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包涵体蛋白的NI柱纯化SOP(水平摇床法).doc.doc

包涵体蛋白的NI柱纯化SOP(水平摇床法)&#…

丁一梅
2017-10-22 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《包涵体蛋白的NI柱纯化SOP(水平摇床法).docdoc》,可适用于综合领域

包涵体蛋白的NI柱纯化SOP(水平摇床法)doc文件类别:标准操作文件标题:可溶蛋白的NI柱纯化颁发部门:CSDII原核编码:版本:第一版页数:共页起草人:审核人:QA审阅:批准人:生效日期:分发部门:YCA项目部QCIHC项目部公共平台CRO项目部EBI项目部QA部(质保部)人力资源部商务部财务部综合管理部其他:包涵体蛋白的NI柱纯化(摇床法)目的:纯化包涵体蛋白。范围:适用于包涵体蛋白的纯化规范和操作要领。责任者:原核部技术人员。程序:实验器材与试剂mlml试剂管镍柱填料BindingBufferElutionbufferXPBSM尿素溶解液封存液(酒精)水平摇床架子和漏斗以及滤布程序从冰箱取出含有镍柱填料的ml离心管如果没有可以自己做(做法:取ml的填料加到ml离心管中即可)将滤布用三折法折好放到漏斗中将离心管中的填料倒入滤布里过滤用ml左右的XPBS将滤布里的填料洗到ml离心管中常温水平摇床摇min然后过滤用ml的Elution清洗柱子摇床分钟(新柱子的话这步可省略)过滤,用ml的Bindingbuffer清洗平衡柱子摇床分钟过滤上样摇床分钟至一个小时过滤此时的滤液要收集作为穿透然后用ml的M尿素溶解液(包涵体溶解液)清洗柱子,摇床分钟(洗脱杂蛋白)过滤用Elutionbuffer洗脱结合在亲和柱上的蛋白分管收集第一管用ml的Elution洗脱水平摇床分钟收集然后第二次用ml的Elution水平摇床分钟收集收集完毕用ml的Elution清洗柱子摇床分钟过滤用mlMNaOH水平摇床min(切勿摇太久)过滤用mlXPBS清洗平衡水平摇床分钟过滤用ml的酒精封存冰箱保存纯化所得蛋白和穿透各取µL留样进行电泳鉴定。蛋白保存穿透如当日需再次使用则保存否则度保存直至项目结束或者电泳显示无目的蛋白残留后可丢弃。

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