水环境中十溴联苯醚的生物富集特性及生物毒性研究

水环境中十溴联苯醚的生物富集特性及生物毒性研究 学校代码: 学 号: 东华大学硕士学位论文’ , 水环境中十溴联苯醚的生物富集特性及生物毒性研究专业名称:环境工程 姓 名:张泽光 指导老师:陈东辉教授 完成日期:年月学位论文原创性声明删 本人郑重声明:我恪守学术道德,崇尚严谨学风。所呈交的学位论文,是本人在导师的 指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中己明确注明和引用的内容外,本论文不包 含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写,我对 所写的内容负责,并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名:弘浮兔 日期:知乃..喀学位论文版权使用授权书 学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家 有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅或借阅。本人 授权 可以将 本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩 印或扫描等复制 手段保存和汇编本学位论文。 保密口,在??年解密后适用本版权书。 本学位论文属于 不保密?。 指导教师签名: 学位论文作者签名:压洚云 日期:.罗、,弓 日期:酲懋 东华大蝴士学撇 水环境中十溴联苯醚的生物富集特性及生物毒性研究 摘要 多溴联苯醚 ,简称是一种 重要的溴系阻燃剂,并且在世界范围内被广泛应用。具有难 降解性、长距离迁移性和易在脂肪组织中富集等特性,对人体和动物 具有致癌性,神经毒性和甲状腺毒性。近些年来在环境介质和生物体 内中都检测出了,包括在人体脂肪和母乳中,因此现在 的生态毒性和对人体健康潜在危害受到了人们广泛的关注。十溴联苯 醚一是商业用阻燃剂中含量最大的一种多溴联苯醚,而我 国消费量约占世界消费总量的四分之一,生产量占总产量的五分之 一,因此非常有必要对.的生物富集性和毒性效应进行研究。 本文通过体外染毒的方式研究了一对鲤鱼的毒性效应和其 在鲤鱼体内的生物富集特性。通过急性毒性实验,得出一的 ?为/,通过慢性实验,得到不同.暴露浓度和 不同.暴露时间对鲤鱼肝脏内酶和/一酶活性 的影响。结果表明,酶和/一酶活性先受到诱导升高, 后受到抑制降低。各个暴露浓度组均对肝脏细胞造成了不同程度的氧 化损伤, /浓度组造成的氧化损伤不可恢复。各个浓度组对肝 脏细胞膜造成了损伤,但是通过细胞的自我调节可以恢复。 另外本文还以冷冻发光菌粉制剂测定法,蚤类急性活动 抑制试验和天慢性毒性试验来检测一的毒性。实验结果表 明:一对发光菌的剂量一效应曲线为非线性,且急性毒性较小, 浓度越高,抑制率越高,但高浓度下对发光菌的抑制率变化很小; 一对大型蚤的急性毒性?大于 /,属于低毒; 在慢性毒性试验中,当一暴露浓度 /时,对大型缝缝 东鞅频士学位论文 蚤的繁殖和生存产生显著影响,浓度越高,繁殖能力和生存能力下降 越大。 通过遗传毒性试验测定了一遗传毒性,得出一 .的遗传毒 具有遗传毒性作用,可以诱导产生损伤, 性与. 相当。 本文研究了天内,在一两个暴露浓度./,/ 下,鱼肉对.的富集和降解趋势。试验结果表明,在不同暴露 浓度下,鱼肉中一的富集浓度均在第天最高,之后开始下降; 鱼肉中低溴联苯醚的富集浓度在/级,远低于.富集浓度 ‖。 本论文通过以上一系列试验,分析了在不同水生生物级别十溴联 苯醚的毒性,为控制多溴联苯醚对人类和水生生物的危害提供技术参 数。 关键词:十溴联苯醚;生物毒性;生物富集; ?纨 ., ?. , ,. 一 ’ ’ , 一. ,一 . 一 /, /. . , /.一 , ’ . 一 . 一,. ? , ,. 一 一 / ’ ;/,/, ;. ,. .一 一 一’ , . ’. 一’ . / / . . , / ; ., , , . ; : ;; 目录 第一章绪论??.. . 简介? . 的使用情况? . 的环境行为? ..在空气中的环境行为?.. ..在土壤/沉积物中的环境行为?. ..在生物体中的环境行为.. ..在人体中的环境行为?.. . 的毒性 ..对甲状腺的影响. ..对肝肾组织的影响??一 ..对神经系统的影响??.. ..致癌性? .. 代谢物的毒性? .本课题的研究意义和内容? ..本课题的研究意义..本课题的研究内容第二章一对鲤鱼的毒性研究??. .引言? .试验部分..主要仪器:??一 ..主要试剂 ..实验动物 ..实验装置 ..实验方法:.实验结果:一 ..急性毒性试验? ..慢性毒性试验? .小结?一 第三章.对大型蚤的毒性研究?. .引言一 .大型蚤的培养 ..大型蚤的来源?. ..大型蚤的培养条件..斜生栅藻的培养 .蚤类毒性试验 ..仪器设备: ..试验程序: .结果和讨论? ..急性毒性试验? .. 天慢性毒性试验结果 .小结.. 第四章.的细菌急性毒性和遗传毒性研究??~ . .对发光菌的毒性研究..实验部分?. ..仪器:..试剂:?一 ..菌种准备及保存 ..试剂准备 ..试验操作:..实验结果 . 一的遗传毒性研究? ..主要试验材料? ..菌种准备及保存:..试剂准备 ..受试液配制..试验操作撼量 东华煳蝉位敝 .小结?.. 第五章.在鱼体中的富集降解趋势研究. .引言.. .实验部分?一 ..仪器与试剂。,试验试剂和MATCH_ word word文档格式规范word作业纸小票打印word模板word简历模板免费word简历 _1714983148358_0品..实验鱼的暴露浓度及暴露方式. ,.前处理? ..仪器分析:.实验结果?. .标准曲线的建立 .。质量控制和质量保证? ..生物富集趋势? ..生物富集趋势同生物酶活性变化的关系??. .小结?.. 第六章结论与建议 .结论?.. .建议.. 参考文献?. 第一章绪论 帚一早殖比 . 简介 ,简称作为一种阻燃 多溴联苯醚 剂,由于其阻燃效率高,热稳定性好,对材料性能影响小,价格便宜,被广泛添 加到各种消费品中,如聚氨酯泡沫体、床垫、地毯、汽车坐垫等,同时含 的苯乙烯类塑料也被大量应用于电子电器产品中【,。由于具有难降解 性、长距离迁移性和易在脂肪组织中富集等特性,欧盟于年月颁布了 电子电气设备中限制使用某些有害物质限用指令 中规定从年月日 ,简称指令。 起禁止使用五溴联苯醚和八溴联苯醚,随后修订的指令中又禁止十溴联 苯醚。年月在斯德哥尔摩公约缔约方大会第四届会议.决定将商 用五溴联苯醚和八溴联苯醚等九类化学物质新增列入公约附件,或的受控 范围。【,】 的化学通式为 ,化合物的通用结构式如图. 所示,根据溴原子数量不同,分为个同系组,共种同系物,其中氢原子 数和溴原子数之和为,是多氯联苯 ,的衍生 物,两者非常相似。 ’ ’ ’ 图. 结构通式 . 和多氯联苯一样都按编号系统编号.在室温 下具有蒸汽压低和憎水性、亲脂性等特点,沸点为一般在 ?之间,可 以散逸到空气中,随大气长距离迁移;可以随着食物链生物富集和放大。在水 体 中溶解度与正辛醇/水分配系数有关。在水中溶解度小,且随着所含溴 原子数的增加,溶解度和挥发性逐渐降低。随溴含量的增加而增加,蒸汽醯缝 东鞅翔士学位敝 压随溴原子数的增加而线性降低。具有相当稳定的结构,很难通过物理、 化学或生物的方法降解。在紫外光的照射下,含溴量越高的同系物更容易降 解, 高溴代的联苯醚可降解为低溴代和/。各同系物部 分物理化学性质见表.。 八种常见的同系物为一,,’.三溴联苯醚、., ’,,’.四溴联苯醚、.,’,,’,.五溴联苯醚、.,’, ,’,.五溴联苯醚、一,’,,’,,’.六溴联苯醚、., ’,,’,,’.六溴联苯醚、.,’,,,’,’,.七溴联苯醚、 ,’,,’,,’,,’,,’.十溴联苯醚。 一 图. ,’,,’,,’,,’,,’.十滇联鞠哟 . 表. 各同系物理化性质 . . 的使用情况 现在工业中生产主要有三类:十溴联苯醚、八溴联苯醚 .和五溴联苯醚.,它们均为添加型阻燃剂,且都是混合物而非 单一型化合物。 全世界对多溴联苯醚需求量很大,年全球的消耗量已经达到 .,其中,五溴联苯醚、八溴联苯醚和十溴联苯醚的工业年用量分别约为,、 年全世界对一 币,。近年来.需求量大幅增加, 的需求量占对总需求量的%【,年为%。在许多国家如美国、 日本等多家公司的十溴联苯醚己经工业化。目前全世界利用最广泛的是十溴联苯醚。 我国自年代以来,已有大量的企业进行生产,十溴联苯醚也是我国产量最大的溴 系阻燃剂。目前年产能力己达万吨,实际年产量约.万吨,约占世界消费总量的四 分之一,占总产量的五分之一峭。 . 的环境行为 目前使用的多溴联苯醚以高溴代物为主.高溴代苯醚由于具有低挥发性,低水溶 性易吸附于泥土和颗粒,所以在环境中比较稳定.而低溴代联苯醚因为具有比高溴代 联苯醚的挥发性,水溶性和生物富集性,所以泥土,水和空气中都有低溴代联 苯醚的 存在. ..在空气中的环境行为 空气中的分布在包括室内和室外空气及灰尘等区域中,从已报道的监 测资料看,室外空气中的水平在~/之间变化,城市高于农村地 区。美国五大湖地区的监测显示。空气中水平与相关性非常好。室 内空气中水平高于室外空气,可以高达/,一些职业环境中甚至 可以高达 /。加拿大的最新监测发现,普通居民家庭室内空气 的平均浓度为 /,是室外浓度的大约倍。他们又测定了室内灰 尘中的含量,平均为/】。这些结果也表明,室内空气和灰尘是 重要的暴露来源,尤其是对室内活动时间较多的儿童和室内工作人员。 等【】报道了年日本京都市大气中含量为~ ‖,主要有.、、、幂。日本大阪地区大气中含 量达至 /,其中.士%】。大量的研究表明,高溴代联苯 醚尤其是.,主要存在于空气的粉尘中,而低溴代联苯醚主要在气相中 ,因此,低溴代联苯醚更容易在大气中远距离迁移。磁耋 东华煳蝉撇 ..在土壤/沉积物中的环境行为 土壤/沉积物是环境中多种污染物的主要汇,同时也可能是一个重要的二次 源,特别是难降解、辛醇一水系数较高的有机污染物。就属于这类有机污染 物中的一种。有效地分析监测河流和海洋沉积物中的污染物对于研究污染物在沉积 物中的形态和迁移机理,进而有效治理水体污染有重要意义,同时可以了解生物体 可能的暴露途径。 有关沉积物中的研究,国内外己经进行了大量的研究。世界不同地区 由于生产和使用的产品及数量的不同而使其环境中的污染特征不 尽相同。一般来讲,土壤/沉积物中主要的同类物为.,这可能是 因为其较大的使用量和其在沉积物中非常低的迁移性。 最近几年各类刊物上发表了大量关于河流及海洋沉积物中的含量数 据和时间趋势。等。对~年来自美国五大湖的沉积物样品做了 研究分析,的范围为../干重,.为 /干重。 挪威、荷兰、德国西欧国家的~些水域沉积物中检测值为,和 /】,葡萄牙的海河中则含../】。北美五大湖、日本东京湾和中国 珠三角等地【】~些沉积柱的研究表明:不论是低溴联苯醚还是高溴联苯醚,都表 现出随时间浓度逐渐增加的趋势;而西欧一些研究表明,在世纪年 代出现后,浓度持续上升至年代中后期,随后出现下降趋势。这些研究结果表 明不同区域,由于生产、使用及其管理政策上的差异,其时间趋势呈现出不同特点。 近几年,国内学者开展了较系统的底泥中多溴联苯醚浓度及分布的研究,研 究 结果表明,底泥中多溴联苯醚的浓度级是/干重。等人【】对香港海域底 泥的沉积物进行分析,测得七种多溴联苯醚的度范围是.~./干重;陈 社军等人研究珠江三角洲及南海北部海域表层沉积物中多溴联苯醚的污染状 况,在所分析的样品中,十溴联苯醚的浓度范围为.~/,平均含量为 /,是目前世界上已报道沉积物中含量最高的区域:其余多溴联苯醚的浓 度范围为../,几乎所有被分析的样品中.都是最主要的同 系物。杨永亮等人对青岛近岸沉积物中的多溴联苯醚进行了测定,发现青岛近岸 沉积物中的多溴联苯醚以六溴和六溴以下的联苯醚为主,六溴以上的多溴联苯醚未 检出。韩晓芳对长江口近岸和黄浦江沉积物五个不同河段底泥中七种单 体进行分析测定,其中沉积物样品中低溴代联苯醚的含量为,~., 干重,长江口近岸及黄浦江污染较轻,主要以低溴代联苯醚为主。综合国 内外数据,可看出世界范围内的河流、湖泊和海洋沉积物中,都被检出, 但由于来自水体附近的电源污染、水体的迁移以及在长距离的大气迁移后进行的干 湿沉降等可能的原因,致使不同地区沉积物中的含量差异很大。 ..在生物体中的环境行为 等计算了加拿大湖泊中浮游动物、贻贝和种鱼类的 值生物富集因子,其范围在。..之间,其中,生物对富集能力的大 小顺序为: 鱼类贻贝浮游动物.觚报道了中国北京附近某接收污水处理 厂排水的湖泊中种鱼类和种爬行动物甲鱼对的富集效应,计算 值范围为.~.,其中甲鱼对的富集能力高于鱼类.等 的 报道了中国华南某电子垃圾回收地种无脊椎动物田螺和草虾、种鱼类和种爬 值变化范围为.~., 行动物水蛇对的生物富集作用,其 而不同生物对富集能力的大质序为水蛇鱼类草虾田螺.等 报道了密西根湖中湖红点鲑对具有极高的生物富集作用,计算的 。 值分别为.、.、.和.【 .、.、.和.的 等观察到、、六溴联苯醚在 , 但 小鼠和大鼠体内的半衰期是~ 即随溴原子的增加半衰期增加, .排出的速率更快一些,半衰期为 左右。 陈树科【等对乐清湾海域中持久性有机污染物多溴联苯醚的种 同系物在海洋鱼类红鲈、黑鲷、鲈鱼中的含量进行了检测。肝中? . 的含量为.一 含量 /湿重,明显高于相应鱼肉中的? .、. /湿重。 研究通过比较鱼肝中的含量占鱼肉和鱼肝中总含量的比例 鱼肝,鱼肝鱼肉来探讨不同物种鱼肝、鱼肌肉对的富集能力若 该比值大于.,则说明易在鱼肝中富集,若比值等于.,说明鱼肝和鱼肉 对的富集能力相似,若比值小于.,说明易在鱼肉中富集【红鲈、 黑鲷、鲈鱼中该比值分别为.、.、.,均大于.,郭英等】测定桂花鱼 各个组织和器官中的含量,发现桂花鱼肝脏中的浓度.~ ./显高于肌肉中的浓度.一./。等【】调查了 比利时北海海域海洋生物的含量,发现白奎中该比值为.,与该研究结 果相似。等】分析了北海水生食物链中不同营养级别生物受的污染 情况,发现鳕鱼的该比值.与该研究结果十分相似。 说明这些物种可选择性 的在肝中富集。吕杨等【】】通过测定鲫鱼肌肉组织和内脏组织中的 浓度,发现鱼类内脏组织中的?占肌肉和内脏组织中罗总量的 .大于.,说明更容易在内脏组织中富集。 在中,,’,,’.四溴联苯醚.是目前分布最广、环境 残留量最大、生物材料中含量最高、对生物和人体毒性最强的多溴联苯醚同 系物之 一。陈树科‘的研究中鱼肝、鱼肉中的分布模式非常相似,其含 缝缝 东华四 量表现为:...,.,.,.一, .,..。.为最主要的同系物,.相对于? 的平均含量为.%.%。这与其林竹光等和郭英等报道的结果一 致。故可知鱼类肌肉和肝脏中的同系物主要为。而.很 少在生物体内检出。 等【对鲤鱼幼体进行天的.的食物暴露 ,然而,在所 ?没有观察.的生物积累检测限为/ 暴露的时段在鱼和肝组织中发现了七种明显的.脱溴产物的积累,通过使 用/.和/确定这些脱溴代谢物为五溴到八溴联苯醚。同 时.的生物利用度仅为.%,此值与等人【’】相同,他们在 十溴二苯醚暴露量.~毫克/公斤体重/天,暴露天后,低水平的. 在虹鳟鱼组织中被检测到,计算的.的积累率为.一.%。 李立勇【】对小鼠暴露了不同剂量,,,?‘体重的. 不同的时间,和天后,应用建立的分析方法测定了.脱溴 产物在小鼠肝脏、脾脏和’肾脏中的含量。结果表明,肝脏、脾脏和肾脏中 都有 的存在,三个脏器对的蓄积能力略有差异,其中肝脏对 的蓄积浓度最强,其次分别为脾脏、肾脏,同时发现一在小鼠体脱溴后 主要含有四种单体:.、.、.和.,这四种单体含量 总和占小鼠体内检测到的总的%以上。 综合以上可以得出以下几点: 在自然环境中,.是目前生物中含量最高、对生物和人体毒性最强 的多溴联苯醚同系物之一。其次为.、.、.、.等,而高溴 联苯醚如.、等在生物体中含量较少,尤其是.很少 在生物体中检出。 肝脏相对于其他内脏和肌肉来说,对的蓄积能力最强。 不同生物对富集能力的大小不同,在鱼类,贝类, 浮游动物,草 虾中鱼类的富集能力最强。 生物体对十溴联苯醚吸收较差,只有在比较高的浓度暴露下才能在生物 体内观察到.的积累,而且代谢很快,会在生物体内脱溴生成低溴 联苯醚。 ..在人体中的环境行为 多溴联苯醚在人体内的富集也引起了研究学者们的广泛重视.在一 次对墨西哥妇女的血浆和乳液样本进行多溴二苯醚初步筛查中检测到的浓 度水平 鳓 蝴‘?删,.‘??;壬‘ 东糊划色位论文 比欧洲迄今报告的多溴二苯醚浓度水平高出许多.在墨西哥城市妇女血浆中 各 种多溴二苯醚.除外平均浓度约为 /脂重.而墨西哥农村妇女的 这种浓度水平却与瑞典农村妇女的差不多仅对墨西哥城的妇女进行了. 检测.年在一项对加拿大一般人口的研究中发现,在多溴联苯醚的 浓度水平方面存在很大的个体差异.数值差距大于三个数量级,有少量数值 显示出 高得多的水平.其研究还发现,加拿大北极地区人口体内的浓度水平呈上升趋势。 目等人【】对法罗群岛人乳检测的数值也显示了同样的趋势。等 人【】两项研究表明,澳大利亚人血清和母乳中多溴二苯醚的浓度水平比欧洲人的 高,但是比北美人体内的水平低。我国对于在人体内的富集研究也已经开 始。 李明园等【】研究采用..对莱州湾南安地区十溴联苯醚生产源区 位居民血清中种多溴联苯醚.,.,.,.,.浓度进行了检测, 同时测定了样品中的甲状腺激素水平,研究中,名测试者中甲状腺指标异常者 有名。血清中?.,.,.,一,.的浓度范围以脂重 计算,下同为.~. ?~,平均值为. ?~,? .,.,.,.浓度范围为.~. ?~。种同族体中, .对?;的平均贡献达到了.%。 张磊【】等在年月~月在我国个省市自治区选择了名志愿 者,采用.对母乳样品中的.、.、.、 .、.、.和.等种组分的含量进行 含量为.士. 按脂肪计均值?标 测定。我国母乳中? / 广 准差,最低值为. 河北城市样品,最高值为. / 西农村样品。与其他研究相比:我国母乳中水平比美国母乳中水平低 ~个数量级,也低于澳大利亚和英国的水平,与其他欧洲国家和日本的水平相 近,但高于越南母乳中的含量。.、.和.是我国 母乳中含量最丰的种组分,合计占平均水平的%。虽然我国母乳 中仍处较低水平,但我国作为新型含溴阻燃剂的主要生产国之一以及主 要的电子垃圾目的国之一, 其人体污染趋势应引起我国相关部门的警惕。 . 的毒性 在结构和化学性质上与多氯联苯类似,具有一定的挥发性,可 以散逸到空气中,随大气长距离迁移.同时亲脂性强,化学性质稳定,是 生物可利用的,能被生物吸收并通过食物链传递到达人体内,并有可能在体 内富 集到很高的浓度。缝缝 东鞅翔蝉撇 不同的同系物毒性差别很大,商业产品中.毒性最大,很 低剂量就可以引起毒性,而。毒性较弱,很大剂量才能表现出毒性【。 对老鼠和兔子的毒性研究结果表明,五溴联苯醚最严重的影响是对神经系 统的损害,浓度在.~./表现出毒性,浓度在/表现出对后代 的甲状腺激素的影响:而八溴联苯醚浓度,/就会引起对胎儿的毒性和致畸 性;十溴联苯醚浓度/对成熟动物的甲状腺、肝和。肾都会引起形态的改变。 目前,多溴联苯醚在动物和人体中的长期累积效应的研究工作还较为有限, 但普遍认同多溴联苯醚对实验动物具有甲状腺、肝肾组织、神经和免疫系统 方面 的影响。 ..对甲状腺的影响 与甲状腺激素有相似的化学结构见图..甲状腺激素 包括荷尔蒙,’,一三碘甲状腺原氨酸币,’,,,四碘甲状腺原氨 酸。破坏甲状腺荷尔蒙的机理还没完全确定,】基于体外数据和体 内的实验,认为或其代谢物的作用机制包括:可与甲状腺转移蛋白竞争性 地结合甲状腺受体,从而干扰甲状腺的动态平衡:直接与甲状腺受体结合:通 过 来加快的代谢。也有研究认为结合到甲状腺接受体的竞争 机制很可能是因为阻燃剂和内生激素结构的相似性造成的畸引.最近的生物 体内研 究显示,带有氢氧基的代谢物与甲状腺荷尔蒙输送蛋白有高的亲和性,且 易与甲状腺荷尔蒙接受体~【和~结合。所有的产品如 .、.、.等均会破坏甲状腺荷尔蒙的平衡,相对而 言.的破坏性较小。 。 氢氧基一 ,’,,’~四碘甲状腺原氨酸 图. 带有羟基的代谢物与甲状腺荷尔蒙化学结构示意图 .. ..对肝肾组织的影响 在大鼠亚急性和亚慢性毒性研究中发现,染毒大鼠/?, 甲状腺增生,肝扩大,肾脏玻璃样变性。.染毒鼠 /?, 脾细胞数量明显降低。在大鼠和小鼠的慢性毒性研究中,经口染毒?纯 度为%%周,均有肿瘤形成;大鼠染毒在~ /?时,肝 脏和胰腺的腺瘤发生率增加;小鼠染毒在 /?时,肝细胞腺瘤 和癌的发生率增加。 ..对神经系统的影响 由于两个苯环之间是由醚键连接而成,因此所有的化合物的结构都是 非共平面,这与非共平面的有许多相似的诱导神经系统作用。等【】 研究发现,新生老鼠经口服一、一几个月后,其行为、运动、活力 和记忆力等几项测试均表明会引起自发性运动行为功能障碍。多个研究表 明, .和.对新生小鼠都具有神经毒性效应,而且这种效应随着年龄的增 加而恶化,个月小鼠个月小鼠严重,并且.对神经系统的毒性. 更强】。等【】在大鼠大脑发育快速期出生后,, 单次给予不同剂量 .干预,研究发现.可影响其神经递质分泌,致成年大鼠神经行为改 变,并具有神经发育毒性如自发意识的改变、学习能力和记忆能力的损害。 等【】认为.可影响神经发育相关蛋,.,,导致神经 系统损伤。陈敦金等用./.胃灌母鼠,建立母源性暴露动 物模型,对仔鼠学习记忆能力,海马突触素以及微管相关蛋白,仔鼠免疫功能 进 行检测,发现长时间母源性.暴露可以影响仔鼠神经系统发育,导致其学习 记忆能力下降,免疫功能受损,但其具体毒性机制还需进一步研究。 目前,对人的危险评价是建立在动物模型上的.文献报道人体组织中 含有,年道了,近三十年来母乳中八种同系物总含量 不断剧增哺,孕妇吃了受污染的鱼可能会影响婴儿的大脑发育以及荷尔蒙平 衡, 出生婴儿食用母乳时也可能会产生同样后果.目前对在人体内的毒理动 力学研究很少,如果基于人体的承受水平或在某个器官中的浓度来评价, 可能对于人体的真正的安全限会较低瞄引.此外,在制备、燃烧及高温分解 时会生成剧毒致癌物多溴二苯并二嗯英 .., 及多溴二苯并呋喃?,,这可能会使得毒性增 大。 ..致癌性 目前对致癌性方面的研究主要是针对.。美国将 .列为人体可能的致癌物。有统计显示在雄鼠体内.暴露量达 到 和 /?、雌鼠体内暴露达到/?时会 观察到肝肿瘤现象。在雄鼠体内暴露量 /?时会出现肝细胞腺瘤或 癌增生【。 .. 代谢物的毒性 许多研究推断?在环境中能够降解或转化成生物蓄积性更大、毒性 更大和迁移性更强的同系物。】证实了.能够在幼年 的虹鳟鱼和鲤鱼体内脱溴变成七溴、八溴和九溴联苯醚的同系物。也有研究 发现 .能够在某种微生物细菌的作用下脱溴转化成.和 ?的同系物引。?脱溴后生成的低溴同系物毒性比. 本身要大,由此可以推断.对环境和人体的影响可能是它本身和其代谢 物共同作用的结果。 .本课题的研究意义和内容 ..本课题的研究意义 十溴联苯醚一在商业用阻燃剂中含量最大,而在我国约占世界消 费总量的四分之一,生产量占总产量的五分之一。另外十溴联苯醚本身被测 试出 具有潜在的致癌性,并对子代的免疫功能产生影响,虽然目前已有一些禁用 指令, 但我国并没有执行,所以对。对生物富集性和毒性效应进行研究非 常有必要。目前存在的问题有: .以体外染毒的方式对鲤鱼的毒理效应的研究较少。 表.是最近几年人们对.对鱼类的毒理性研究成果,从下表可以看 出,暴露方式主要从喂食和注射两种,而没有通过对鱼类进行体外染毒方式的毒 理性研究,经初步分析,这主要是因为的水溶性比较低见表.。然 而,对于水生生物,吸入是一个重要的接触途径,鱼类的鱼鳃部位血流丰富,氧 气交换能力强,而且是直接接触暴露在周围的水中。故有必要以体外染毒的方式 研究.对鲤鱼的生态毒理效应。魄量 东懒蝉黻 表中??表示未检测到 表. 的脂溶性和水溶解性值 一对鲤鱼的生态毒理效应的研究还不是很全面。 在全世界范围内对于在生物体内的富集情况的研究很多,而其生 态毒性研究虽然很多,但是对水生生物的毒理机理研究比较零散,也不全面。外缝懋 东华大翔士学位敝 源化学物质对组织细胞的毒性作用的机理非常复杂,一般有干扰正常受体.配体 的相互作用、使细胞膜受损、干扰细胞能量产生、产生自由基和脂质过氧化等。 而这些都是通过作用于各种酶而产生毒性作用。有常见的酶有过氧化氢酶 ,细胞色素同工酶,超氧化物歧化酶酶,、 .酶,谷胱甘肽转移酶酶等。 目前通过这些生化指标来指示.对鲤鱼的毒性的研究的报道还很少, 有待加强。 生物毒性测试方法除了鱼的毒性测试以外,还有发光菌急性毒性测试 法、大型蚤运动抑制试验等。有必要通过此类基础毒性研究对.在不同 层次的水生生物的毒性效应进行评价研究。 在环境中的浓度比较低,短时间内不会有致死作用,但其可能 潜在的引发癌症、突变或畸变的发生,并可能遗传给后代。致突变性和遗传 毒性 的常用测试方法有试验、/测试、彗星试验、微核试验等。对. 的遗传毒性进行研究非常有必要,从而对.对人体健康和生态安全的潜 在危害进行更全面的评价。 ..本课题的研究内容 本文以体外染毒的方式来研究.对鲤鱼的毒性效应和其在鲤鱼体内 的生物富集降级特性。通过生物酶指标酶,切.酶的活性变化来指 示.对鲤鱼的毒性效应。另外还以水生生物为毒性指标来测试. 的毒性,如发光菌急性毒性测试法,蚤类.急性活动抑制试验等,通过 遗传毒性试验测定其遗传毒性。本课题通过以上一系列试验为多溴联苯醚的 毒性研究补充和提供一些基本毒性数据。具体内容如下: 通过对鲤鱼的急性毒性实验,确定十溴联苯醚对鲤鱼的半致死浓度 通过对鲤鱼的十溴联苯醚半静态水质染毒试验,了解鲤鱼在体外染毒条件 下,十溴联苯醚在鱼体器官组织中的富集情况,降解情况和毒性效应,其 中通过测试生物体内酶/.酶,酶的方式反映其对鲤鱼的 毒性效应。 采用发光菌法测定和评价.的毒性。 进行蚤类急性活动抑制试验,对.对水生生物短期暴露的 急性毒性进行评价。 进行遗传毒性试验,对.的遗传毒性进行评价。 第二章一对鲤鱼的毒性研究 .引言 生物体接触到污染物质后,在细胞内可造成氧化损伤,其代谢产物有过氧化 氢和活性氧自由基,后者包括有超氧离子自由基?、羟自由 基?、氢过氧基?等,其中羟自由基?是化学性质最活泼的 活性氧,它几乎与细胞内的每一类有机物如糖、氨基酸、磷脂、核苷酸和有 机酸 等都能反应,发生脂质过氧化,且有非常高的速度常数,只有当的产生与 清除保持动态平衡时,才能使机体维持较低的浓度,免受伤害。机 体的抗氧化防御系统对具有清除作用,但如果污染胁迫所致过多, 超过细胞清除的能力,则会引起细胞的损伤。过氧化氢酶是一种 在自然界中广泛存在的酶,是生物体抗氧化防御系统中的重要组成部分,它 广泛 存在于各种生物的细胞内,尤其在肝脏、肾脏和红细胞中含量非常高。过氧 化氢 酶主要分解过氧化氢和羟自由基.,保护机体细胞稳定的内环境 及细胞的正常生活,在调节细胞免于活性氧的氧化损伤过程中起着重要的作用。 是生物体内重要的酶,存在于所有细胞 中,包括多种由不同离子活化及存在于不同细胞结构中的,在细胞的供 能活动如离子平衡等之中起着重要作用。是镶嵌在膜上的一种蛋自酶,并且是组 成.泵活性的主要部分。环境污染物对鱼鳃,肝,肾和脑的?心.酶 均有致毒作用,可改变细胞的渗透性,干扰正常的水盐代谢,中断氧化磷酸化的 偶联过程,使细胞不能提供正常活动所需要的能量。由于多种类型的污染物对 有显著的影响,因此,从分子生态毒理学的角度来看,是一项广 泛用于评价污染压力的参数,是具有通用性和直接性的指标【。 。试验部分 ..主要仪器: 笔式计 微量取液器皿. 上海求精生化试剂仪器有限公司; 玻璃组织匀浆器; 型离心机飞鸽牌; 。黝 东华煳婵一 电热恒温水浴锅金坛市科析仪器有限公司 紫外可见分光光度计北京普析通用仪器有限责任公司; ..主要试剂 丙三醇国药集团化学试剂有限公司,二甲亚砜上海润捷化学试剂有限公 司,均为分析纯。 生理盐水.%溶液; 十溴联苯醚.,分子式为国药集团化学试剂有限公司; 考马斯亮兰蛋白测试试剂盒、超微量酶测试盒、 试剂盒南京建成生 物工程研究所 ..实验动物 试验用鱼为观赏型红鲤,体长,试验前经筛选并驯养以上,自然 死亡率低于%,驯养期间每曰定时投颗粒饵料。试验用水为曝气后除氯的自来 水,实验水温控制在~。, 为.一.,溶解氧大于 /,总硬度为.~.德国度,水质符合渔业水质标准 .。试验前开始禁食,选择活动性强的健康鲤鱼作为试验 用鱼。 ..实验装置 实验装置为容积为的有机玻璃鱼缸,共 个,用充氧泵向鱼缸曝气供氧。 ..实验方法: 急性毒性试验 预实验 首先,配成/的一受试母液,再根据需要稀释成所需的试验浓 度。采用二甲亚砜:丙三醇::【,并用超声使其更好 地溶于有机溶剂中有机溶剂含量不超过/。然后,根据试验溶液浓度和试验溶 液体积,将所需储备液加入到鱼缸中,用玻璃棒搅匀后,配制成个浓度梯 度的试验用水:/,/,/,/,空白对照和有机溶剂对照, 缝懋 东勒:鞭士学位论文 试验时间为小时,每个鱼缸放条鱼。 目的和结果:确定了一对鲤鱼的%致死的最低浓度和不引起死亡的 最大浓度:/和/。 正式试验 以一对鲤鱼的%致死的最低浓度和不引起死亡的最大浓度,按等 对数间距设置个试验浓度组、一个溶剂对照组及一个空白对照组,每组尾鱼, 每个浓度设两个平行,染毒。实验采用静态换液法,每天更换/试验液。查 数内鱼死亡的数量,并及时清除死鱼。本试验采用图解法求出。 慢性毒性试验 慢性试验浓度设置分别为/、/、/、/四个浓度 组,本文为方便采取近似浓度,分别取./,/,./,/。每个 浓度设两个平行样,另加空白对照和溶剂对照共组。选择体质健壮的受试鱼 尾放入受试液。每天清除排泄物次,周期为天,分别在,,, ,,时分别杀条鱼快速杀鱼取特定组织, 称重并与生理盐水混合进 行匀浆,分别测定、酶活性。具体操作如下: 从不同目标物浓度的鱼缸中各取两条试验鱼,将其砸晕,用滤纸滤干其表面 后, 快速解剖取鲤鱼肝脏,合并肝组织,在?生理盐水中漂洗出去血液, 置于滤纸上拭干后称重,放入小烧杯中; 用移液管量取预冷的生理盐水,生理盐水的体积总量为组织块重量的倍。 先用移液枪取取总量的/的生理盐水于烧杯中, 用眼科剪刀快速剪碎组织 块此操作过程在冰水浴中进行; 将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中,再将剩余的/生理盐水冲洗残留在烧杯 中的碎组织块,一起倒入匀浆管中进行匀浆,左手持匀浆管将下端插入盛有 冰 水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次,充 分研磨至组织匀浆化; 将制备好的%匀浆用离心机/左右离心分钟,测试 酶,只需转/分,离心分钟,离心好的匀浆取上清弃下层沉淀。 采用试剂盒测定上清液中的蛋白质含量、酶和酶活性,测试方法 为比色法操作按试剂盒说明书进行。的单位为/,定义为: 每豪克血红蛋白或每克组织蛋白中过氧化氢酶每秒钟分解吸光度为 .~.的底物中的过氧化氢相对量。中,规定每小时每毫克组织蛋白 的组织中酶分解产生无机磷的量为一个酶活力单位。麟 东华煳畔撇 .实验结果: ..急性毒性试验 在一之间设个浓度组,各组剂量按等比级数排列,公比 :/.。试验结果如表.所示。 本试验采用图解法求出,剂量效应曲线方程为..,为垮 暴露浓度,为死亡率%。由此得出:%死亡率对应的浓度对数为., ?./。 表.急性毒性试验结果 . ..慢性毒性试验 慢性试验浓度设置分别为./,/,./,/四个浓度组, 每个浓度组设两个平行,另设空白对照和溶剂对照共组。分别在,,, ,,时取样,测定其肝脏、酶活性,染毒后均以同期的对照 组样品作为对照。 ...十溴联苯醚对鲤鱼肝脏酶活力的影响 不同暴露浓度一对鲤鱼肝脏活性随时间变化如图.所示。空白 对照组和溶剂对照组的鲤鱼离体肝脏组织中活性值为.?./。同 对照组相比,在不同暴露浓度的作用下,鲤鱼离体肝脏组织中的 活性的变化具有明显的剂量一效应关系。暴露,,时活性表现为依赖 性上升,第,,呈现先上升后下降的变化趋势。 从时间一效应关系上看,每个暴露浓度组都呈现先上升后下降的变化趋 势,并且伴随着暴露浓度增高,活性上升和下降幅度都增大的现象。最高浓 度暴露组在第天时,活性达到最大. /,随后活性迅速下降, 在第降低到正常水平值以下. /。其他浓度组均在第,活 性达到最大。在第,./浓度组值降至正常值。 】撼学 ???”’.【‘二田山、,, 东华大学硕士学位论文 图. .不同暴露浓度下鲤鱼肝脏中的活性 . 一 当.与肝脏组织接触后,肝脏组织受攻击而产生活性氧自由基, 从而引发脂质过氧化作用,生成脂质过氧化物,导致氧化应激。与都 是生物体内抗氧化防御系统中的关键酶类,可以有效地清除体内过多的活性 氧, 维持细胞内总量的相对平衡,从而防止细胞受到氧化损伤。因此酶也 是细胞受到污染物胁迫而产生氧化损伤的重要标志物【。已有的离体生物测 试研 究表明,.胁迫可导致不同类型细胞的氧化损伤,.可以诱导翡翠 贻贝 活性先是受到明显的诱导作用,之后随胁迫时间延长被 显著性抑制【,李祥掣得出.染毒对成年雄性大鼠的睾丸组织和对雌性 大鼠卵巢均具有一定的脂质过氧化损害,】的研究表明.暴露可以提 高大鼠海马神经元细胞中活性氧含量,显著抑制活性,产生明显的氧化损 伤。本研究的结果显示,.对鲤鱼肝脏细胞活性表现出较为明显的 剂量或时间依赖性效应,.可引起鲤鱼肝脏细胞的氧化应激,高剂量的 .的长时间暴露可导致活性显著下降,提示细胞出现氧化损伤, 这与上述离体生物测试的结果基本一致。 在暴露前期,各暴露浓度组对活性有不同程度的诱导现象,呈现剂量 依赖性升高,说明.胁迫导致鲤鱼肝脏内激发了大量的自由基,从而诱导 的表达,来清除肝脏中过量的,以保护肝脏细胞免受氧化损伤。暴露 的下 后期,活性表现为下降,下降幅度与化学物质的暴露浓度有关, 降体现出因抵御外源亲电基团的氧化而使组织或细胞自身的酶的消耗,且这种消 耗己超越了自身可调节范围,间接地反映出细胞损伤的程度。 图.显示不同暴露浓度组,酶活性都在不同时间达到最高值后开始降 低,其中最高暴露浓度组对的诱导活性最先达到最大,之后降低速度最快, 由./降至. /。在第,酶的活性降到正常值的.%,说 明对肝脏细胞造成的氧化损伤是不可恢复的。.浓度组,试验后 期酶活性有少量的升高,其他浓度组酶的活性仍然处于下降趋势,但并 没有下降到正常值以下,由于试验时间有限,尚不能确定其造成的氧化损伤是否 可恢复。 由此可见,各个暴露浓度组的一均可引起鲤鱼肝脏中酶活性的 变化,变化的整体趋势为先诱导后抑制,体现在图中即为先升后降。各个暴露浓 度组均对肝脏细胞造成了不同程度的氧化损伤,最高浓度组造成的氧化损伤不可 恢复。 ...十溴联苯醚对鲤鱼肝脏,心.酶活力的影响 不同暴露浓度一对鲤鱼肝脏,活性随时间变化如图.所 示。空白对照组和溶剂对照组的鲤鱼离体肝脏组织中活性值为.. //。同对照组相比,在不同暴露浓度的.作用下,鲤鱼离 体肝脏组织中的活性的呈现激活趋势。暴露,后活性表现为剂量一 效应关系,之后呈现先上升后下降的变化趋势。 研究不同的十溴联苯醚暴露时间对鲤鱼肝脏,酶活力的影响,由 时激活作用达 图.可见,随着暴露时间的延长,,.酶活性,在 时,激活程度开始 到最强, 前呈现明显的时间一效应关系,当暴露时间? 降低,最后趋于稳定。曩熟量 六删,代.【薯田。一, 东华大学硕士学位论文 图. 不同暴露条件下鲤鱼肝脏中的活性 一 . 矿,.酶是生物体内重要的代谢酶之一,是镶嵌在膜上的一种蛋白 酶,也是膜上主动转运离子泵的重要组成部分。浓度较低或暴露时间较短时 .对酶具有诱导作用,表明肝脏细胞膜受到损伤,影响到体内的离 子平衡。随着暴露浓度增加或暴露时间的延长,酶活性又开始下降,可推测肝 脏 组织损伤较重,导致细胞膜的生理功能减弱,细胞体内的能量运输阻断,、 泵运转减慢。但是在暴露后期,各个暴露浓度组对应的酶活性都趋于稳 定,均大于正常值,说明酶仍处于激发状态,并且达到了一定的平衡,说 明肝脏细胞膜受到虽然受到了损伤,但是可以通过自我调节得到恢复。 .小结 本章以体外接触的方式来研究.对鲤鱼的毒性效应。通过生物酶指 标酶,/酶的活性变化来指示.对鲤鱼的毒性效应。 通过急性毒性实验,得出.对鲤鱼的为./。 通过慢性实验,得到不同.暴露浓度和不同.暴露时间 对鲤鱼肝脏内酶和/.酶活性的影响。结果表明,酶和 /.酶活性先受到诱导升高,后受到抑制降低。各个暴露浓度组均对 肝脏细胞造成了不同程度的氧化损伤,高浓度组/造成的氧化损伤不可 恢复;各个浓度组对肝脏细胞膜造成了损伤,但是通过细胞的自我调节可以 恢 复。 第三章一对大型蚤的毒性研究 .引言 大型蚤属甲壳纲、鳃足亚纲的枝角类浮游生物,是水生食物链的一环。它 体积相对较大,是鱼类的重要饵料,因而在有食肉脊椎动物存在的环境中难 以 生存。蚤类在生长过程中有脱壳现象,从雌蚤刚生下的幼蚤为第一龄,以后每 脱 壳一次壳增加一龄,经历.次脱壳就变成成体,并开始怀卵。当水温及其他外 界条件合适时,幼蚤在大约~天开始产下一代幼蚤,最高生殖量为多个, 一般为个。 大型蚤对许多种毒物的敏感性比鱼高,在受污染的水体中也很难发现大型 蚤,并且尺寸小,单性繁殖,繁殖率高,生活周期短,来源广泛, 易培养, 能够忍受低的溶解氧浓度、 高的以及变化幅度很大的盐度和温度,而且生 物效应准确性也比较高,慢性毒性试验花费的时间比较长,现在有天,天 和天慢性毒性试验。最近二十年来,它更为广泛地被用作标准化的测试方法 和基本的生态毒性研究。 .大型蚤的培养 ..大型蚤的来源 ,实验室繁殖,表观健康,来自上海环境科 大型蚤 学院。 ..大型蚤的培养条件 水质 //以下的蒸馏水或去离子水以 人工稀释水用电导率 下简称水按下述方法配制。 .氯化钙溶液 将.氯化钙?溶于水中稀释至。 .硫酸镁溶液 将.硫酸镁?溶于水中稀释至。 .碳酸氢钠溶液将. 碳酸氢钠溶于水中稀释至。 .氯化钾溶液 将.氧化钾溶于水中稀释至。 各取以上四种溶液混合,稀释至。必要时可用氢氧化钠溶液或盐 酸溶液调节值,使其稳定在..。硬度为/以计, /的比例接近:,溶解氧浓度在空气饱和值的%以上。培养液每周换三 次,每天饲以斜生栅藻,幼蚤定期被分离。 水温 大型蚤的生存温度范围是~?,在以下或?以上都容易造成蚤的 死亡,最适温度是~?。在本实验室,大型蚤的培养温度控制在?, 一般在需要长期试验的时候,大型蚤是放在温度为?的人工气候箱中培养, 以保持培养的温度和试验的温度相一致。 一般来讲在到范围内都能生存,最适宜范围为..间,水 的不要波动太大。本实验室控制值在.士.。 光线 光线对大型蚤的生存是需要的,完全黑暗对蚤生存不利,本实验室利 用生化培养箱中自带的灯管,能够满足要求。 溶解氧 一般水中溶解氧保持在/以上。本实验室配制好的培养液放置一天后, 其溶解氧基本上能达到要求。 蚤密度 过于拥挤对大型蚤的生长繁殖是不利的。一般原则每个蚤要求水,但如 果想让大型蚤生长繁殖良好,升水中放入母体一般不要超过个,以 个为好。本实验室通常在的培养液中放入个母蚤。 蚤的食物 保持足够的饵料是养好大型蚤的重要条件,本实验室用自己培养的斜生栅藻 为大型蚤的食物,喂食浓度为个/,根据实验室经验为苹果绿色时的浓 度为最佳浓度。添加时以使大型蚤培养液为淡绿色即可。 其它 水深一般不宜超过。本实验室选用口径大,不是很深的培养皿作为大。 型蚤的容器。 ..斜生栅藻的培养 来源 斜生栅藻 购自中国科学院武汉水生生物所藻种库。 培养基 实验室要经常保持一定数量的斜生栅藻藻种,可采用各种适用的培养剂,本 实验 用水生号培养剂。 培养基成分配如下: 硫酸铵/ . 过磷酸钙饱和液 硫酸镁?. 碳酸氢钠. 氯化钾. 氯化铁%沏/. 土壤浸出液. 培养条件 斜生栅藻可在流动通气条件下连续培养,用三角瓶,装一 培养液,接种藻种使成淡绿色。瓶口加松软棉团以防污染,温度在土?,利 用生化培养箱中自带灯进行光照即可。光照比:。每天摇动~次,经几天 培养后藻液变为深绿色。藻种要经常转接,以防止老化。转接的时间视藻种 生长 的情况而定,一般每周~次,藻液发深绿色即要转接。老化藻在显微镜下可 明显见到聚集成团的藻群、色素变黄,摇动振荡后,仍出现大量沉淀。 .蚤类毒性试验 ..仪器设备: 溶解氧测定仪;仪水硬度计;计; ..试验程序: 试验用水:人工稀释水同上 受试物溶液的配制 配制/的.储备液,采用二甲亚砜:丙三 醇::,并用超声使其更好地溶于有机溶剂中。有机溶剂含量不超过 下保存。 /,由于.易降解,故受试母液现用现配,储备液放在 受试生物 ,选用实验室条件下培养代以上的、出生~ 大型蚤的幼蚤为试验蚤。试验蚤应是同一母体的后代。 试验操作 试验操作及试验过程中蚤类不能离开水,转移时要用移液管。 大型蚤毒性测试按照国家标准《水质物质对蚤类大型蚤急性毒性测定方法》 进行, 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 大型蚤和蚤类累计活动抑制数,中间不喂食。 ?预实验:分别配制/,/,/,/的溶液,用 小烧杯,每个烧杯受试液,个幼蚤,小时后观察大型蚤死亡个 数.找出被测物使%大型蚤运动受抑制的浓度和最大耐受浓度的范围 ,然后在此范围内 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 出正式试验各组的浓度。采用停止游泳活动作为蚤 类中毒死亡的判别标准。 ?正式试验:理论上正式试验应该根据确定的使蚤类全部产生活动抑制浓度 和 最大耐受浓度,以几何级数设置个浓度组进行,然而根据以上预实验数据,可 以 看到.急性毒性很小,不足以引起大型蚤死亡。因此对大型蚤的急性毒 性试验正式试验进行了简化。 分别配制/,/,/,/的溶液,另设溶剂对 照和空白对照,溶剂对照组内溶剂和实验组溶剂最高浓度相同,最高浓度为 /,空白对照装相等体积的稀释水,试验用烧杯或结晶皿,装 试验液,置蚤个。每个浓度设个平行。实验期间不要喂食。试验温度在 ??。稀释水在加入到受试物中之前曝气。 试验开始后应于、、定期进行观察,记录每个容器中仍能活动的水 蚤数,测定~%大型蚤不活动或死亡的浓度范围,并记录它们任何不正常 的行为。最好出现、%、%、%蚤类抑制的试验结果。 ?大型蚤慢性毒性试验黝 东华煳畔撇慢性毒性试验参考 . 【】。设定/,/,/,./浓 度.试验用的小烧杯,装试验液个蚤龄的小蚤,每个浓度梯 度设个平行。溶剂对照组内溶剂和实验组溶剂最高浓度相同,最高浓度为 /,对照组内装相等体积的稀释水。每天更换试验液并喂食斜生栅藻。记 录大型蚤第一胎产蚤时间、第一胎产蚤个数、胎数、产蚤总数及母蚤死亡数。 试 验周期为. ?质量保证和质量控制 试验结束时,试验溶液中的溶解度浓度应高于空气饱和值的%。 试验结束时,对照组中,活动受抑制蚤数应少于%。 受试物浓度不能低于规定浓度的%。 定期测定参比物的。分析纯重铬酸钾的小于./,蚤敏感 度符合要求。 .结果和讨论 ..急性毒性试验 根据上述标准方法,得出一对大型蚤的急性毒性预试验结果为 每个浓度组都没有大型蚤死亡。 根据以上预实验数据,可以看到.急性毒性很小,不足以引起大型 蚤死亡。因此对大型蚤的急性毒性试验正式试验进行了简化。分别配制/, /,/,/的.试验液进行试验。试验持续小时,期 间每天测溶解氧,所有浓度组溶解氧都保持在/以上。试验结果显示: 内没有大型蚤活动受到抑制。由于.在水中溶解度小于. /,为使其 更好的溶解在水中,本试验中已经采用有机溶剂并用超声波助溶,故试验浓 度一 般不能大于/。在