【word】 中心组合设计优化保加利亚乳杆菌产亚油酸异构酶发酵培养基

【word】 中心组合设计优化保加利亚乳杆菌产亚油酸异构酶发酵培养基 中心组合设计优化保加利亚乳杆菌产亚油 酸异构酶发酵培养基 ? 90?s9ChinaBrewingResearchReport 中心组合设计优化保加利亚乳杆菌产亚油酸异构酶发酵培养基 游庆红,尹秀莲 (1.淮阴工学院生命科学与化学工程学院,江苏淮安223001;2.南京工业大学食品与轻工学院,江苏南京210009) 摘要:首先应用部 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 因设计法试验得出影响保加利亚乳杆菌产亚油酸异构酶的主要因素为亚油酸,蛋白胨和葡萄糖添加量,在此基础 匕根据中心组合设计原理,选取亚油酸添加量,蛋白胨和葡萄糖为影响因子,采用响应面法进行3因素5水平的试验设计,以亚油酸异构酶 酶活作为响应值,对其产酶培养基进行进一步优化.结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,保加利亚乳杆菌产亚油酸异构酶的最佳培养基组成为蛋白胨13.6g/L,LA 添加量为1.99‰和葡萄糖25.4g/L,其余条件不变时,亚油酸异构酶酶活可达33.55U/mL. 关键词:部分析因设计法;响应面法;亚油酸异构酶;酶活 中图分类号:093—335文献标识码:A文章编号:0254—5071(2011)o4 —03 一oo90 OptimizationofmediumforlinoleateisomeraseproductionwithLactobacill usbulgaricus bycentralcompositedesign YOUQinghong一,YINXiuliml. (,.CollegeofLifeSciencesandChemicalEngineering;HuaiyinInatituteofTechnology;Huaian223001,China; 2.Collegeoffoodscienceandlightindustry;Nanjinguniversityoftechnology;Nanjing210009,China) Abstract:BasedOFtfractionalfactorialdesign,centralcompositedesigncombinedwithresponsesurfacemethodologywereappliedtooptimizethemedium compositionforlinoleateisomeraseproduction,inwhich,theconcentrationoflinoleicacid(LA),peptoneandglucosewereinfluencingfactorsandtheel3一 zy/neactivityoflinoleateisomerasewastarget.Theoptimummediumcompositionwasasfollows:LA1.99‰.peptone13.6gfLandglucose25.4g/L.Un— dertheseconditions,theenzymeactivityoflinoleateisonierasereached33.55U/m1. Keywords:fractionalfactorialdesign;responseSill-facemethodology;linoleateisomerase;enzymeactivity 共轭亚油酸(ConjugatedLinoleicAcids,CLA)是亚油 酸(LinoleicAcid,LA)具有共轭双键的位置和几何异构体 的统称,为近年来新发现的一种功能性油脂,具有抗癌, 抗动脉粥样硬化,增强机体免疫能力及促进骨组织的代 谢等诸多生理功能…,其主要活性成分为异构体cis9, transl1一CLA和transl0.eisl2-CLA.目前CLA生产主要 采用化学法,如亚油酸的碱法异构化,但化学法得到的产 物中具有生理活性的9c,11t和10t,12c异构体含量低,且 还有大量副产物存在,而要分离获得单一异构体非常困 难,故生物法合成共轭亚油酸受到人们越来越多的关 注.据报道多种乳酸菌可以在LA的诱导下产生亚油酸 异构酶,将亚油酸转化为CLA.本试验以保加利亚乳 杆菌(德氏乳杆菌保加利亚亚种)为菌株,首先以部分 析因设计法(Fractionalfactorialdesign,FFD)确定影响亚 油酸异构酶酶活的培养基组分的主要因素和添加量,在 此基础上应用中心组合设计进一步对其培养基的组分 进行优化. 1材料与 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1.1材料 1.1.1菌种及主要试剂 保加利亚乳杆菌:本实验室保存;脱脂奶粉:市售;LA (80%):安庆市中创生物工程有限公司;CLA(/>99%):Sig— ma公司;其余试剂均为分析纯. 1.1.2主要培养基 种子培养基:10%脱脂奶粉培养基. 发酵培养基:LA(80%)1.5g/L,蛋白胨l0g/L,葡镯糖 20g/L,乙酸钠5g/L,磷酸氢二钾2g/L,牛肉膏10g/L,酵母 粉5g/L,柠檬酸二胺2g/L,四水硫酸锰0.05g/L,七水硫酸 镁0.2g/L,Tween一801mL/L,pH6.5. 1.2方法 1.2.1培养条件 种子培养:将保藏在冰箱的保加利亚乳杆菌接种一一环 于种子培养基中,充分混匀后置37?恒温箱中培养12h. 发酵培养:以2%接种量接种于发酵培养基,恒温箱 37?恒温培养36h后,测亚油酸异构酶酶活. 1.2.2共轭亚油酸的 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 及亚油酸异构酶酶活测定 共轭亚油酸的检测及亚油酸异构酶酶活测定方法依据 文献[4]. 1.2.3中心组合设计优化培养基成分 FFD法筛选影响亚油酸异构酶酶活培养基组分的主要 因素:研究采用部分析因分析方法对影响亚油酸异构酶酶 活的7个因素(LA,葡萄糖,蛋白胨,磷酸氢二钾,牛肉膏,酵 母粉,乙酸钠)进行考察,固定其余条件不变.每个因素取 高,低2个水平,各因素及其水平见表1,试验设计及结果见 收稿日期:2010—12—14 基金项目:淮阴工学院青年科学基金项目(HGC0918) 作者简介:游庆红(1976一),男,讲师,研究方向为生物化工及生物制药. 研究报告中国酿造2第?91 229?总第期 表2,表中每行代表1个试验,每列代表1个独立的变量,试 验重复3次,以3次测量值的平均值为准.用Statitica6.0 对数据进行分析. 表1部分析因设计法试验设计因素与水平 Table1.Factorsandlevelsoffractionalfactorialdesign 中心组合设计法进一步优化显着因素:在试验的基础 上,根据中心组合设计原理,设计3因素5水平的响应面分 析试验,以LA添加量,蛋白胨,葡萄糖用量为自变量,发酵 液亚油酸异构酶酶活为响应值,对德氏乳杆菌保加利亚亚 种产酶培养基进行优化. 2结果与分析 2.1培养基组分影响亚油酸异构酶酶活的主要因素 表2培养基组分优化部分析因设计法试验设计与结果 Table2.Resultsoffractionalfactorialdesignformediumoptimization FFD试验结果及各因素方差分析见表2,表3.由表3 可知,LA添加量,蛋白胨的P值<0.05,说明这2个因素是 是主效应,其次是葡萄糖,且都为正影响(回归系数>0),而 其他因素的对响应值的影响均不显着,因此根据各因素效 应的正负和大小取值,正效应的因素均取较高值,负效应的 因素均取较低值;而图1进一步表明蛋白胨和LA的含量对 酶活影响非常显着,其次是葡萄糖,而其他因素对结果均无 0332100.5933812.02162 蛋白胨12.682502.6225834.835880.0004086.9683818.39662 葡萄糖1.887502.6225830.719710.485485—3.826627.60162 磷酸氢二钾一0.717502.622583—0.273590.789055—6.431624.99662 牛肉膏一0.637502.622583—0.243080.8l2048—6.351625.07662 酵母粉0.037502.6225830.O14300.988827—5.676625.75162 乙酸钠O.O125O2.6225830.004770.996275—5.701625.72662 (2)蛋白胨 (1)LA (3葡萄糖 (41磷酸氢二钾 (5)牛肉膏 (6)酵母粉 (71乙酸钠 图1部分析因设计法试验对因票显着性评价 Figure1.Significanceevaluationoffractionalfactorialdesign 2.2中心组合设计法进一步优化显着因素 在2.1的基础上,以蛋白胨,LA添加量和葡萄糖用量3 个因素为自变量,亚油酸异构酶酶活为响应值,应用中心组 合设计优化产酶培养基.试验因素与水平设计见表4,响应 面试验 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 及结果见表5. 表4培养基组分优化中心组合设计分析因素与水平 Table4.Factorsandlevelsofcentralcompositedesign formediumoptimization ? 92?9ChinaBrewing 表5中1—14组为析因试验,l5,20组为中心试验. 20个试验点分为析因点和零点,其中析因点为自变量取值 在x1,)(2,)(3所构成的三维顶点,零点为区域的中心点,零 点试验重复6次,用来估计试验误差.利用Statitica6.0分 析,结果见表6. 表5中心组合设计分析方案及试验结果 Table5.Resultsandanalysisofcentralcompositedesignfor mediumoptimization 表6中心组合设计回归分析 Table6.Varianceanalysisofcentralcompositedesign 对表5数据进行回归分析,获得酶活对蛋白胨,LA添 加量和葡萄糖的二次多项回归方程: Y=33.8251—0.05924X,+0.2921X2+0.0686X3—1.1463Xl一 0.814X2一0.616X3一0.24XlX2+0.035XlX3+0.2X2X3 由表6及回归方程可知,方中x,x,x,x影响显 着.试验因素中二次项对酶活有非常大的影响,其中,LA 的二次项对酶活影响最大,其次是蛋白胨的二次项,葡萄 糖二次项影响最小;但交互项作用不明,【【1j归分析表 明,回归方程能够较好地表示各因素与响应值之间的真 实关系,可利用该[口]归方程确定亚油酸异构酶最佳培养 基含量. 根据回归分析得出相应的响应曲面图,以确认蛋h胨, LA添加量和葡萄糖3因素对酶活的影响,结果见2. —?>33 窿<32 —?<3】 —?<30 >33 <32 <31 <30 隆I2Y=【x1,X2)(a),(xl,x3)(b),(X2,X3)(C)的响应面图 Figure2.Responsivesurfacediagramof(X1,X2)(a),(×1,X3)(b) and(X2,X3)(c) 图2直观地反映了各因素对响应值的影响,比较3绀 图可知,蛋白胨对酶活的影响最为显着,表现为曲线较陡; 而LA添加量与葡萄糖用量对酶活的影响不明显,表现为曲 线较为平滑.不同因子之间的交互作用并不显着,其对酶活 值的影响规律并不会随着另一因素的改变而有明娃变化. 根据所得到的回归模型,可预测最佳培养基组成为美 白胨13.59005g/L,LA添加量为1.98647%e和葡萄糖 25.43153g/L,其余条件不变时,发酵液酶活理论}可达 33.842U/mL 32l09鹉 昌罟一 研究报告中国酿造2第?93 229?总第期 厌氧接触一膜生物反应器处理白酒黄水的研究 周明罗,王涛,赵兴艳 (1.宜宾学院化学与化工学院,四川宜宾644007;2.长江水环境教育部重点实验室宜宾研究基地,四川宜宾644OO7) 摘要:对发酵培养菌丝体后的黄水利用厌氧接触一膜生物反应器工艺进行了试验研究.结果表明,进水COD浓度为1O.03g/L,14.36g/L 时,厌氧接触池对废水COD.的去除率为53.5%,69.6%;厌氧反应停留时间14h,16h较为合适.溶氧控制在2.0mg/L,3.5m#L,MBR对 COD去除率在91.4%以上,出水CODc,210.65mg/L,277.89mg/L,NH,一N去除率37.3%一54.2%;MBR对CODc,NH3一N的去除率随污泥 浓度的增大先增加后减少,合适的MISS值应控制在8g/L,10g/L. 关键字:黄水;膜生物反应器;化学需氧量;氨氮 中图分类号:X797文献标识码:A文章编号:0254—5071(2011)o4一oo93—03 TreatmentofwastewaterfromChineseliquorproductionbytheanaerobicbio -contactandMRprocess ZHOUMirig1no.WANGTao,.ZHAOXingyan (1.CollegeofChemistryandChemicalEngineering,YibinUnivemity,Yibin644007,China; 2.YibinResearchBase,MOEKeyLaboratoryofYangtzeAquaticEnvironment,Yibin644007,China) Abstract:ThewastewaterfromChineseliquorproductionwastreatedbyMBRprocesscombiningwithanaerobicbio—contact.Theresultsshowedthatthe removalratesofCODintheanaerobicreactorwas53.5%, 69.6%,andthesuitableHRTwas14h, 16h,whentheinfluentCODwas10.03g/L, 14.36L.Inaddition,theexperimentalresultsaboutMBRdemonstratedthattheremovalratesofCODreached91.4%,NH.Nremovalrateswere 37.3%,54.2%with2.0mg/L, 3.5mg/LdissolvedoxygenconcentrationinMBR.Theeffectofactivatedsludgeconcentration(MISS)onCOD.NH3-N removalwasalsoinvestigated.ItwasshowedthattheoptimumMISSwas8g/L,10g/LinMBRprocess. Keywords:wastewaterfromliquorproduction;membranebioreactor;COD;NH3一N 黄水也称黄浆水,是白酒生产过程中产生的一种棕黄 色,微黏稠的浑浊液体;底锅水是白酒酿造过程来源于镏酒 蒸煮工艺过程中加入底锅回馏的酒梢和蒸气凝结水.黄 水,底锅水均含有醇类,氨基酸,脂肪酸等大量有机物及氮, 磷元素…,成分复杂含量不定,是白酒生产过程中的主要污 染源之一,其COD值为10mg/L,2x10mg/L,属高浓度难 处理有机废水,综合利用是解决其污染问题的有效途径. 膜生物反应器(Membranebioreactor,MBR)是膜分离技术和 污水生物处理技术有机结合的一种高效的污水处理与资源 化工艺,具有高效固液分离,高浓度微生物量,低剩余污泥 量等优点.黄水,锅底水中丰富的有机物及氮,磷元素 是微生物生长必需的营养物,本试验对黄水和白酒锅底水 收稿日期:2010年12月21日 基金项目:同济大学长江水环境教育部重点实验室开放基金项目(YBWEF08001) 作者简介:周明罗(1977一),男,四川宜宾人,讲师,研究方向为水处理技术及资源化;王涛,通讯作者. 2.3验证试验 为了验证预测结果是否真实有效,根据以上最佳培养 基条件预测进行了近似验证试验,考虑到实际操作,将最佳 培养基组成修正为蛋白胨13.6g/L,LA添加量1.99%0和葡 萄糖25.4g/L,其余条件不变,在此条件下进行3次平行试 验,结果酶活分别为33.45U/mL,33.52U/mL,33.68U/mL, 平均酶活为33.55U/mL,与理论预测值33.842U/mL相比 相对误差仅为0.86%,进一步证明了此模型能模拟和预测 实验结果. 3结论 3.1通过FFD试验得出影响保加利亚乳杆菌产亚油酸异构 酶的主要因素为LA添加量,蛋白胨和葡萄糖,在此基础上 应用中心组合设计进一步优化产酶培养基.结果表明,回 归方程二次项对酶活有较大的影响,而交互项作用影响不 明显,其中LA的二次项对酶活影响最大. 3.2回归分析和验证试验结果表明,该方法切实可行;当培 养基组成为蛋白胨13.6g/L,LA添加量为1.99‰和葡萄糖 25.4g/L时,其余条件不变,此时亚油酸异构酶酶活可达 33.55U/mL,较优化前(30.345U/mL)提高了10.56%,这充 分说明了回归模型能较好地模拟和预测试验结果. 参考文献: [1]游庆红,尹秀莲.德氏乳杆菌保加利亚亚种产亚油酸异构酶研究[J]. 安徽农业科学,201o,38(15):8193,8271. [2]PARIZAMW,PARKY,COOKME.Thebiolcallyactiveisomersof conjugatedlinoleicacid[J].FrogLipidRes,2001,40(4):283-298. [3]OGAWAJ,MATSUMURAK,KISHINOS,eta1.Conjugatedlinoleic acidaccumulationvia10一hydroxy一12一 octadecaenoicacidduringmicroaem— bictransformationoflinoleicacidbyLactobacillusacidophilus[J].Appl Environiicrobiol,2001,67:1246—1252. [4J曹健,王月囡,王红军,等.嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力测定的 研究[J].食品科学,2007,28(1):155.157.