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维生素B12缺乏检测方法的研究进展.doc

维生素B12缺乏检测方法的研究进展

王子熙魔法袋
2017-10-05 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《维生素B12缺乏检测方法的研究进展doc》,可适用于综合领域

维生素B缺乏检测方法的研究进展国外医学卫生学分册年第卷第期维生素B缺乏检测方法的研究进展高美哲综述黎海芪审校(重庆医科大学附属儿童医院,重庆)摘要:诊断维生素B:(VB:)缺乏症经典的方法主要依赖血液系统出现巨幼红细胞性贫血,或者依据中性粒细胞分叶过多诊断轻度VB:缺乏近年由于实验室技术的发展出现了新的诊断亚临床VB:缺乏的检测方法本文综述了诊断VB:缺乏的检测方法及近年来的研究进展关键词:维生素B:缺乏诊断中图分类号:RR文献标识码:A文章编号:()血液系统病变和神经系统病变是维生素B:(VB:)缺乏的典型临床表现但是近来典型症状已较少见,非典型性VB:缺乏的病例却屡有报道…儿童VB:缺乏首发症状常为神经系统改变而血液系统改变不典型因此发展新的更为敏感,精确的VB:检测方法,对早期诊断治疗十分关键,尤其对婴幼儿健康更重要血常规及血涂片检查尽管多种因素可以引起巨幼红细胞性贫血,然而外周血红细胞巨幼变最常见的原因仍然是VB,,缺乏血常规与血涂片是诊断VB缺乏性贫血最基本,最常用的方法,临床上广泛应用巨幼红细胞贫血血涂片中可见红细胞大小不等,以胞体直径和厚度较正常为大和中央淡染区不明显的大红细胞多见也可见一些异形(如泪滴状,碎片样)红细胞巨幼红细胞贫血时红细胞计数可减少或正常,红细胞数的减少比血红蛋白量的减少更为明显网织红细胞计数常减少中性粒细胞数和血小板数常减低中性粒细胞变大有分叶过多现象,可见到以上的中性粒细胞有个以上的核分叶中性粒细胞分叶过多现象可出现在骨髓尚未出现巨幼红细胞之前,因此有早期诊断意义巨幼红细胞性贫血时通常平均红细胞容积(MCV)fl,平均红细胞血红蛋白量(MCH)fl,但轻度VB:缺乏,VB缺乏伴有收稿日期:修回日期:作者简介:高美哲,女,硕士研究生,研究方向:儿童营养审者简介:黎海芪,女,教授,研究方向:儿童营养铁缺乏或地中海贫血,红细胞因严重的巨幼变而破碎时可掩盖VB:缺乏引起的巨幼变,MCV可正常甚至降低年Fine等通过对血清VB:水平检测发现仅依据巨幼细胞性贫血来诊断VB:缺乏可能将漏诊的病人提示该方法特异性差,尚应做进一步检查才能确诊骨髓象骨髓涂片可为VB:缺乏的诊断提供重要的实验室依据巨幼红细胞性贫血时骨髓增生明显活跃,以红细胞系增生为主,各期幼红细胞均出现巨幼变,表现为胞体变大,细胞核的发育落后于胞浆这是因VB:或叶酸缺乏引起四氢叶酸减少或利用障碍导致DNA合成减少所致骨髓涂片还可见到大的并有胞浆空泡形成的中性粒细胞,巨核细胞的核有过度分叶现象虽然骨髓改变发生较早,但骨髓检查创伤性较大,病人难以接受,不宜用于早期诊断脱氧尿苷抑制实验叶酸和VB:以辅酶形式参与脱氧尿苷(deoxyuridine)合成DNA的代谢过程当叶酸和,或VB,缺乏时合成过程受阻外源性脱氧尿苷进入正常骨髓细胞中胸苷酸的从头合成途径(denovopathway),同时抑制了胸嘧啶(H标记)转变为DNA的补救合成途径(salvagepathway)当叶酸或VB:缺乏时,四氢叶酸缺乏或者利用障碍,脱氧尿苷酸转变成胸苷酸的从头合成途径受阻,因此外源性脱氧尿苷就不能抑制补救合成途径,胸嘧啶(H标记)可以国外医学卫生学分册年第卷第期转变为DNA叶酸缺乏病人给予任何形式的叶酸(叶酸,甲酰四氢叶酸,甲基四氢叶酸)都可以纠正上述改变而VB缺乏时只有给予叶酸和(或)少量VB:才能纠正上述改变,但给予甲基四氢叶酸不仅不能纠正甚至可能加重异常,这是因为VB缺乏使甲基四氢叶酸去甲基障碍,体内叶酸循环受阻体内核酸合成和蛋氨酸合成之间存在一种协调关系,甲基叶酸捕获假说认为VB缺乏时,补充大剂量叶酸可以为核酸合成和细胞增殖提供必需的辅酶,因而VB缺乏时给予叶酸能纠正脱氧尿苷抑制实验此方法在h内即可得到结果,并且可鉴别叶酸或VB缺乏年Carmel等提出脱氧尿苷实验异常出现在骨髓巨幼变和贫血之前,因此脱氧尿苷抑制实验具有早期诊断意义但该方法的放射性污染限制了临床应用血清VBl测定有些病人血清VB已明显降低却无或仅有轻微的临床症状】,可见以临床症状诊断VB缺乏不很可靠血清VB:测定被认为是判断VB:缺乏较为敏感的方法测定血清VB有多种方法,主要包括微生物学方法,高效液相色谱法(HPLC),放射免疫法(RIA),化学发光免疫法(CLIA)微生物法利用生长与环境中的VB浓度相关的微生物来检测样本中VB的量,如小眼虫(Euglenagracilis)和菜希曼氏乳杆菌(Lactobacillusleichmannii)该方法虽然结果比较精确可信,但是需要h微生物孵育期微生物方法还常用来检测药物对微生物生长的抑制作用,即向待测样本中加入一定量的外源性维生素,检测微生物的生长情况来判断药物的抑制作用h微生物孵育过程中对微生物生长产生的乳酸进行氢氧化钠滴定可以提高微生物检测的精确性高效液相色谱法根据层析原理利用高效液相色谱仪对样本进行分析该方法虽然分辨率高,重复性好,但仪器较昂贵此外血清VB含量低且为水溶性导致样品萃取困难,还需要步骤繁琐的梯度洗脱鉴于此该方法已被RIA所取代目前国内外不用高效液相色谱法单纯检测血清VB,而是利用高效液相的分离能力分离VB的亚型及VB类似物,结合放射免疫法定量测定放射免疫法与化学发光免疫法放射免疫法与化学发光免疫法简单快速,可同时测定血清中的VBi和叶酸因正常范围较大,各实验室应有自己的标准年Zittoun等对名有恶性贫血且血清VBn~L(微生物法)的患者进行放射法和化学发光免疫法测定,发现有一患者血清VB在正常范围但随着化学发光法不断改进,尤其是把纯化的内因子作为连接蛋白引入后,此方法已具灵敏度高,特异性强,重复性好,测定范围较宽,试剂稳定性好,操作简单,易于自动化以及无放射性污染等优点,是取代放射免疫分析法的首选方法之一,已成为临床微量生物活性物质定量测定的常用方法年Hvas等"提出检测与转钴蛋白结合的VB血清全反钴胺素(holoTCI)来代替血清VB浓度的测定因为holoTCI是体内VB的活性型,可被组织利用,因此该方法被认为更敏感且有较高的特异性但年Nilsson等认为holoTCI'虽然与血清VB有很大相关性,临床意义却不比后者大,不能代替血清VB的测定因此关于血清holoTC测定的临床意义还需进一步研究血清代谢物测定VB以辅酶的形式参与半胱氨酸转化为蛋氨酸,甲基丙二酰CoA转化为琥珀酰CoA的反应当vB缺乏时这两个反应受阻,代谢底物堆积血清总同型半胱氨酸(totalhomocysteine,tHcy)和血清甲基丙二酸(methylmalonie,MMA)是辅助诊断VB缺乏的最常用的代谢物检测血清中tHcy和MMA的量可以用来判断体内VB水平因叶酸缺乏时血清tHcy也增高,但MMA多正常,所以tHcy特异性较MMA低血清中tHcy和MMA增高对vB缺乏的诊断有较高的敏感性年Savage等对例VB,缺乏者进行血清测定发现血清tHcy和MMA都增高者占年Saperstein等u叫研究发现例VB,缺乏性多发性神经炎患者血清tHcy和MMA已明显增高Clarke等认为有些血清VB,轻度降低的老年人,其血清MMA已明显增高,提示代谢物国外医学卫生学分册年第卷第期测定较血清vB:测定敏感Savage等发现血清代谢物测定还可以作为判断VB补给量是否充足的标准鉴于肾功能不全或肾衰竭时代谢物排泄障碍,血清代谢物测定不能用于肾功能不全或肾衰竭的患者尿甲基丙二酸测定虽然很多情况下仍测定血清VB但是血清VB并不总是反映组织中的水平,可出现假阳性尿甲基丙二酸(MMA)由肾排泄,且尿中浓度较高,所以尿中MMA可以敏感地反映VB功能性缺乏或不足,被认为是诊断VB缺乏的金标准n此法样本获取方便,易被患者接受,适合用作流行病学人群调查Norman等n用气相色谱质谱法(GCMS)测定老年人尿中MMA水平,发现有高MMA老人血清VB,正常Mccann等n利用稳定同位素气相色谱质谱分析法测定滤纸上尿样本中MMA,此方法较传统的GCMS法有敏感,快速,简便,经济等优点,可用于任何年龄组,临床上具有早期诊断意义但气相色谱质谱联机价格昂贵,普遍使用受限诊断性治疗对高度疑诊VB缺乏的患者,可先给予一定量的VB进行诊断性治疗如果VB治疗有效,亦可诊断VB缺乏VB,治疗有胃肠外和口服两种途径但恶性贫血患者伴有严重VB缺乏,口服效果不明显年Kuzminski等提出大剂量口服VBl(,lOttg)治疗恶性贫血有效,提示VB缺乏者口服VB有治疗效果但是由于口服剂量和疗程尚未标准化,所以口服治疗一般不用于恶性贫血的诊断性治疗因此对疑诊VB缺乏的患者通常采用肌肉注射进行诊断性治疗确定病因的检查多种原因可导致VB缺乏,不同的病因要给予不同的治疗方案Schilling实验和修正Schilling实验分别给患者口服放射性标记的晶状VB和蛋白结合VB测定尿中VB,排出量,评价患者吸收口服VB的能力恶性贫血患者吸收晶状VB,和结合VB,的功能均异常如果前者正常而后者异常(即仅结合VB吸收异常),可能是VB,:与食物蛋白解离障碍而内因子分泌正常约恶性贫血患者血清中出现内因子自身抗体(IFA)n因此测血清中IFA也成为恶性贫血的诊断方法此外约以上的恶性贫血患者胃液中可检测到IFA而血清未检测到IFA,胃液中抗体类型为IsA型,不同于血清中的IgG型对于怀疑为先天性因素导致VB:缺乏患者要进行遗传学分析,确定先天性缺陷,明确病变基因测定血清转钴蛋白水平可以确定体内VB转运能力测血清壁细胞抗体有助于明确免疫性疾病综上所述,VB缺乏的各种传统和先进的诊断方法给临床早期诊断提供了有力的依据先进检测技术有利于亚临床或非典型病例的诊断,给临床疾病的预防和治疗提供条件鉴于儿童VB缺乏常以非典型表现为主,所以探讨更敏感,特异,经济有效的检测方法将有利于儿童VB缺乏症及先天性遗传病的防治参考文献:AhnTB,ChoJW,JeonBSUnusualneumlocalpresentationsofvitaminBdeficiencyJEurJNeurol,,l():RasmussenSA,FernhottPM,ScanlonKSVitaminBdeficiencyinchildrenandadolescentsJJPediatr,,:ZittounJ,ZittounRModemclinicaltestings【egiesincobalaminandfolatedeficiencyJSeminHematol,,:FineEJ,SoriaEDMythsaboutvitaminBdeficiencyJSouthMedJ,,:闻芝梅,陈君石(主译)现代营养学(第七版)M北京:人民卫生出版,CarmelRReversalbyeobalamintherapyofminimaldefectsin"thedeoxyufinesuppressiontestinpatientswithoutanemia:furtherevidenceforasubtlemetaboliccobalamindeficiencyJJLabClinMed,,:HvasAM,NexoEHolotranscobalaminasapredictorofvitaminBlstatusJJClinChemLabMed,,():NilssonK,IsakssonA,GustafsonL,etaClinicalutilityofserumholotranscobalaminasamal'kerofcobolaminstatusI夕臣堂jinddeflypatientswithneuropsychiatricsymptomsJClinChemLabMed,,():SavageDG,LindenbaumJ,StablerSP,etaSensitivityofseFummethylmalonicacidandtotalhomoeysteinedeterminationsfordiagnosingcobalaminandfolatedeficienciesJAmJMed,,:SapersteinDS,WolfeGI,GronsethGS,etaChallengesintheidentificationofcobalamindeficiencypolyneuropathyJArchNeur,,():ClarkeR,RefsumH,BirksJ,etaScreeningforvitaminBlandfolatedeficiencyinolderpersonJAmJClinNutr,:MatcharDB,McCroryDC,MiUingtonDS,etaPerformanceoftheseFumcobalaminassayfordiagnosisofcobalamindeficiencyJAmJMedSci,,:MccannMT,ThompsonMM,GueronIC,etaMethylmalonicacidquantificationbystableisotopedilutiongaschtomatographymassspectrometryfromfilterpaperurinesamplesJClinChem,,(pt):NormanEJ,MorrisonJAScreeningddeflypopulationsforcobalamin(vitaminBl)deficiencyusingtheurinarymethylmalonicacidassaybygaschromatographymassspectrometryJAmJMed,,:KuzminskiAM,DelGiaccoEJ,AllenRH,etaEctivetreatmentofcobalamindeficiencywithoralcobalaminJBlood,,:GueantJL,SailA,AimoneGastinI,etaAutoantibodiesinperniciousanemiatypeIpatientsrecognizesequenceinhumanintrinsicfactorJProcAssocAmPhys,,():RosenblattDSWhiteheadVMCobalaminandfolatedeficiency:acquiredandhereditarydisordersinchildrenlJSeminHematol,,:

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