深析安神补脑液去除维生素B1前后对小鼠镇静、催眠作用.doc

深析安神补脑液去除维生素B1前后对小鼠镇静、催眠作用.doc 深析安神补脑液去除维生素B1前后对小鼠镇静、催眠作用 从国外大多数流行病学调查结果来看，大约每年有33% 的人出现不同程度的睡眠障碍，并且有17%的人出现严重失眠。中国卫生部一项统计资料显示，目前，国内失眠者人数已经达到120 ,140 万，据专家估计，到2020 年，全球约有7 亿多失眠者。安神补脑液是由干姜、制何首乌、淫羊藿、大枣、鹿茸、甘草、维生素B1( VB1) 组成的复方制剂，具有健脑安神，生精补髓，益气养血的功效，用于神经衰弱、失眠、健忘、头晕等疗效显著。为进一步探讨VB1对安神补脑液镇静、催眠作用的影响，笔者对安神补脑液、不含VB1的安神补脑液以及VB1口服液在镇静、催眠方面的作用效果进行了比较，同时观察了不同工艺制备样品对小鼠脑内RNA，DNA，蛋白质合成的影响，为优化安神补脑液的制剂工艺提供理论依据，同时，促进其在临床上的合理应用。 1 材料 1. 1 动物 ICR 小鼠，雄性， 19 , 22 g，由北京市维通利华实验动物有限公司提供，动物合格证号SCXK( 京) 2012-0001。 1. 2 药物及试剂 安神补脑液( 吉林敖东延边药业股份有限公司，批号1107059) ，不含VB1的安神补脑液( 吉林敖东延边药业股份有限公司，批号1107002) ，VB1口服液( 吉林敖东延边药业股份有限公司，批号1107001) ，戊巴比妥钠( 上海化学试剂公司，批号84-06-12) ，二苯胺( 国药集团化学试剂有限公司，批号XW01223941) ，氢氧化钠( 北京鼎国生物技术有限责任公司，批号79H10205) ，三氯化铁( 天津市光复科技发展有限公司，批号2013. 06. 24)浓盐酸( 北京化工厂，批号20121005) 。 1. 3 仪器 YLS-1A 型多功能小鼠自主活动 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 仪( 济南益延科技发展有限公司) ，DY89-?型电动玻璃匀浆机( 宁波新芝生物科技股份有限公司) ，M1000 型多功能连续波长酶标仪( 美国BiotekInstruments 公司) ，HH-2 型数显恒温水浴锅( 国华电器有限公司) ，MP21001 型电子天平( 上海舜宇恒平科学仪器有限公司) 。 2 方法 2. 1 对小鼠自主活动的影响 ICR 小鼠经适应性饲养1 d 后，利用自主活动仪进行实验动物的筛选，筛选时先将小鼠置于自主活动仪内适应5 min，之后测试10 min 内小鼠自主活动次数，选择活动次数相近的70 只小鼠，按体重随机分为7 组: 正常组( 蒸馏水) ，安神补脑液高、低剂量组( 0. 1，0. 05 g?kg - 1 ) ，不含VB1的安神补脑液高、低剂量组( 0. 1， 0. 05 g?kg - 1 ) ，VB1口服液高、低剂量组( 0. 1，0. 05 g?kg - 1 ) ，每组10 只。每日按体重ig 给药1 次，连续ig 10 d。第 10 天称重，给药1 h 后，将小鼠置于自主活动仪内，再次检测小鼠自主活动次数。 2. 2 对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间的影响 ICR小鼠70 只经适应性饲养1 d 后，按体重随机分为7 组，分别为正常组( 蒸馏水) ，安神补脑液高、低剂量组( 0. 1，0. 05 g?kg - 1 ) ，不含VB1的安神补脑液高、低剂量组( 0. 1，0. 05 g?kg - 1 ) ，VB1口服液高、低剂量组( 0. 1， 0. 05 g?kg - 1 ) ，每组10 只。每日按体重ig 给药1 次，连续ig 10 d。第10 天给药后1 h，动物ip 戊巴比妥钠溶液( 65 mg?kg - 1 ) ，记录小鼠发生睡眠潜伏期和睡眠时间。 2. 3 对小鼠脑组织RNA，DNA，蛋白质含量的影响 ICR 小鼠70 只经适应性饲养1 d 后，按体重随机分为7 组，分别为正常组( 蒸馏水) ，安神补脑液高、低剂量组( 0. 1， 0. 05 g?kg - 1 ) ，不含VB1的安神补脑液高、低剂量组( 0. 1， 0. 05 g?kg - 1 ) ，VB1口服液高、低剂量组( 0. 1，0. 05 g?kg - 1 ) ，每组10 只。每天动物按体重灌胃给药1 次，连续ig 10 d。末次给药后1 h，迅速将小鼠断头处死，取脑，匀浆，提取脑内RNA，DNA，蛋白质，按Orcinol 法测定脑组织中RNA含量、二苯胺显色法测定脑组织中DNA 含量，Lowry法测定脑组织中蛋白质的含量。 2. 4 统计学分析 采用SPSS 13. 0 软件，数据以珋x ± s表示，组间比较采用t 检验，以P < 0. 05 为差异有统计学意义。 3 结果 3. 1 对小鼠自主活动的影响 安神补脑液高、低剂量组、不含VB1的安神补脑液高、低剂量组小鼠自主活动次数明显少于正常组，且具有统计学差异( P < 0. 05) ; 其他各组动物活动次数与对照组比较无显著性差异; 不含VB1的安神补脑液组与VB1口服液组比较无明显差异。 3. 2 对小鼠睡眠时间的影响 与正常组比较，安神补脑液高剂量组使小鼠戊巴比妥钠阈上剂量睡眠时间明显增加( P < 0. 05) ，不含VB1的安神补脑液高剂量组小鼠戊巴比妥钠阈上剂量睡眠时间有增加趋势，其他各组无明显差异; 不含VB1组与VB1组比较无明显差异。 3. 3 对小鼠脑组织中DNA，RNA，蛋白质含量的影响 除安神补脑液低剂量组外，其他各组脑内DNA含量明显增加，与正常组比较均具有显著性差异( P < 0. 05) ; 各组脑内RNA 含量水平波动频率较小，无明显差异; 不含VB1的安神补脑液高剂量组，VB1口服液高、低剂量组蛋白质含量明显增加，与正常组比较具有显著性差异( P < 0. 05) 。 4 讨论 失眠的治疗方法分为药物治疗和非药物治疗，在非药物治疗中可以采用心理治疗、物理治疗等，药物治疗可采用传统的中药和镇静催眠类药物。据文献报道，目前使用最多的安眠药是苯二氮卓类药物，它具有起效快，耐受性良好等特点，但是有成瘾性，而且，这类药物在延长总的睡眠时间的同时会损害睡眠的慢波睡眠和快眼动睡眠两个阶段，并不能真正改善睡眠质量。而中药在失眠治疗上具有相当大的优势，它是通过调节人体的脏腑阴阳功能，使机体恢复到正常的状态，从根本上改善睡眠质量，而且中药治疗失眠不良反应小，疗效持久，停药不反跳，无依赖性，因此，备受科研工作者的广泛关注。 动物的自主活动情况反映了中枢神经系统的功能状态，兴奋时活动次数增加，抑制时活动次数减少。因此小鼠自主活动实验是评价中枢神经系统兴奋状态的一项重要指标。本研究结果显示，安神补脑液、不含VB1的安神补脑液均可使小鼠自主活动次数减少，与正常组比较均有明显差异，而VB1口服液组小鼠活动次数与正常组比较无明显差异，且各组高、低剂量之间无显著性差异。即不含VB1的安神补脑液保留了安神补脑液具有的镇静作用。 戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠，观察各样品对其所致小鼠睡眠时间的影响，实验结果显示，安神补脑液可明显增加戊巴比妥钠所致小鼠的睡眠时间，而不含VB1的安神补脑液对戊巴比妥钠所致的小鼠睡眠时间也有增加趋势，其他各组与正常组比较无明显差异。说明不含VB1的安神补脑液保留了安神补脑液具有的催眠作用。 笔者分别采用Orcinol 法、二苯胺显色法和Lowry 法测定脑组织中RNA，DNA 以及蛋白质的含量，利用的均是特定的显色反应以及吸光度与RNA，DNA，蛋白质浓度呈比例的原理。本研究的结果显示，除安神补脑液低剂量组外，各组脑内DNA含量均明显增加; 不含VB1的安神补脑液高剂量组，VB1口服液高、低剂量组蛋白质含量明显增加，其余各组无显著性差异; 同时，各组对脑内RNA 含量影响没有显著性的差异。说明上述各样品对脑组织中DNA、蛋白质的合成有一定的促进作用。 综上所述，不含VB1的安神补脑液也具有镇静、催眠作用，疗效与安神补脑液相当，并且实验证明了不同工艺制备样品对小鼠脑组织中DNA，蛋白质合成有促进作用，对RNA 的含量无影响。在不含 VB1的安神补脑液与安神补脑液疗效相当的情况下减少了制剂成分，不仅降低了原始工艺的复杂程度，同时也大大减少了生产成本，所以本研究为安神补脑液工艺的优化奠定了基础，可促进其进一步的开发及应用。