苯酚—硫酸法测定金佛手多糖含量
苯酚—硫酸法测定金佛手多糖含量
浙江中医杂志2006年3月第41卷第3期 苯酚一硫酸法测定金佛手多糖含量
杜志炉吴绵斌王建英.
1浙江省金华市中心医院浙江金华321000 2浙江大学浙江杭州310014
3浙江省金华市人民医院浙江金华321000 关键词金佛手多糖苯酚一硫酸分光光度法 一
直以来,人们对佛手中有效成分之一的佛手多 糖_1研究比较少,对品质最为优良的金华佛手多糖
本文采用苯酚一硫酸分光光 的含量测定且未见报道.
度法对金华佛手水煎液中的多糖成分进行了含量测 定,并对该方法的准确性和可靠性进行了
评价
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. 1材料与仪器
1.1药材来源:佛手由金华市锦林佛手开发公司提 供并鉴定(金佛手).
1.2试剂与仪器:葡萄糖
标准
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品(上海化学试剂采购供 应站分装厂),AR,105?干燥恒重;重蒸馏苯酚(杭 州双林化工试剂厂,用时配制成6溶液),浓硫酸 (浙江巨化集团公司试剂厂,AR),无水乙醇(杭州长 征化工厂),721分光光度计(上海分析仪器总厂). 2实验方法
2.1多糖的提取与精制:取佛手药材用9O9/5乙醇浸 泡后渗漉,然后将剩余药渣用水煎煮3次,过滤,合 并滤液,浓缩至浸膏状.称取样品,用蒸馏水溶解, 95乙醇静置,抽滤,再用95乙醇和丙酮洗涤,得
佛手粗多糖.
2.2标准曲线的制备:准确称取葡萄糖20mg标准品 于600ml容量瓶中,加水至刻度,分别吸取0.4, 0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,1.6等ml,各以水补至
2.0ml,然后分别加入6苯酚1.0ml及浓硫酸 5.0ml,静置1O分钟,摇匀,室温放置2O分钟,于 490nm测吸光值,以2.0ml水按照同样显色操作作为 空白.横坐标为多糖微克数,纵坐标为吸光度值,制 作标准曲线.结果见
表
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1.
表1标准曲线的制备
水溶解,转移至250ml量瓶中,再用蒸馏水定容至刻 度,摇匀,做储备液.精密吸取多糖储备液0.2ml, 加蒸馏水1.8ml,按上述同样显色操作处理,测定吸 光值A,从回归方程中求出供试液中葡萄糖浓度,按 下式计算出换算因素:f—w/c~).其中w为多糖重 量(g),c为多糖液中葡萄糖的浓度(flg?mL),
测得f一3.28. D为多糖的稀释因素,
2.4样品的测定:精密称取样品,再分别加95乙 醇,使含醇量达85%,3500rpm离心,离心两次,每 次5分钟,同时用95的乙醇洗2次,定容到 250ml,备用.精密吸取上述供试液一定量,加蒸馏 水至2ml,按上述同样显色操作处理后测定吸光值, 按回归方程求出供试液中葡萄糖含量,按下式计算样 品中多糖含量.多糖含量(以葡萄糖计,)一CDf× lOO/W,计算多糖含量为4.42(n一6). 2.5稳定性实验:取供试液,按分析方法操作,每 隔一定时间测定吸收度,结果见表2.
表2稳定性实验
表中数据表明样品溶液在3小时内稳定.
2.6回收率测定:精密称取金佛手适量,加入一定 量的精制佛手多糖,按样品制备方法和含量测定方法 操作,测得多糖平均回收率为98.12,RSD一 0.92(n一4).
3讨论
从本实验说明用苯酚一硫酸法测定金华佛手多糖 方法简单,快速,灵敏,重复性好,颜色持久. 4参考文献
1黄玲.广佛手水溶性化学成分研究.时珍国医国药,1999,
10(6):4O6.
将上述实验数据作回归处理得回归方程:A一2 6.5845C一0.0069R一0.9946
2.3换算因素的测定;精密称取多糖50mg,用蒸馏 金晓玲.佛手挥发油的化学成分.分析测试,2000, 19(4)l71.
22 收稿日期2005一l1—
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