血皮槭的愈伤组织培养研究

血皮槭的愈伤组织培养研究 血皮槭的愈伤组织培养研究 ? 生物技术?北方园艺2olo(8):170,172 血皮槭的愈伤组织培养研究 陈丽,李冰,王梅,牛小沛 (济源市农业科学研究所,河南济源454650) 摘要:对血皮槭的营养器官嫩茎,叶和叶柄进行了愈伤组织的诱导研究.结果表明:各外 植体中诱导愈伤组织的难易程度为嫩茎>叶柄>叶;2,4-D比NAA更有利于愈伤组织的形成, 诱导血皮槭产生愈伤组织的最佳培养基配方:改良MS+6一BA1.8mg/I+2,4-D0.8mg/L+0.6 g/L活性炭,诱导率为80;继代增殖培养基的配方:改良MS+6一BA3.0rag/L十2,4-D2.0mg/ L+0.6g/I活性炭,增殖系数可达3.0. 关键词:血皮槭;外植体;组织培养;愈伤组织 中图分类号:S792.35文献标识码:A文章编号:1001--0009(2O10)O8一O17O一03 血皮槭(Acergriseum)为槭树科槭树属,原产中国, 国家二级保护树种.在北至新疆中部,内蒙古和辽宁南 部,南至苏州,安徽,湖北北部区域内生长良好,适应粘 土,碱性土等,湿润,排水良好的土壤最宜其生长.树高 和冠幅均可达6,9m,树冠呈圆形,树皮红棕色,自然卷 曲,鳞片状斑驳脱落.生长速度慢,每年生长10, 15CII'I.特别适合小型造景的需要_】],可以种植在庭园 中,孤植或群栽于灌木丛中,能显示出极高的园林观赏 价值.血皮槭播种或扦插繁殖,繁殖速度较慢.利用组 织培养技术可加快其繁殖速度,不仅为市场提供大量苗 木,又能保持性状的优良性和一致性,增加该品种的观 赏效果.目前仅有关于复叶槭的愈伤组织研究报 道口],未见血皮槭组培研究的相关报道,因此进行该项 研究. 1材料与方法 1.1试验材料 供试外植体材料取自河南省济源市原始森林. 1.2试验方法 1.2.1不同时间的选择为了减少血皮槭在培养过程 中出现的褐化问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ,分别在4月底,6月和8月进行不同 外植体的采摘. 1.Z.2外植体的处理选用la生的无病虫害的枝条 带叶流水冲洗5min,用洗洁净水冲洗数次,在无菌操作 下用75酒精消毒30S无菌水冲洗1次一O.1氯 化汞灭菌18rnin(添加吐温并不停的摇动)--一无菌水冲 洗8次,进行材料的表面灭菌.然后将幼叶用无菌滤纸 吸干水分,分别将嫩茎,叶柄剪成0.5cm左右的小段作 第一作者简介:陈丽(1983一),女,本科,助理研究员,研究方向为生 物组织培养. 收稿日期:2009--12—18 170 为外植体,以备接种. 1.2.3培养基的选择试验设计了以改良MS为基础, 添加不同激素水平的诱导愈伤组织培养基(见表1),蔗 糖25,琼脂0.5,pH6.0,每个配方中不同外植体各 接种8瓶.接种后暗培养2d后转入光培养,培养温度 为(25?2)?,光照2500Ix,光照时问12h/d,每天观察, 发现污染及时取出.10d后计算每瓶中愈伤组织的生 长情况. 2结果与 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 2.1不同时间的选择对血皮槭褐化及分化的影响 为了减少血皮槭在培养过程中出现的褐化问题,分 别在4月底,6月和8月进行不同外植体的采摘.结果 表明,在6月份采的外植体分化能力强,褐化少;为了减 少污染率分别选择在10:O0,13:O0,17:O0进行采摘,结 果表明在13:OO采摘的污染率最底. 2.2不同外植体的选择对血皮槭愈伤组织诱导的影响 为了确定诱导血皮槭愈伤组织的最适外植体,分别 以叶柄,叶片和幼嫩的茎段为培养物,采用改良的MS+ 6-BA2.0rag/I+2,4一D1.5mg/I为诱导培养基进行预 备实验.结果表明:各个部位的愈伤组织诱导以幼嫩茎 段最高,为40;叶柄(带0.1cm的叶)次之,为3O;叶 片最低,为15.所以外植体诱导和愈伤组织的难易程 度为幼嫩茎段>叶柄(带0.1cm的叶)>叶片. 2.3不同元素配比对愈伤组织诱导的影响 在确定了合适的外植体后,需选择合适的激素配 比,找出形成愈伤组织的最适培养基.以幼嫩茎段为外 植体,以改良的MS+6一BA2.0mg/I+2,4一D1.5mg/L 为对照,分别以改良MS和为基础培养基,设计了 6一BA,2.4一D2种激素问,3水平试验,结果如表1,表2. 北方园艺2010(8):170,172?生物技术? 表1以改良的MS为培养基不同激素 配比对茎段愈伤组织的诱导情况 试验中注意观察,如果在接种后2d,接种外植体培 养基上出现黑红色,是褐化的原因,应及时转出来,防止 褐化死亡.在所接的嫩茎中,生长10d就可以看出,幼 嫩茎段在和培养基接触的表面,侧芽不生长,叶柄脱落, 茎变粗裂开变绿形成愈伤.正常的愈伤组织生长时是 黄绿色较为紧密的结构,这种愈伤组织分生能力强,芽 点较多;而深绿色的愈伤太硬不容易分化,最后也容易 转变成浅黄色而死亡;浅黄色的愈伤组织不分化不成 块,在培养过程中逐渐玻璃化死亡. 表2以B5培养基不同激素配比对茎段 愈伤组织的诱导情况 2.4血皮槭愈伤组织的继代培养 表3表明:改良MS+6-BA3.0me/L+2,4-D2.0rag/ L+0.6g/L活性炭,增殖系数可达3.0为最高.在相同 的浓度下,单独加2,4一D的比加2,4,D和NAA的增殖 率高. 表3血皮槭愈伤组织的继代培情况 继代培养基用于继代的愈继代以后成活组织增殖 3结论与讨论 3.1结论 从试验结果中可以得出:(1)血皮槭外植体诱导愈 伤组织的难易程度为幼嫩茎段>nf柄(带0.1cm的叶) >叶片.(2)2,4-D比NAA更有利于血皮槭愈伤组织的 形成,诱导愈伤组织的最佳培养基配方:改良MS+6一BA 1.8mg/L+2,4一D0.8mg/I+0.6g/I活性炭,愈伤组 织诱导率为8O;(3)最佳继代增殖培养基的配方:改良 MS+6一BA3.0mg/L+2,4-D2.0mg/L+0.6g/i活性 炭,增殖系数可达3.O;(4)在外植体的采摘方面血皮槭 在刚生长10d左右,带有1个顶芽和1个茎段的生成愈 伤的速度最快,褐化最少. 3.2讨论 血皮槭种子繁殖成活率底,繁殖速度慢,利用组织 培养技术可以在短时间内得到大量的整齐的,优质的小 苗,且不受外界条件的限制.虽然该试验在血皮械的愈 伤组织诱导上取得了一定的突破,但是如何令愈伤组织 在短时间内有较大的增殖系数和诱导不定芽的问题还 有待进一步研究. 在植物组织培养过程中,外植体的褐化也是导致培 养失败的主要原因.从试验来看不同月份采摘的外植 体褐化程度不同,主要是材料本身的生理状态不同.张 妙霞等测定分析吧柿的休眠芽和嫩枝茎尖在离体培养 过程中的多酚氧化酶活性,显示嫩芽茎尖的多酚氧化酶 活性显着高于休眠芽,说明嫩枝茎尖为外植体进行培养 时易褐化死亡的主要原因是多酚氧化酶活性太高]. 6月份采摘试材的嫩茎容易诱导出愈伤组织,这可 能与该部位的细胞相对生命力比较强,存在着居间分生 组织,细胞年青化有关系_7].6月份时,血皮槭茎段已半 木质化,多酚氧化酶已经降低,同时形成的腋芽较为饱 满,接种后芽易萌化].根据细胞的全能性学说,所有 的活细胞都可以脱分化,但是在实践中,幼嫩生命力强 的分生组织,包括居间分生组织比较容易诱导出愈伤, 而较老的组织则较难诱导愈伤. 参考文献 [1]曹小勇.槭树科槭属植物形态学研究口].汉中师范学院,2000, 18(2):69—72. 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[7]谭文澄.观赏植物组织培养技术rM].北京:中国林,I出版社,2001. 171 ? 生物技术?北方园艺2010(8):172,175 不同激素配比对牡丹愈伤组织诱导及生化指标的影响 贾小平,孔祥生,李海刚,孙晓旭,王 (河南科技大学农学院,河南洛阳,171003) 磊 摘要:以牡丹组培苗叶片,叶柄为外植体,设计5个不同激素水平的诱导培养基,在愈伤组 织形成过程中对所需激素水平,生化指标变化规律进行研究.结果表明:叶片,叶柄愈伤组织诱 导的最适培养基均为MS+6一BA2mg/L+NAA0.5rag/I.在6一BA浓度一定下,叶柄愈伤组织 诱导率随NAA浓度的升高而增高,褐化率随NAA浓度升高而下降;叶片愈伤组织诱导率及褐化 率与NAA浓度无明显关联.外植体在不同培养基上愈伤组织诱导过程中可溶性糖,可溶性蛋 白,SOD,P()I)4个生化指标随时间变化规律各不相同. 关键词:牡丹;愈伤组织;激素水平;生化指标 中图分类号:S685.11文献标识码:A文章编号:1001--0009(2010)080172--04 牡丹是世界着名的观赏花卉之一.因其栽培品种 繁多,适宜温室周年栽培,所以在我国花卉市场占有重 要地位.近年来我国牡丹的栽培面积越来越大,随之而 来的是如何提高牡丹的人工培养成活率.传统的繁殖 方法生产周期长,生产成本高,同时易导致牡丹感染病 毒,种性下降.为了实现牡丹种植的规模化,工厂化,降 低生产成本,组织培养是一项有效的途径. 目前关于牡丹的组织培养研究的报道较多,如腋芽 离体快繁,愈伤组织诱导,植株再生,胚培养等,并取得 一 定进展,但还没有关于牡丹组培过程中内在生理,生 化变化规律方面的报道.植物组织培养的过程可以看 作是一系列基因在时间和空间上顺序表达的过程,蛋 白,酶类等都是基因表达的产物.因此了解植物组织培 养过程中生理生化变化规律可以深入认识植物愈伤组 第一作者简介:贾小平(1973一),男,博士,副教授,现从事植物组织 培养教学工作. 收稿日期:2()()9—1O一28 织形成及植株再生的内在生化基础,为从分子水平揭示 愈伤组织的形成,植株再生机理提供前提条件.该研究 以'凤丹白'的组培苗叶片,叶柄为外植体,比较了二者 愈伤组织诱导所需的激素组合及该过程中可溶性糖,可 溶性蛋白,SOD活性,POD活性4个生化指标的变化规 律,为从分子水平揭示牡丹愈伤组织形成机理奠定基 础. 1材料与方法 1.1试验材料 牡丹栽培品种'凤丹白'的组培苗叶片,叶柄为外植 体材料. 1.2试验方法 1.2.1愈伤组织诱导培养基配制方法配制5个激素 浓度组合的诱导培养基:?MS+6一BA2nlg/L十NAA 0.05rag/I;?MS+6一BA2rag/I+NAA0.1rag/L;? MS十6一BA2mg/Lq-NAA0.2mg/I;?MS+6一BA 2mg/L+NAA0.3mg/I;?MS+6一BA2mg/L+NA_A 0.5mg/L.上述诱导培养基中蔗糖浓度为30g/L,琼脂 ResearchontheTissueCultureofAcergriseum CHENLi,LIHjng,WANGMei,NIUXiao-pei (JiyuanAcademyofAgricultureScience,Jiyuan,Henan454650) Abstract:Inthisexperiment,variousexplants-tendershoots,leavesandstalkderivedfromtheAcergriseumhadbeen usedtoinducethecallus.Theresultsshowedthatforinducingthecallus,theoptimizedtissueweretheegmentsoften— dershoots,secondlyweretheleavesstalks.finallytheleaves;theoptimumforumforinducingcalluswasimproveMS+ 6BA1.8rng/L+2,4一 D0.8mg/I+O.6g/Icharcoal,forsubculture80;forsubculture,improvingMS+6BA3.0mg/ L+2,4一D2.0mg/I+0.6g~Lcharcoalcouldincreasethepropagationalcoefficientby3.0. Keywords:Acergriseum(Franch.)Pax;explants;tissueculture;callus 172