下载
加入VIP
  • 专属下载特权
  • 现金文档折扣购买
  • VIP免费专区
  • 千万文档免费下载

上传资料

关闭

关闭

关闭

封号提示

内容

首页 鸡Zong菌染色体DNA的研究

鸡Zong菌染色体DNA的研究.doc

鸡Zong菌染色体DNA的研究

杨清苦
2017-12-21 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《鸡Zong菌染色体DNA的研究doc》,可适用于战略管理领域

鸡Zong菌染色体DNA的研究西兰’’,()Io’WUJCMS…”……一如一Db鸡姒菌染色体DNA的研究v,堡!!业赵呈裕万谦jfIf基础医学奠医学生物学与蛔囊生鞠学教研童(戚鄯)}臣学分子生物学研究童内毫I’在鸡土且(TermlamWces抽舢nH”)壁体i点体探层培养成功的基硇上为进一步对其染色体进行分析采用i点氯研磨,SDS和蛋白冀K消化的方法鼠i点体培养的璃土且壁体申提取出高分子量的策色体DNA,并用紫外嗳收光谱,麓腔电诛和限翻冀协等方法进行了鉴定通过T值推算出砖土I染色体DNA的Gc古量为美t调璃土I壁体染色硝DNA一,J近年来基因工程技术已经深入到遗传背景清楚的丝状真菌人们探讨应用基因工程技术于工业真菌作为育种的兴趣日增,不断尝试利用丝状真菌作为寄主生产外泌医药,工业蛋白I我们在成功地从野生鸡土I菌分离出一种可以用于工业发酵生长的菌株的基础上,对该菌株的染色体DNA进行分离和鉴定,并测定了T值和GC台量为今后开展鸡土jl菌的基因克隆,分子杂交,构建基因文库,外源基因表达及原生质体融台中分子标记的建立等奠定了基础I材料与方法I材料鸡H菌苗丝体由本室液体发酵制备菌种由本室赵呈裕等从野生苗中分离,纯化,保存并通过鉴定方法I茵丝体培养与收集接种鸡土I菌种至液体马铃薯葡萄糖培养基(PD)中,”C,rmin旋摇培养小时,得一级种于液将一级种子液以,O(vv)的接种量转接四川省科薯科研基盒费助研究生,现在广百卫生蕾理干部学院(膏宁)},裢ml培养基,在上述相同条件下培养小时,使鸡土I菌苗丝体生长至对教生长期后期用双层无菌纱布过滤培养液,用无菌水洗涤菌丝体至颜色发白为止,滤纸压干染色体DNA的提取菌丝体至研钵中加液氮磨成粉末状移入ml消毒离心管中,加入裂解缓冲液(mmolLTdsHCI,pH}molLNaCImmolLEDTA,pH}SDS(WV),蛋白酶Kl~tgm)~水浴保温消化小时,放置至室温后,加入体积的饱和NaCa,彻底混合分钟,,离心分钟,取上清液加倍体积的预冷无水乙醇沉淀DNA,慢慢转动离心管,使絮状DNA分子上浮后,用细针轻轻挑出乙醇洗葫}一次,控干酒精,真空干燥,~SPa分钟左右溶于适量TE中I限制性酶晦切染色体DNA酶切反应按Sambrook等条件进行I璋脂糖凝胶电泳用水平板凝胶电泳测定染色体DNA及限制性酶切结果琼脂糖凝胶浓度为ov电泳约小时,nm紫外光观察并照相紫外吸收光谱测定紫外吸收光谱测定参照LeonardGDavis等的方法进行期张明等鸡H曹染色体DNA的研究uV一分光光度计测定染色体DNA的T值测定参照林万明’的方法,略加改进将DNA样品溶于×SSC(mmolLNaCI一mmolL柠檬酸钠,pH)中,固定波长rim,在连续升温中测定每一温度的吸光值,根据测定结果绘出曲线结果鸡jl茁染色体DNA的分离鉴定结果使用本实验方法,获得的DNA产量约达菌丝体湿重的电泳结果表明,所得染色体DNA完整,为均一的DNA带,纯度较高,无RNA污染(图)紫外吸收At*A”o比值为I田砖Li菌晕色体DNA尊瞄簟棘电诛田谱FigIAgarmegel*leerraphereslsofchrommDNA的’r值和Gc含量热变性扫描曲线完成后,用各吸光度乘以相应温度的相,对膨胀体积进行校正,绘成DNA热变性曲线,如图从热变性曲线中知鸡土jl菌的染色体DNA的T值为,应用公式(Gc)=(一)×计算染色体DNA的Gc含量为Temperature()田砖I簟色体DNA播生性曲垮nlCr仲ottkr一d|tInt’峨ot”吨r哪以一”feb’omemmalDNA讨论目前,已经建立了多种在丝状真菌中提取DNA的方法这些方法基本原理是相似的,即一是通过机城的或酶解的方法破坏细胞壁}二是通过去污剂将原生质体或细胞核融解三是通过酚,氯仿或梯度离心去除蛋白质等成份本实验采用了经典的酚和氯仿法及经改良的不使用酚,氯仿的抽提方法两种方法相比较,改良的方法较经典的酚和氯仿法简化了提取过程,只需一次离心,因此DNA损失较少且用细针捞取到高分子量的DNA,DNA分子不易发生断裂,同时,也减少了RNDNAT值时遇到了高T值给涮定带来的困难,即测定温度超出了紫外分光光度计的升温限值通过有关资料’了解到,DNA溶液的离子强度对其T有很大的影响,高T值的困难可以通过改变缓冲液的浓度加以解决我们尝试了由ISSC改为SSC的缓冲液进行T值测定,使温度约降低了”C,顺利地完成了T的测定本研究系首次从液体培养的鸡土且菌苗丝体中分离出大分子量的染色体DNA,并对其一些特性进行了研究,获得了一些数据,为鸡土I菌分子生物学的研究提供了重要资科,为进一步开展基因工程及分子育种研究奠定了基础参考文献蘩平彦筮状真蕾的质拉原生质雄转化和外潭基园衰达生物工蠢进展,I()I越皇谱享虹鄞雪莲苷璃土且蕾蕾堂体的藏体耀层培舞和I匕学威份分析中田用蕾IC)ISamhmokJ,FritaehEFManlatisTMolecularcloninglAlaboratorymanuandanNewYorklColdSpringHarborLaorstorylt田勇汪田蕾译分于生橱学方法长沙t朔南科学拄术出囊社#,#万孽f蛔蕾分于蕞传学分类鉴定上海,上海辩学拄木出版社I,RaanerU,BrodsPRapidpreparationofDNAfromiliamentousfngLettApplMicrobiol()lBainbridgeBWspreadburyCI,ScaliaeFG,【切一provedmethodsforthepreparationofhighmol~ulsrweightDN’Afrmlarsedsmallscaleculturesofilia一IlleIldtOUfung~FEMSMicrobiolLett()liMollerEMBahnwegGSandermannH,一aAsimplesaneflcientptotoc~foriaolationofhighmolecularwetDNAfromfilamentousfungifruitbodiesandinleeredplanrtiuuesNuclAcldRes,I()IChallenMP,MGoreAJ,CarteraDMFadhext~ctionandpudl”ieazi~offilamentousfungalDNABoTechnlque~l()IHorgenPA,ArthurRSt哪NThenucleotldesEqueneebomoogleaof”uniqueDNAsofBmtcultivatedandwildmuahr~maCanJMierobiollll刘椒属盒讨,刘檀义辱簟菇平菇棱DNA的研究用蕾,I()I(收曹,悻回)蕾{I范集寸PropertiesofChromosomalDNAofTermitomycesalbuminosusZhangMlngZhaiChaoyangZhaoChengyuWanOlanFJel~artmest口,MedicalBiolagyandCellBiology$clmolBadcMedical$ceaces(Chengdu)’,abor~aryofMoletldarBiolog~jAb|true!Ch~ornosomalDNAwasextractedandisolatedfrommyceliaTrrmitomycesallrdminosussubmergedculturegroundwiqhliquidnitrogenandtreatedwithSDSandproteinaseKThepropertiesoftheDNAwereidentifiedbyUVabsorptionrateagaro~eKword~Termltomycesalb~mlnorusMyeellumgelelectrophoresisandrestrictionendonucIeasedigestionTheTofchromosomalDNAfromTermitomcesalbuminmusdeterminedWasTheGCntentwestimattobe

用户评价(0)

关闭

新课改视野下建构高中语文教学实验成果报告(32KB)

抱歉,积分不足下载失败,请稍后再试!

提示

试读已结束,如需要继续阅读或者下载,敬请购买!

文档小程序码

使用微信“扫一扫”扫码寻找文档

1

打开微信

2

扫描小程序码

3

发布寻找信息

4

等待寻找结果

我知道了
评分:

/7

鸡Zong菌染色体DNA的研究

VIP

在线
客服

免费
邮箱

爱问共享资料服务号

扫描关注领取更多福利