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巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中载脂蛋白E基因表达的变化.doc

巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中载脂蛋白E基因表达的变化

Hulda柳青
2017-12-19 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中载脂蛋白E基因表达的变化doc》,可适用于求职/职场领域

巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中载脂蛋白E基因表达的变化巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中载脂蛋白E基因表达的变化cNR中国动脉硬化杂志年第卷第期l文章编号{)co~巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中载脂蛋白E基因表达的变化张国兵陈灏珠,江智文,温沁竹,顾青,王丰田毓华(上海市第一人民医魔心内科,上海上海市中山医院心血管研宄所,上海ooo)研究简报【主题词THP细胞泡津细胞栽脂蛋白E基固表迭【摘要研宄单拔一巨噬钿胞源性泡津钿胞形成过程中细胞栽脂蛋白E表达的变化以佛波醇酯Oo咖L)诱导人单撮钿胞性THPI钿胞分化为巨噬细胞(h),再以氯化型低密度脂蛋白(ragL)$'激巨噬细胞形成泡沫细胞(h)用逆转录一聚合酶链反应捡测遗一过程中栽脂蛋白E在mRNA水平上的变化结果显示,单楮细胞分化为巨噬细胞的同时伴随着栽脂蛋白E表达的增加,巨噬细胞喜噬脂质转化为泡沫细胞后栽脂蛋白E的表选进一步增加【中期分类号R【文诎标识码A载脂蛋白E(apolipoproteinE,ApoE)对血浆脂蛋白的转运,摄取和代谢有重要髟响,其在组织中巨噬细胞的表达受肿瘤坏死因子,干扰索和氧化型低密度脂蛋白(oxidizedlowdensityGpoprotein,OXLDL)等因素的调节…巨噬细胞合成的载脂蛋白E通过自分泌或旁分泌的方式在组织局部脂质微环境的平衡过程中发挥着重要作用,尤其对动脉粥样硬化(athemsdemsis,As)病变内巨噬细胞源性泡沫细胞的形成有重要影响本文以佛渡醇酯(PMA)和LDL连续刺激人单核细胞性THPI细胞,观察单核一巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中载脂蛋白E表达的变化材料与方法试剂和仪器人单核细胞性THPI细胞购自中科院细胞所佛波醇荫(PMA)和低密度脂蛋白(u)L)购自Sienna公司TrizolRNA抽提试剂盒和M田逆转录酶购自Gibc岱司PCR引物由上海皓嘉公司合成,载脂蛋自E(bD)A链'AcAGAATIcGcCccGCCCICcTACA'B链'TAA口叮BGC^CGruIICCAAGcA一'~acfin(Obp)A链'TGGATGACGATA代GCIGC',B链'GCGCICTCAGGcGCCACACG'"}者简介张国兵,男,lff年出生,江苏常州人内科心血管专业博士,主治医师,从事动脉粥样硬化基础研究陈嘏璩,男广东新会^博士生导师,工程院院士,从事冠心病的基础和临床研究细胞培养和分组THPI细胞培养于合小牛血清,XlIl,L青霉素和gL链霉素的ILP~I培养液中接×l,孔将细胞接种至l孔板巨噬细胞组(加PMA,终浓度molL)孔THPI细胞组(不加PMA)孔,光镜观察巨噬细胞形成后(h)两组各取孔抽提细胞总RNA将剩下孔换无血清培养基(以的NutridomaHU代替小牛血清)培养l天后再分为两组:泡津细胞组(加oxLDLL)孔巨噬细胞组(继续无血清培养)孔油红O染色确定泡竦细胞形成后(h)抽提细胞总RNA逆转录一聚合馥链反应细胞总RNA抽提参照产品说明书微量分光光度计检测RNA样品纯度(On豳:ODl)逆转录(总体积):总RNA加随机引物六聚体pmolOocm加入逆转录缓冲液,dIPB,RNasin,DTr和MMLVu一clOmin,ocrain,ocrain取逆转录产物止,加引物各t,L,P(缓冲液t,L,MgC,DMSO,d各rrm~olL,Taq酶u,去离子水配总体积至Locmin后循环O次:~C变性lmin,oc退火min,oc廷伸lrain,末次循环oc延伸rain以限制性片段长度多态性方法确定聚合酶链反应产物的特异性电泳取聚合酶链反应产袖lO,琼脂糖凝肢鲫ChinJArterioscler,Vol,No电泳,(Vwin凝肢扫描系统检测扩增产物的量,以载脂蛋白E条带与actin条带灰度的比值为指标作半定量分析,经计算机软件处理后显示mRNA的表达情况结果泡沫细胞形成情况光镜下见,l细胞呈球形,悬浮生长并无限繁殖加PMA后h见细胞全部贴壁生长,并呈不规则形状,失去增殖活性,提示巨噬细胞形成巨噬细胞与,LDL共同孵育h后可形成典型的泡沫细胞,油红O染色后显示细胞内胆固醇含量明显增加巨噬细胞和泡沫细胞载脂蛋白E的表达单核一巨噬细胞组巨噬细胞载脂蛋白EmRNA的表达(O)明显高于TIP细胞()(图,P()巨噬一泡沫细胞组泡沫细胞载脂蛋白EmRNA的表达()明显高于巨噬细胞(O)(图,P)图巨噬细胞载脂蛋白E的表选结果,为即细胞,为巨噬细胞(uandLPblA作用天)A口E为巨噬细图泡沫细胞载脂蛋白E的表选结果,胞,为泡沫细胞(oLLDL作用天)讨论本文研究表明巨噬细胞表达载脂蛋白E的水平与细胞表型有关:单核细胞分化为巨噬细胞时伴有载脂蛋白E表达的增加巨噬细胞负荷胆固醇变为泡沫细胞过程中伴随载脂蛋白E表达的增加,与Basheeruddin等和Batdca等研究结果类似研究显示动脉粥样硬化病变内载脂蛋白E增加主要来自于巨噬细胞源性泡沫细胞表达的增加巨噬细胞新合成的载脂蛋白E作为胆固醇的载体可直接地或通过参与构成高密度脂蛋白问接地促进细胞内胆固醇的外流】,这可能是载脂蛋白E实现局部抗动脉粥样硬化作用的主要机制此外,载脂蛋白E还能减少脂蛋白酯酶介导的LDL在内皮下基质的沉积,抑制内皮细胞增殖,改变某些细胞因子活性,这些可能都参与了局部抗动脉粥样硬化作用载脂蛋白E基因歃陷鼠动脉粥样硬化病变内出现大量典型泡沫细胞,提示泡沫细胞的形成并不依赖于载脂蛋白E的存在,相反缺失载脂蛋白E后动脉粥样硬化病变早发而且严重转基因研究证实了载脂蛋白E的局部抗动脉粥样硬化作用因此,LDL引起巨噬细胞表达载脂蛋白E增加可能主要是细胞内胆固醇积聚引起的继发性改变,能够促进细胞内胆固醇外流,在一定程度上减缓了泡沫细胞的形成,从而发挥局部抗动脉粥样硬化作用参考文献L:~an,Li蕊}:la~oneTTecroslfactortrmdulat~mnytnac叩hapolipcptoteinE目印e印JJc‰Invest,:"~gaqheeruddinK,It~chtotisC,MaeT"ran~fionzandpost,tnm~rlptQnaleonndfIp删emEgeneerpressi~indiffe~iati,aghumancJJBo(:【BankaCL瑚kAS,D盯c^,elTHPIcellsrITecellsintcoculturet}LlipcpwtemsbutnotplateletsJj,船,,:【J~nang,Caynor附Kmthitsel^ipoproteinE,ducedbyhumm~c出口ed瑚皿科Ig罄mediat~cholesteroleflluxthatinthesenofaddedchol~temlJ』BiolChew,:l:l(此文~,收到,,修回)(此文编辑朱雯霞)

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