弹力蛋白酶和基质金属蛋白酶在肺组织破坏中协同作用的实验研究（可编辑）

弹力蛋白酶和基质金属蛋白酶在肺组织破坏中协同作用的实验研究（可编辑） 弹力蛋白酶和基质金属蛋白酶在肺组织破坏中协同作 用的实验研究 维普资讯 ////0>. 中国病理生理杂志 : 文章编号 ? ? 一 弹力蛋白酶和基质金属蛋白酶在肺组织破坏中 协同作用的实验研究 朱运奎,金远林, 肖永久, 汤育瑛, 汪 莉,李继东 兰州军区兰州总医院呼吸内科,甘肃兰州 摘 要 目的:采用肺成纤维细胞三维立体培养技术,直接观察弹力蛋白酶和基质金属蛋白酶对肺的主要成 分之一胶原组织的降解作用。方法:用明胶酶谱法和法测定加 一 、 、 和? 和 金属 蛋白酶抑制因子 ,同时测定胶原含量。结果:? 和几一口诱导培养在立体胶原内的肺成纤维细胞产生 ? 、 和 ,但是只引起少量胶原降解 . % . %,. ,同时加入中性粒细胞弹力蛋白酶,结果导致 胶原完全降解 . 。 使? 、 、 和 由非活化的形式转化为较小分子量的活化分子,同时,清除 ? 和 。胶原降解后基质发生强烈收缩。结论:基质金属蛋白酶可直接降解肺内胶原和其它间质组织,导致肺组 织破坏,中性粒细胞弹力蛋白酶通过活化基质金属蛋白酶引起或加速细胞外基质的破坏。基质金属蛋白酶与弹力 蛋白酶的协同作用可能是肺气肿等肺组织破坏的机理。 关键词 白细胞弹力蛋白酶;基质金属蛋白酶;肺;成纤维细胞;胶原 中图分类号 文献标识码 ? , ? , ? ,? , , ?啪/// ,,‰田. 加 ’ 砧.:蝴 . 几一, 龇.,.: 一一一 , , .叮讧 ? , 目 . :印娌呷 咖 咖. .;;; ; 中性粒细胞弹力蛋白酶抑制因子一 一抗胰蛋 有报道肺气肿、慢性阻塞性肺疾病白酶 ? , ? 缺乏会导致原发性, 和肺损伤患者的肺泡灌洗 肺气肿,因此有人认为中性粒细胞弹力蛋白酶是引 液中活性增强 ,并认为其与肺气肿和其它 起肺气肿、肺组织破坏的主要蛋白酶 .。肺气肿患 肺损害时组织破坏有关。的强大和广泛的水解 作用可能参与肺损害 ,但目前尚无直接证据。本 者支气管肺泡灌洗液中可检测出弹力蛋白酶的活性 增强,但尚未证实弹力蛋白酶能在体外水解肺间质 实验旨在观察肺成纤维细胞在活性胶原的三维立体 主要成分一胶原。金属蛋白酶 ? 培养中,与肺损害最有关系的细胞因子:肿瘤坏死因 ,的发现及其作用日益受到重视,至今已 子肿 一 和白介素一 ? 对金属蛋 白酶的 经发现和确定有 种以上的金属蛋白酶,它们具有 诱导作用以及弹力蛋白 酶和诱导的金属蛋白酶对胶 不同的降解能力,能导致组织的不可逆性破坏 。 原的降解作用及其相互关系,探讨它们在肺气肿和 【收稿日期 ? ? 【修回日期? ?基金项目 兰州军区药卫生基金资助项目.? 维普资讯 ////. 结果,为 个培养胶原的均数? 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 差 ? 。两组 其它疾病时在肺组织破坏中的作用。 间比较用 ’ 检验,多组间比较用方差 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 。 材 料 和 方 法 结 果 活性胶原的制备 的产生与活化 截取大鼠全尾,分离出胶原丝,经平衡液和乙醇 如图 一 明胶酶谱所示, 为一 , 反复漂洗后,用 / 乙酸在 ?提取胶原 。 为其活化分子; 为 , 为其活化 细胞三维立体培养 式 如图 ? 所示, 为一 肺成纤维细胞购自美国 ,用 培养 非活化形式, 和 为其活化式。如图 液传代培养,用其第 ? 代细胞作立体培养。按 一所示, 为一 非活化形 比例混合 × 与灭菌水和胶原,使其成为等离 式. 、 和 为其系列活化式 肺成纤维 子、等渗、 × 的液状胶原,接种细胞于胶原 细胞在常规培养条件下会产生一 ,但以非活化 内, .移入 孔培养板内,待胶原固化后移入 形式为主 弹力蛋白酶可导致一 活化 图 含有 的培养皿,在 , %条件 ?。? 和『一 诱导细胞产生一 、 下培养 。 ? 和 一 图 一 、 、 ,但为非活化形 为观察诱导和活化,在培养液中加入 一 式,弹力蛋白酶可活化所有使其变成具有水解,, 和 ? ,, 活性的小分子片段。常规培养下,肺成纤维细胞可 ,或者加人中性粒细胞弹 力蛋白酶/ , 产生? .少量与共存的结合状态,较多 , 。培养 后,测定立体胶原的大小, 收 集培养液和胶躁。用明胶酶谱法测定培养液中 为非结合的自由小分子 图 一 ,一 和 一 一 诱导细胞生成? ,与结合的复合体分子 和一 ,用 法测定一 明显增多,弹力蛋白酶清除? ,使结合分子与 和一 及肿 一 、 。胶原含量用羟脯氨酸法 自由分子的肿 均减少。常规培养下,肺成纤维细 测定 。 胞不产生一 ,? 和? 诱导细胞生成 统计学处理 一 ,但均为结合状,弹力蛋白酶清除一 所有实验各组均设 个平行立体培养歧原,每个 图 一 。 实验最少重复 次。所采用数据来自随机 次实验的一 斗 一? ’ ?,. . . 一】. 】 脚 一 ,一 ,一 ,一 ,呻 一 一? ? 日 且 : ; : ; : 一。 一 ; : ? ?围 肺成纤维细胞三维立体培养中? 和 皿一 及 诱导与活化? ,一 . ? 一 一 . 一 和一胶原含量的变化 ? 与 时,胶原降解 %. ,单独 图 所示,肺成纤维细胞胶原内培养 后,在 加人工 ? 与 时,胶原降解 . % .。 ? 和 ? 的刺激下,仅有 . %? . % 的胶 两者均显著低于合用组 .弹力蛋白酶在 原降解,与对照组无显著差异 . ;弹力蛋白 加入到没有细胞的胶原内进行培养 时,不能降解 酶加入组,胶原降解 . %? . % ,但弹 胶原。 力蛋白酶和? 与一 同时加人培养液组,胶 胶原面积大小的变化 原发生了完全降解%, 单独加人 图 所示,肺成纤维细胞培养在胶原内时。可以维普资讯 ////.深入研究,对 肺气肿及肺组织破坏的机理有了新的 收缩胶原, 后使胶原面积收缩至原面积的 %. ?/暑 认识。 等在肺气肿患者肺泡灌洗液中检测出 %. , 一 和几一 抑制收缩 %. ? ? ? 加存在,并认为它与肺气肿发病有关 。 %,.,而弹力蛋白酶加强收 缩 %? %, .。当弹力蛋白酶和 一 与几一 同时 等研究认为,一 活性增高是吸 烟患者肺 气肿的主要病因【引,等【提出,参与损 加入培养液时,在培养的前,胶原的面积介于对 照组和 一 和几一 处理组之间,自后,胶 伤肺组织的重塑。 原突然急剧收缩至小米粒大小,仅剩有松散的细胞 本试验采用肺成纤维细胞三维立体培养技术, 团,胶原成分完全被降解。 这一模型被用于组织修复或重建、组织纤维化的研 究。我们直接观察细胞和其生存的基质之间的反应 及其细胞外基质的降解,为细胞外间质组织的降解 破坏和组织重塑建立了较为理想的体外模型。 多种细胞因子在肺气肿、肺损伤中起作用,如 和几一 。本研究观察到,肺组 织细胞在有诱导 性细胞因子和几一 存在时,可以产生大量的 一 , , ,同时也诱导产生一 , , 这时,水 解酶和其抑制因子处于相对平衡,不会发生强烈的 水解作用。但当活化后,其降解作用急剧增. 强,酶谱分析 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,弹力蛋白酶 可以清除和活腭/ .孟? .. . .?. 蝣 化。本研究结果提示,弹力蛋白酶水解细胞外 . 基质的作用有限,在肺活化状态也不能降解胶 图 三维立体培养胶原含量的变化 原,只有弹力蛋白酶或其它能活化的酶和活化 因子与同时存在时,这种大量胶原和细胞外间 质结构的破坏和降解才会发生。当 一 缺乏时, 弹力蛋白酶的活性增强,可能被活化,从而引起 细胞外间质组织的过多降解,导致肺气肿和 的 发生。弹力蛋白酶和的协同作用可能是引起肺 组织破坏的机理。在吸烟患者,其肺内增加,诱 导生成,同时破坏 一 ,弹力蛋白酶的活性 增强,从而活化,发生基质的降解,导致组织破%坏,逐渐形成肺气肿或 。 . ? ..参 考 文 献. 撕. 图 肺成纤维细胞立体培养中胶原面积的变化, , . 一 一 . , ,: ? . 讨 论 【 , . . , ,: 肺气肿时,肺泡的结构遭到破坏,泡壁断裂,肺? . 泡融合变大而数量减少,细支气管中心周围的泡壁 【 ?, ,,. . 增厚收缩,从而弹性降低。传统的观点认为【】,弹 : ., 力蛋白酶引起弹力蛋白降解是肺气肿的主因,使用 ,: ? . 弹力蛋白酶诱发肺气肿是经典的动物模型。但 【 , ,。 . 是,在有的肺气肿患者,其肺泡灌洗液内弹力蛋白酶 的活性并未明显增加,肺内弹力纤维总量不一定减 ., ,: 少。弹力蛋白酶在体外不能降解胶原等细胞外基质 ?. 成分。这些观察对肺气肿弹力蛋白酶学说提出了争 【,,, . 伽? 议。近年来,对金属蛋白酶的病理生理的作用有了一?啪? .