脐血树突状细胞介导的食管癌疫苗抗肿瘤免疫预防实验研究

脐血树突状细胞介导的食管癌疫苗抗肿瘤免疫预防实验研究 脐血树突状细胞介导的食管癌疫苗抗肿瘤 免疫预防实验研究 广东医学20O6年1月第27卷第1期 脐血树突状细胞介导的食管癌疫苗抗肿瘤 免疫预防实验研究* 郭光华俞晶谢丽华陈素钻张娟罗丽莉苏中静董红梅徐虹吴利标 汕头大学医学院第一附属医院消化内科(广东汕头515041) ? 19? 基础f究i 【摘要】目的用杂交瘤技术制备脐血树突状细胞(Dc)和食管癌细胞的融合疫苗,观察其在体内诱导抗肿 瘤免疫反应.方法分离脐血CD34干细胞并诱导扩增为成熟I)C,并与EC109细胞经聚乙二醇(PEG)法融合;免 疫磁珠法筛选EC109一Dc;重建SCID小鼠免疫功能;体内保护抗肿瘤免疫保护实验.结果?融合疫苗可体外生 长,形状以不规则形为主,核仁大,细胞边缘可见突起;?重建SCID小鼠免疫功能实验中PBL组均检测到人IgC的 存在,与PBS组相比较有显着意义(P<O.05);?在免疫保护中,经融合瘤苗免疫的小鼠,肿瘤潜伏期较对照组明 显延长(P<O.05),肿瘤大小和肿瘤重量均明显小于对照组(P<0.05).结论?重建sCII)小鼠免疫功能实验中 PBL组均检测到人IgC的存在,提示免疫重建成功;?融合瘤苗对EC109细胞的攻击有明显的抵抗作用. 【关键词】树突状细胞食管癌细胞细胞融合免疫保护 Inductionofantlerh'nm~oprevenfiveeffect.mIIliceby12anl2~r~aednepreparellbyf_u0Ilo fes~tmgeal12~onla cellIine,vitlldendriticcellderivedfromcordbloodC,UOGuaag-hua,YU,lg,X/EL/-hua,et.Departmento/G?一 troenterology,TheFirstalN~edHospitalShantouMedicalCollege,Shantou515041,China 【A~tr-ad】 ObjectiveTodevelopfusionvaccineofesophagealcarcinomacellandDC,andtostudyitsprotectiveeffect againstEC109cel1.MethodsFusionvaccineWagproducedbytraditionalPEGfusing,cytoldneinducing,CD34magneticmi— cr&eadmarkersortingandNACS.Irnlnllnem~sponsesofSCII)wagestabishedbyhumanPBL.Forstudyingtheprotectiveeffect 0fthefusionvaccineagainsttumorEC109,20SCIDmicesweredMdedintoP,E,DandE1)subgroups,immunizedbyPBS, inactivatedEC109,DCandthefusionVaccinerespectively,andwereattackedbyEC109cel1.Thetulnorsize,weight,mouse survivalperiodandtllmor]atentperiodwererecordedandanalyzed.Pathologywagalsoapp~edtostudytheprotectiveeffectofthe fusionvaccineagainstEC109cel1.Results?TheEC109一 DCcouldproliferateslowlyinvitro.?Intheexperimentofim— mllnerecorlstl~lsetion,theexistenceofhumanIgCwagdeteetedinthePBLgroup,signifieaatlydifferentfromPBSgroup(P< O.o5).? Intheimmunegroup,]atentperiodwaslongerinEDsubgroupthanothers.Tumorsizeandtumorweightwerealso smallerin功subgroup.Cond~? TheexistenceofhumanIgCinthePBLgroupsuggeststhatimmunityissuccessfullyre? constructed.?ThefusionvaccinehasprotectiveeffectagainsttumorEC109. 【Keywords】DendriticcellsEsophagealcarcinomacellCellfusionIrnlnllneprotection 树突状细胞(dendriticcell,DC)是目前已知的专职 且功能最为强大的抗原递呈细胞(APe),也是目前所 知唯一能激活初始型T细胞的APe,在启动,调控和维 持机体免疫应答中发挥重要作用_1J.研究 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,抗原 致敏的DC在体内外实验中均表现出良好的抗肿瘤效 应_2.3J.本实验室前期工作已对来源广泛且}?限制 性要求较低的人脐血DC与食管癌细胞融合制备杂交 瘤苗进行了初步研究,了解融合瘤苗的某些生物学特 性L4J.本研究在此工作的基础上,进行了体内抗食管 癌保护性免疫反应的研究,以期为食管癌的主动免疫 防治的临床研究提供有价值的资料. 1材料与方法 1.1肿瘤细胞EC109细胞,汕头大学医学院病理教 研室惠赠. *广东省自然科学基金资助项目(编号:021228) 1.2脐血Dc的体外诱导按本实验室常规_4J. 1.3食管癌Dc瘤苗的制备按本实验室常规_4J. 1.4动物体内抗肿瘤免疫预防实验 购自中山大 1.4.1动物准备SCID小鼠,68周龄, 学中山医学院动物实验中心,按三级动物要求,饲养在 汕头大学医学院肿瘤医院肿瘤研究实验室无特定病原 体环境中,所用食料,饮水,笼具及垫料均经高压灭菌. 实验前生物素一亲和素夹心ELISA法进行SCID小鼠 "渗漏"的筛选,小鼠血清I<1rL者为非"渗漏" 型,共筛选30只合格老鼠供实验用. 1.4.2重建SCID小鼠免疫功能进行疫苗抗肿瘤免疫 应答实验 1.4.2.1人外周血淋巴细胞(PBL)腹腔注射重建人免 疫系统无菌取正常健康人的肝素抗凝静脉血 100ml.常规方法分离淋巴细胞,调整细胞浓度,10% FCSRPMI1640培养液中,37?,5%C()',饱湿条件下培 养;取处于对数生长期的淋巴细胞,调整细胞浓度为1 广东医学2OO6年1月第27卷第塑 之,P组的成瘤时间最快;肿瘤大小和重量以ED组最 小,最轻,D组次之,P组最大,最重.表明融合瘤苗抵 抗EC109食管癌细胞攻击的主动免疫保护作用最强, 单用DC则次之.本实验采用细胞融合技术,将高表达 MHC,共刺激和黏附分子并产生IL一12的DC,与缺乏 信息分子的肿瘤细胞建立融合细胞,形成EC109一DC 食管癌细胞嵌合体,改变了肿瘤细胞的生物学特性,回 输体内,使DC负载所有EC109食管癌细胞抗原信息, 同时融合细胞又保留了DC的MHC分子和共刺激分子 等,EC109一DC融合瘤苗通过MHC—I类和MHC一1I 类途径激活CD4,CD8T细胞,并分泌相应的细胞因 子,进而激活抗肿瘤免疫应答,从而更有效持久地诱导 特异性抗肿瘤免疫反应.融合瘤苗不仅显着刺激初始 型(naive)T细胞增殖,同时它激活的肿瘤特异性T细 胞具有记忆性,记忆型T细胞可在再次接触抗原的情 况下,大量活化扩增. 此外,融合瘤苗还参与非特异性免疫.融合了肿 瘤细胞的DC分泌多种细胞因子,包括如IL一1,IL一6, IL一8,IL一12,TNF—a,IFN—a及GM—CSF等.其中IL 一 6通过激活补体MBL途径而溶解肿瘤细胞;IFN—a 等能直接激活NK细胞,当NK细胞被活化后,在趋化 因子作用下迁移至肿瘤灶,其不需抗原致敏即可直接 杀伤敏感的肿瘤细胞,NK识别是不受MHC限制的. 未活化的巨噬细胞对肿瘤细胞无杀伤作用,炎症或其 他因子的刺激下,在T细胞分泌的淋巴因子和干扰素 的刺激下,巨噬细胞得到活化,活化的巨噬细胞作为效 ? 21? 应细胞产生非特异性杀伤和抑制肿瘤作用,它可产生 多种杀伤靶细胞的效应因子,其中包括:超氧化物,一 氧化氮,TNF及溶酶体产物等.巨噬细胞还可通过 ADCC途径杀伤靶细胞.本实验中融合瘤苗的抗肿瘤 作用,很可能是特异性免疫与非特异性免疫共同作用 的结果. 本实验提示,重建SCID小鼠免疫功能实验中PBL 组均检测到人IgC的存在,表明免疫重建成功;融合瘤 苗对EC109细胞的攻击有明显的抵抗作用,提示DC类 瘤苗有望成为恶性肿瘤免疫预防的有用工具. 参考文献 [1]TROMBETI'AES,EGERSOLDM,GARREITw,eta1.Activationof lysosomalfundSonduringdendriticcellmaturation[J].Science,2003, 299:1400—1403. 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(收稿El期:2005—11—17编辑:庄晓文) 地瓜米中毒2例 廖寒林 广东省广州市中医医院儿科(510130) 例1,患儿,男,3岁8个月,因"误 食地瓜米2h,昏迷0.5h''来诊.2h前 患儿误食地瓜米8粒后,出现头晕,呕 吐胃内容物3次,0.5h前突发昏迷,伴 有口唇发绀,呼吸困难.入院时查体 T:36.2~C,R:42次/min,P:130次/min, BP:lO/8kPa,浅昏迷状,给氧状态下唇 周稍紫绀,双侧瞳孔约3ITIITI,对光反射 存在,轻度三凹征,双肺呼吸音稍粗糙, 未闻及干湿性I罗音,心音正常,律齐,腹 稍隆起,软,肝脾肋下未扪及,叩诊鼓 音,肠呜音弱,四肢肌张力减低,肌力约 1级,角膜反射存在,腹壁反射,提睾反 射未引出,腱反射弱,病理反射未引出, 无脑膜刺激征.实验室检查示:血气分 析及血电解质正常,血糖正常.给予鼻 导管给氧,洗胃(洗胃过程发现地瓜 米),纳络酮,新斯的明及利尿等处理,2 h后患儿神志转清,呼吸平稳,肠呜音 正常,肌力恢复正常,神经系统检查无 阳性体征,病情渐趋平稳,无反复,3d 后痊愈出院. 例2,患儿,女,6岁,因"误食地瓜 米2h,头晕乏力1h''来诊,2h前误食 地瓜米6粒,1h前出现头晕,四肢乏 力.入院时查体:T:36.7~C,R:25次/ rain,P:94次/min,BP:11/8kPa,神经清 楚,反应正常,双侧瞳孔约3ITIITI,对光 反射存在,双肺呼吸音清,心音正常,腹 无异常,四肢肌力正常,生理反射存在, 病理反射未引出.实验室检查示:血气 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 ,血电解质,血糖正常.给予洗胃 (洗胃过程发现地瓜米),纳络酮,补液 等处理后无头晕乏力,病情稳定1d后 出院. 讨论地瓜俗称沙葛,葛瓜,豆薯, 地萝卜等,其种籽(地瓜米)外形类似黄 豆,昧稍甜,易被儿童误食.地瓜米含 有鱼藤酮,豆薯酮,薯素等毒素,主要侵 害神经系统,严重者可出现中枢性呼吸 衰竭,目前无特效解毒药.纳络酮为阿 片受体阻滞剂,同时还能清除体内因中 毒,缺氧所产生的氧自由基,能有效对 抗昏迷,休克,呼吸抑制等症状;新斯的 明为抗胆碱脂酶,能直接作用于神经肌 肉接头处突触后膜后的乙酰胆碱受体, 使乙酰胆碱酯酶活性受抑,从而致胆碱 能神经末梢释放的乙酰胆碱堆积,产生 拟胆碱作用,能有效对抗四肢乏力,呼 吸肌及胃肠麻痹等症状.地瓜米中毒, 临床较少见,但由于其起病急,临床表 现轻重不一,且家属往往不能提供确切 病史,故需要医生详细询问和对本病有 一 定认识,才能作出正确的诊断和采取 及时的救治 措施 《全国民用建筑工程设计技术措施》规划•建筑•景观全国民用建筑工程设计技术措施》规划•建筑•景观软件质量保证措施下载工地伤害及预防措施下载关于贯彻落实的具体措施 . (收稿日期:2005—09—26编辑:庄晓文)