延缓衰老中药一何首乌具有调节血脂,抗动脉粥 样硬化等作用"是相同的.另外,对载脂蛋白临床检测 指标的分析,由于低密度脂蛋白胆固醇有致动脉粥样 硬化的作用,高密度脂蛋白则有抗动脉粥样硬化作用, 因而动脉粥样硬化(或冠心病)的发病倾向,取决于高 密度脂蛋白/低密度脂蛋白比值,高密度脂蛋白/低密 度脂蛋白称为冠心病指数[6].因此,低密度脂蛋白是动 脉粥样硬化的危险因素.本实验结果表明,还少丹具有 降低三酰甘油,总胆固醇的作用,高密度脂蛋白一胆固 醇组间虽然无显着性意义,但该方能明显降低低密度 脂蛋白一胆固醇的含量,提高抗动脉粥样硬化关键指 标高密度脂蛋白一胆固醇/低密度脂蛋白一胆固醇比值 的作用.综合以上分析,本实验结果与补肾中药具有降 低血脂,抗动脉粥样硬化的作用是一致的,0Z--~)A补肾 角度治疗动脉粥样硬化患者的机制是相吻合的. 衰老变化是生命活动过程中的必然规律,生命活 动过程中不断产生自由基和活性氧,二者不断损害生 物细胞,因此,自由基和活性氧的损害导致衰老是人们 公认的衰老机制之一.Wickenst41论述了自由基与衰老 的相关研究,魏朝良[51等认为很多疾病(如老年痴呆症) 发生的主要原因之一是自由基过多.张文纪[6】报道随 着年龄增加,体内抗氧化剂减少,防护功能下降,自由基 累积性损伤增加,致使机体衰老.有关自由基和活性氧 损害生物细胞的机制,主要表现在它们损伤生物大分 子如核酸,蛋白质等,造成其结构改变和功能丧失,如 自由基引起DNA变性,使遗传信息的传递受阻,导致 蛋白质合成障碍,从而引起老年人记忆下降,肌肉萎缩 等症;自由基引起蛋白质变性,使酶蛋白丧失催化活 性,引起老年人物质代谢异常;自由基可产生过氧化脂 质,过氧化脂质的代谢产物丙二醛可与蛋白质,磷脂发 生反应,形成脂褐素,脂褐素沉积在脑组织,导致脑功 能障碍,可引起老年人精神不正常;自由基可与生物膜 中的不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应,从而影响生 物膜的结构和细胞代谢功能.另一方面,活性氧也损害 生物膜,如生命代谢过程中产生活性氧H:O:,它也能 氧化生物膜中的不饱和脂肪酸形成过氧化脂质,造成 生物膜损害.因为丙二醛是过氧化脂质的代谢产物,以 ????f}f ISSN1671-5926CN21—1470/Rt中国临床康复2005年6月21日第9卷第23期 上两个方面都证明了机体脂质过氧化形成越多,生成 的丙二醛也就越多,而老龄动物清除自由基和拮抗活 性氧能力下降,必然导致丙二醛的生成增加.所以,丙 二醛被认作为老化产物指标. 综上所述,自由基和活性氧损害导致衰老.怎样 清除自由基,抑制活性氧的损害,延缓衰老的进程呢? Candm的研究结果表明了谷胱甘肽过氧化物酶是反应 机体抗氧化能力的重要指标之一.在中药抗衰方面, 很多研究已经证实补肾抗衰中药具有抑制自由基的 产生,抗活性氧的损害,有效地保护了生物大分子(核 酸,蛋白质,脂类)的稳定性,从而达到延续衰老,减少 老年病发生的作用.如池明宇1等用实验证明了中草 药中含有丰富的自由基清除剂成分.林~]lJ[91等从山药 的研究结果,证明了山药能明显降低老龄小鼠血浆过 氧化脂质和肝脏脂褐素的含量,提示山药具有抗衰老 作用.李石蓝?等研究的抗衰I,?号方对高龄鼠的抗 衰老实验,结果发现抗衰中药对自由基和脂褐素的生 成均有良好抑制作用,并提示抗衰中药尚可防治心脑 血管疾病.本实验结果表明,还少丹能提高谷胱甘肽 过氧化物酶活性,降低丙二醛含量.这一结果与前述 张保亭论述补肾中药抗动脉粥样硬化的作用,是通过 降低血脂,减轻氧自由基,过氧化脂质等对血管内皮 细胞的损伤是一致的.这一结果也说明还少丹通过抗 自由基和抗活性氧的机制,降低了丙二醛的生成,起 到延续衰老的作用. 衰老与脑组织内单胺氧化酶活性有关H1,单胺氧 化酶能催化神经内单胺类神经递质(JL茶酚胺)的分 解,使脑内单胺类神经递质减少,从而导致衰老.有人 报道老年大鼠脑组织中的单胺类神经递质比青年大 鼠明显降低,说明了老年大鼠脑组织中单胺氧化酶活 性比青年大鼠高.所以,众多学者把单胺氧化酶活性 认作衰老指标之一.安媛【l2等论述帕金森病主要是脑 内多巴胺含量减少所致,常见于老年人.以上事实证 明,衰老者单胺氧化酶活性增加.是否可以通过抑制 单胺氧化酶活性延续脑细胞衰老呢?许多研究证实了 这一理论,如古力努尔?木特列夫等实验证明,松果 菊普通过抑制单胺氧化酶活性,从而提高了小鼠的记 忆力.本实验还少丹能有效地抑制老年大鼠脑内的单 胺氧化酶活性,提示该方具有延续脑衰老的作用. 157 祖国医学认为,衰老与肾虚密切相关.《黄帝内经 素问?上古天真论》记载"肾藏衰",即现代医学认为衰 老是生命过程的客观规律.能否延缓衰老,则有"却老 而全形,身年虽寿,能生子也"的记载;也有"服食丹药, 年寿近百,形似壮年"的记载,这些都说明了延缓衰老, 可推迟天癸衰竭之期.怎样延缓衰老?祖国医学以补 肾为主,又有"脾为后天之本,气血生化之源"的主张. 所以,补肾健脾是历代医家养生防老,祛病延年的根本 方法.根据中医理论,研究中医古方还少丹,方中制首 -- %补肝肾,肉苁蓉,菟丝子补肾阳,熟地补肾阴,兼以人 参,山药健脾益气.所以,该方是以补肾壮元阳为主,兼 以健脾益气,调节阴阳气血的补肾抗衰方.现代研究认 为,延续细胞的衰老,必须保持生物膜的完整性,保护 细胞内的蛋白质,核酸等生物大分子,有利于发挥它们 的正常功能,才能有益于老年人告别疾病,延年不老. 这一目标的实现,可以通过中医补肾抗衰,脾运化水谷 精微来完成.从以上实验证实了中医的补肾抗衰和现 代抗衰的相关性,还少丹能有效地清除细胞内的自由 基,抑制活性氧,减少二者对细胞的损害,维持细胞的 正常功能;能抑制脑组织内单胺过氧化酶活性,保持儿 茶酚胺的正常含量,维持神经组织的正常功能;能提高 高密度脂蛋白一胆固醇/低密度脂蛋白一胆固醇的比 值,具有防治动脉粥样硬化的作用.所以,还少丹的补 肾抗衰可能是通过上述机制实现的,为中医古方抗衰 老提供了现代科学论证. 4参考文献 1陈奇,邓文龙,张进玮,等.中药药理研究方法[MI.北京:人民卫生出版社, 1993:940—64 2郑源庞,周振鹤,龚康敏,等.补肾护脉胶囊对动脉粥样硬化相关因素影响 的临床研究m.中国中医药科技,2000,7(5):279-80 3张保亭.抗动脉粥样硬化中药的研究进展【J1.中国中西医结合杂志,2003, 23(5):394—8 4WiekensAP.Ageingandthefreeradicaltheory.Respirphial2001; 128(3):379—91 5魏朝良,于德红,安利佳.黄酮类化合物及清除自由基机制的探讨m.中成 药.2005,27(2):239-41 6张文纪.衰老与抗衰老的现代认识【J].高等函授(自然科学版),2002, 15(61:l—6 7CandF.VerdettiJ.Suproxidedismutase,glutathioneperoxidase.eatalase andlipidperoxidationinthemajorargansoftheagingrats.FreeRadic BiolMed1989;7(1):59—63 8池明宇,张澄渡,郑贵元,等.分光光度法测定中药的自由基清除剂m.中 国医药,2003,18(9):567—8 9林刚.胡泗才,荣先恒,等.山药及盾叶薯蓣对家蚕寿命和小鼠LPO,LF的影 响【J].南昌大学,2002,26(4):363—6 10李石蓝,郭惠玲,侯建平,等.补血中药抗衰老实验研究m.陕西中医学院学 报,2005,28(1):24—8 l1AlperG,GirginFK.OzgonulM,et.MAOinhibitorsandoxidantstress : 要摩n孙tissue卷13古力努尔' 木特列夫,雷丽,屠鹏飞,等.松果菊苷抗衰老作用机理研究m.生 物物理,2004,20(3):183—7