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川牛膝与黄连轮作规范化种植规程(SOP)和川牛膝多糖提取分离技术研究(可编辑)

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川牛膝与黄连轮作规范化种植规程(SOP)和川牛膝多糖提取分离技术研究(可编辑)川牛膝与黄连轮作规范化种植规程(SOP)和川牛膝多糖提取分离技术研究(可编辑) 川牛膝与黄连轮作规范化种植规程(SOP)和川牛膝多糖 提取分离技术研究 成都中医药大学 硕士学位论文 川牛膝与黄连轮作规范化种植规程(SOP)和川牛膝多糖提取分 离技术研究 姓名:赵磊 申请学位级别:硕士 专业:生药学 指导教师:王书林 2009-05成都中医药大学 2006级硕士学位论文 摘要 论文内容分为两部分,第一为“川牛膝与黄连轮作规范化种植规 程SOP” 前作川牛膝部分;第二部分为“川牛膝多糖提取分离技术...

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川牛膝与黄连轮作MATCH_ word word文档格式规范word作业纸小票打印word模板word简历模板免费word简历 _1710825267322_3化种植规程(SOP)和川牛膝多糖提取分离技术研究(可编辑) 川牛膝与黄连轮作规范化种植规程(SOP)和川牛膝多糖 提取分离技术研究 成都中医药大学 硕士学位论文 川牛膝与黄连轮作规范化种植规程(SOP)和川牛膝多糖提取分 离技术研究 姓名:赵磊 申请学位级别:硕士 专业:生药学 指导教师:王书林 2009-05成都中医药大学 2006级硕士学位论文 摘要 论文内容分为两部分,第一为“川牛膝与黄连轮作规范化种植规 程SOP” 前作川牛膝部分;第二部分为“川牛膝多糖提取分离技术研究”。 “川牛膝与黄连轮作规范化种植规程SOP”首先对峨眉山生态地 理环境及 种植基础进行了考察,确定了峨眉山龙池地区适宜栽培川牛膝与 黄连;同时对基 地的种植环境(大气、水质和土壤)进行了检测,结果表明,基地环 境符合种植 要求;通过组织形态学的研究,找出了川牛膝和麻牛膝原植物形态和药材性状两 方面的鉴别特点;对川牛膝种子质量进行了千粒重和发芽率研究,种子千粒重为 1.42g~1.50g,发芽率为 34%;分别开展了轮作、连作和普通种植三种模式川牛 膝的出苗时间、肥料试验、两种主要病害(白锈病和根结线虫病)的比较研究, 初步得出川牛膝在峨眉龙池可以与黄连进行轮作。 “川牛膝多糖提取分离技术研究”采用水提醇沉法提取川牛膝粗多糖,确定 川牛膝粗多糖的最适提取条件为:料液比 1:15,提取温度 60?、时间 2h、提 取次数 1次,最适醇沉浓度为 85%。川牛膝粗多糖经过 Sevage 法除蛋白质 3次, H O 结合透析法除色素和小分子杂质,再分别经过 DEAE-52 纤维素和 Sephadex 2 2 G-25 分离,得到一个多糖成分 COP?-1,通过高效凝胶渗透色谱(HPGPC)法 测定 COP?-1的纯度、分子量,结果为: COP?-1纯度较高,重均 分子量为 4572.8。 薄层色谱法初步研究 COP?-1的单糖组成为 D-葡萄糖和 D-果 糖。 关键词:川牛膝 黄连 轮作 多糖 提取 2成都中医药大学 2006级硕士学位论文 Abstract The contents of this thesis can be divided into two parts,one part is” Rotation SOP of Rhizoma Cyathula and Rhizoma Coptis”, previous crops of Rhizoma Cyathula,the other part is” Study on the Extraction and Isolation Technique of Polysaccharide from Rhizoma Cyathula”Based on the investigation of the ecological and geographical enviroment and the basic planting, the town named Longchi town in the Emei County is a appropriate area to cultivate Rhizoma Cyathula and Rhizoma Coptis. According to the inspections of atmosphere,soil and water conditions,the planting base accord with all national standards.We found the difference between Rhizoma Cyathula and Cyathula capitata Wall. Moq. in the botanical morphology and characteristics by studying the histomorphology.The results on the study of the seed quality about the Rhizoma Cyathula were the followings: the 1000grain weight is 1.42g~1.50g and the seed germination rate is 34%.With the comparative studies among the three growing models of Rhizoma Cyathula,the seed germinant time 、the experiment of fertilizer and two main diseases,we preliminarily conclude that Rhizoma Cyathula is appropriate to rotate wih Rhizoma Coptis in Longchi Emei County townWith the water extraction and ethanol sedimentation technique , the optimal extraction technologies of the crude polysaccharides from Rhizoma Cyathula were obtained:one volume of homogenized slurry was mixed with 15 volume of water and extracted at 60? for 2 hours once. The extraction were precipitated by ethanol with 85% final concentration.Crude polysaccharides were eliminated protein three times by the Sevage method,pigment and low molecule substance by H O and Dialysis.Those 2 2 polysaccharides also respectively were isolated and purified by DEAE-52 cellulose column and Sephadex G-25.column,then one component was obtained,namely COP ?-1.The homogeneity and molecular weight of COP?-1 are evaluated and determined by high performance gel permetaion chromatography HPGPC,the results are as follwoings: COP?-1 is almost pure,the weight average molceular weight of COP?-1 is 4572.8. COP?-1 which is composed of D-glucose and D-fructose by the3成都中医药大学 2006级硕士学位论文 elementary study of thin layer chromatography TLC Key words: Rhizoma Cyathula Rhizoma Coptis polysaccharide rotateextracte 4成都中医药大学 2006级硕士学 位论文 申明 本人承诺:硕士学位论文 川牛膝与黄连规范化种植规程(SOP) 和川牛膝多糖提取分离技术研究 是本人在成都中医药大学攻读硕士 学位期间在导师指导下独立进行研究工作所取得的成果,无抄袭及编 造行为。该论文著作权归成都中医药大学所有。由于本人的导师(或 主要具体指导者)系外校兼职导师,并提供了该学位论文研究、撰写 的主要经费,故该论文涉及的有关知识产权等,按事先已有的约定执 行。若无约定,则同样需征得导师和成都中医药大学同意。 本人同意:成都中医药大学有权通过影印、复印等手段汇编学位 论文予以保存,并提供查阅和借阅;有权按照规定向国家有关部门、 机构送交论文及电子版,公布(或刊登)论文内容。硕士生 签名:导 师 签名:年 月 日 57成都中医药大学 2006级硕士学位论文 第一部分:前言 本课题来源为国家“十一五”科技支撑 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 项目“有效恢复中药材生产立地 条件与土壤微生态环境修复技术研究”的子课题“川牛膝与黄连轮作协同性研 究”,课题编号:2006BAI09B03,该课题要求解决的关键技术问题与国家“退 耕还林”及节约土地资源的国策有直接关系,其重大问题的攻克,对国家建设有 着极其重大的贡献。课题的研究内容包括?完成黄连与川牛膝轮作地土壤养分的 检测分析,?完成黄连与川牛膝各有效成分的含量检测分析,?制订川牛膝与黄 连轮作范化种植规程(SOP),?制订黄连与川牛膝轮作过程中毒副作用的降解 及微量元素补给 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 。由于该课题领域宽、内容多、周期长,在硕士学习阶段只 能对其部分开展研究。论文内容分为两部分,第一为“川牛膝与黄连轮作规范化 种植规程SOP”前作川牛膝部分,主要研究内容为:轮作、连作和普通种植模 式下对川牛膝的出苗时间、植株生长、病害、肥料实验的影响,初步得出川牛膝 与黄连进行轮作的可行性;第二部分为“川牛膝多糖的提取分离技术研究”,主 要研究内容为:川牛膝多糖的提取、纯化、分离和结构的初步研究。课题研究成 果既能有效地解决药农的规范化种植技术问题,又能深层次地检测轮作后川牛膝 干物质有效积累结果。 中药材质量如何达到“安全、有效、稳定、可控”这一目的,一直是中药材 种植生产中面临的主要问题。针对我国中药材生产长期存在的种质不清或退化、 产地生态环境不重视、优良品种选育工作滞后、种植不规范、采收加工粗放、重 金属、农药残留极不稳定、包装贮藏落后、质量不稳定,抽检合格率下滑等问题, 我国学者在国家中药材生产质量管理规范GAP指导下,用生物学、农学、药学 等多学科的方法和手段,已在全国各地开展了多种常用道地药材的规范化种植研 究。但中药材 GAP 研究工作的侧重点因药材品种的不同而异,最终体现在各药 材品种的规范化生产 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 操作规程SOP,Standard Operation Practice中。 川牛膝和黄连均为四川道地中药材,据调查,目前野生资源较少,大多为人 工栽培,二者均忌“连作”。两药材在传统种植地区一般需要休耕 一个生长周期 再继续种植。当地通常采用毁林开荒的办法来延续种植,极大地破坏了森林资源, 且原有地没有得到充分利用。据调查峨眉山龙池地区一直有栽培黄连的历史,当 地药农通常采收黄连后将土地闲置几年再继续种植,后经本院学者在原有的土地 1成都中医药大学 2006级硕士学位论文 上从天全引种川牛膝才将其充分利用,经长期研究,川牛膝和黄连轮作在该地区 已获得成功,但没有对轮作过程进行系统研究,本课题在总结前人的经验和数据 的基础上,建立二者轮作规范化种植规程(SOP),规范栽培过程中各环节的操 作,保证和稳定两药材的产量和质量。川牛膝中多糖含量高达 45%左右,并且有 文献报导川牛膝中多糖具有明显的免疫活性、抗肿瘤和抗病毒作用,在天然药物 和天然药物保健品研究日益深入的趋势下,川牛膝多糖的研究具有广泛的应用前 景以及较强的市场价值。因此,本论文开展了川牛膝多糖的提取分离技术研究, 不仅建立了川牛膝多糖含量测定的方法,还对川牛膝多糖进行了分离和结构研 究,为川牛膝药材的质量评价和研究开发提供实验基础。2成都中医药大学 2006级硕士学位论文 第二部份:文献综述 2.1 本草考证 川牛膝始见于唐?蔺道人《仙授理伤续断秘方》。书中大活血丹、活血丹与 乌龙三方均有“川牛膝”。宋?杨士瀛《直指方》云:“小便淋痛,或尿痛,或 沙石胀痛,用川牛膝„„。”,明清以来的古代本草已经有记载,川产的牛膝在 性味、功效上都有别于怀庆产者,明?缪希雍《神农本草经疏》谓:“怀庆产者, 补益功多,四川产者,下行祛湿,在用者之运筹耳。”清?张璐《本经逢原》亦 云:“哭酸平无毒,怀庆者长而无旁须,水道渗涩者宜之。川产者细而微黑,精 气不固者宜之。”清?黄宫绣《本经求真》:“牛膝„„出于川者,气味性质虽 与续断相似„„怀牛膝较川牛膝微觉有别。牛膝出西川及怀庆府,长大肥润者 良。”自明清以来,本草对川牛膝的叙述颇多,但描述大都比较粗略,且图例较 少,无法确定其原植物。清朝咸丰八年《四川天全州志》中有记载,天全牛膝栽 培历史悠久,因其品质好、质量优而驰名中外。目前,在四川省雅安市天全县建 ~ [1 5] 有川牛膝 GAP示范基地。 《中国药典》1963 年版川牛膝项下收载的品种为头序杯苋 Cyathulacapitata (Wall.) Moq.或毛杯苋 C. tomentosa Moq.1977年以后的各版《中 国药典》才将川牛膝重新收载修订为 Cyathula officinalis Kuan.这个种。但至 今,同属植物 Cyathula capitata(Wall.)Moq.的根在四川、云南、贵州等省的 部分地区还以川牛膝入药,但非正品。 2.2 连作障碍研究进展 目前,栽培的大多数中药都忌“连作”,川产药材中的黄连、川牛膝、川明 参、丹参等均忌“连作”,由此导致药材产量不足、品质下降、土地资源不能充 分利用等问题,严重阻碍了中药材的发展。因此,加强连作障碍的研究是急需解 决的问题。1983年日本学者泷岛将产生连作障碍的原因归纳为五大因子:? 土 壤养分亏缺,? 土壤反应异常,? 土壤理化性状恶化,? 来自植物的有害物 [6] 质,? 土壤微生物变化 。其中自毒作用是连作障碍的重要因素,尤其根类药 3成都中医药大学 2006级硕士学位论文 [7] 用植物的连作障碍更为突出 。目前解决连作障碍的报道主要集中在农作物方 面,中药连作障碍的研究非常少,例如孙富林等做了地黄连作障碍主要因子关系 [8] [9] 分析 、陈慧等做了地黄连作对土壤微生物的影响 、李振方等做了怀牛膝连作 [10] 促进效应及其分子机理研究 ,但多集中在机理性研究;也有学者对中药材连 作障碍提出了一些解决办法,例如田义新等做了老参地再利用研 究?参参轮作 [11] [12] 、赵杨景等做了西洋参与紫苏、薏苡轮作效应的研究 、刘红彦等做了地黄 连作障碍因素及解除措施研究表明在地黄重茬土高温处理加入活性炭、抗坏血酸 [13] 处理,可有效的解决地黄连作障碍 。轮作是指在同一块耕地上将不同类型的 [14] 作物按一定顺序在一定年限内循环种植 ,是目前解决连作障碍的一个快速、 简单、有效的办法,药农容易接受,推广相对比较容易。 2.3栽培技术研究 川牛膝在 1200~2400m 地区能够生长,以 1500~1800m 生长最好,在向阳 的地块生长良好,主根肥大,品质坚实,产量高;在阴蔽的地块上生长根含水多, 产量低。其栽培技术主要为: (1)选地与整地:以土层深厚,富含腐殖质,湿润 而排水良好。土质肥沃的土壤,耕层不得浅于 30cm,不宜连作。 (2)繁殖方法: 通常选用种子繁殖,播种前应测定种子发芽率,以确定播种量。一是采用传统的 “火试法”,将种子投入火中,有爆炸声者为具有正常发芽能力的种子,无爆炸 声者为丧失生活力的种子;二是采用现代的培养箱发芽试验测定。每亩用种量为 500~750g。一般以清明、谷雨前后(整地后约 10天)播种为宜。 (3)田间管理: 每次中耕除草,应结合追肥。每年第一次和第二次在中耕后追肥,每亩施人畜粪 水 1500~2000kg,亦可用腐熟饼肥 50~100 kg或尿素 3~4 kg兑水 1000~1500 千克。最后一次在 8月中耕前施肥,施人畜粪和草木灰,施后培土。 (4)采收加 工:播种后 3~4 年的 10 至 11 月收获,用长锄挖起,抖去泥土,将鲜根砍去芦 [15] 头,剪去须根,用小刀削下侧根,使主根、侧根均成单支。 黄连一般生长在海拔1500~1800 m的高寒山区, 喜阴凉爽的气侯。冬季在零 下8 ?以上能正常越冬。正因其特殊的生长环境, 在栽培管理上尤其讲究其科学 性。 1 选地整地: 选取土壤肥沃、腐殖质深厚、排水良好的土壤。 2 繁殖方 法: 黄连用种子繁殖和插扦繁殖, 生产上多用种子繁殖。5 月上旬种子成熟后立 4成都中医药大学 2006级硕士学位论文 即采收, 种子用砂埋法处理到11 月份种子开始裂口, 即可播种。 3 搭荫棚: 黄 连幼苗怕日晒, 必须搭棚遮荫。高度70~80cm 即可。 4 播种育苗: 10~11 月 份经砂埋的种子开口后即可播种。 5 苗田管理: 黄连幼苗生长缓慢, 要及时除 掉杂草, 追施速效氮肥, 5 月下旬可出三片小叶, 到第三年可出圃移栽。 6采收 加工: 黄连移栽5 年后方可收获, 是生长年限较长的药用植物,最适宜的收获期 [16] 是10 月上旬和11 月上旬上冻前。综上所述:川牛膝和黄连生长的农业生态环境相似,都生长在海拔较高的山 区,以土层深厚,富含腐殖质、排水良好的土壤生长良好;且二者所需土地均来 源于伐林开荒。为了达到节约土地的目的,研究其二者的轮作协同性便是本课题 立意所在。经前期在四川峨眉地区大田栽培试验,后作黄连在川牛膝采收后需搭 荫棚减弱日照强度,随着黄连生长逐年调节遮阴面积和厚度来调控荫蔽度以适应 黄连生长过程中对光照的需求,结果显示经过搭棚处理后黄连长势良好、病虫害 较少。 2.4川牛膝多糖的研究进展 2.4.1 川牛膝多糖免疫活性 李祖伦,石圣洪等研究了川牛膝多糖对小鼠 RES吞噬功能、PFC反应能力、 淋巴细胞转化及 NK 细胞杀伤活性的影响,结果表明,川牛膝多糖能增强小鼠 REC 吞噬功能及 PFC 反应能力,能提高 NK 细胞杀伤活性,但对小鼠淋巴细胞 [17] 转化率无显著影响 。 2.4.2 川牛膝多糖抗肿瘤作用陈红,刘友平,宋军,李祖伦等研究了川牛膝多糖对小鼠肉瘤S 、小鼠 180 肝癌H 的抑制作用以及对环磷酰胺Cy所致正常及荷瘤小鼠外周白细胞减少 22 的影响。结果表明:川牛膝多糖对小鼠肉瘤S 的抑制率为 10.00%~48.08%;对 180 小鼠肝癌H 的抑制率为 21.99%~42.21%;对环磷酰胺Cy所致正常或荷瘤小鼠 22 外周血白细胞减少有极显著的回升作用,说明川牛膝多糖不仅有抗肿瘤作用,还能 [18、19] 减轻 Cy所致外周白细胞减少 。 2.4.3 抗病毒作用5成都中医药大学 2006级硕士学位论文刘颖华,何开泽等研究了川牛膝多糖硫酸酯的体外抗单纯疱疹病毒 2 型活 性,结果显示川牛膝多糖本身无抗病毒活性,硫酸化后有抑制乙肝病毒 HbsAg、 [20] HbeAg 的单纯疱疹病毒的活性 。 2.5多糖研究对川牛膝质量控制的重要性 随着科学技术的发展和人民生活水平的提高,人们对医疗保健品的追求越来 越趋向回归自然。天然药物和天然营养保健品的研究开发已为国内外有关专家所 , [21 22] 重视 。根据中医理论和药学研究,许多生物活性物质对人类的健康具有重 要意义,它们能提高机体的免疫力,使失去平衡的机体恢复正常,从而起到保健 或对某些疾病的治疗作用。天然多糖就是众多具有重要生物活性物质中的一类, 它具有多方面的生物活性和保健功能,可作为各种药物和保健品的有效成分,对 于预防和治疗包括癌症在内的许多种疾病都具有巨大的潜力,所以关于多糖的提 取工艺、结构性质和药理作用越来越引起国内外学者的广泛关注,也取得了巨大 ~ [23 25] 的进展 。 将多糖作为药物研究始于 1943 年,但作为广谱免疫促进剂而引起人们的兴 趣是在六十年代以后。现在越来越多的研究表明,多糖的药理作用主要有: :? 抗肿瘤作用,?免疫调节作用,?延缓衰老作用,?抗病毒作用, ?抗辐射作用, ~ [26 32] ?降血糖、血脂作用等 。而且多糖作为药物对人体的毒副作用极小,有很 多动植物多糖的药理作用有待发现,因此多糖有着广泛的开发利用前景。 我们从不同产地采集的川牛膝药材,采用蒽酮硫酸法进行多糖的含量测定, 研究结果表明,川牛膝多糖占药材总量约 45%,为川牛膝药材的主要活性成分, 且有研究证明其具有明显免疫活性、抗肿瘤和抗病毒的作用。从中药整体质量控 制的角度来看,川牛膝药材中多糖的含量对于控制川牛膝质量,保证其临床疗效 有着重要作用,并且可以作为川牛膝轮作研究的有效评价手段。此外,川牛膝多 糖分离和结构鉴定对于系统研究川牛膝多糖药理活性有重要意义,为研究川牛膝 药理活性成分提供物质基础和研究资料。6成都中医药大学 2006级硕士学位论文 《中国药典》 (2005年版一部)川牛膝项下收载的有性状和显微 鉴别,检查 项下收载有水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的规定,在含量测定上未做相 关规定,川牛膝多糖含量测定方法可填补此空白,为全面控制川牛膝药材质量提 供有效的检测手段。 7成都中医药大学 2006级硕士学位论文 第三部分:川牛膝与黄连轮作规范化种植规 程(SOP)研究?前作川牛膝部分 [33] 3.1 种植基地的自然条件 产地的地形地貌、气候土壤条件对中药材的质量有重要影响。根据国家《中 药材生产质量管理规范》(试行)对中药材产地和产地环境的要求,我们对生产 基地地理环境和自然条件进行了调查,对其空气、土壤和水质进行了检测和分析, 以确保基地生产的药材符合国家中药材生产的质量要求3.1.1 地理位置 0 0 基地选择四川峨眉山市龙池镇,东经 103 10′30〃~103 37′10〃,北纬 0 0 29 16′30〃~29 43′42〃。 3.1.2 温度 县城年平均温度为 17.2?,最高气温为 26.1?,最低气温为 6.9?。龙池基 地海拔 1300m,年平均温度在 13.1?左右。 3.1.3 降水 峨眉山属季风气候区,降水除受海路大气环流的制约外,峨眉山地形地势起 着十分重要的作用,形成地形雨水较多。夏季偏南气流带来大量水汽,雨水集中, 大雨暴雨频繁。年平均降水量 1555.4mm。年平均降水日为 185.6天。 3.1.4 日照 日照时数很少,县城年日照时数平均在 951.8小时。是全国日照时数较少的 区域之一。 3.1.5 土壤 峨眉山地质结构复杂,雨量充沛,河流纵横,生物气候植被垂直变化突出, 成土母质变化多样,区内土壤的发展变化亦具有明显的山地垂直带谱的特性。随 着海拔高度的不同存在六大类型的土壤:即黄壤、紫色土、石灰 土、黄棕壤和灰 化土。 海拔 890m~1700m,主要山地为黄壤,成土母质为三叠系的黄色砂岩和各 种杂色灰岩的坡积物,主要表现为土体中游离氧化铁被水化形成黄色和蜡黄色的 8成都中医药大学 2006级硕士学位论文 黄化过程。整个土体呈酸性,土质轻薄至轻粘,土壤肥力中等,富含有机质。 3.2 种植基地环境检测与评价 3.2.1 环境质量检查根据 2002 年 6 月 1 日起施行的《中药材生产质量管理规范(试行)》第二 章第五条:空气应符合大气环境质量二级标准;土壤应符合土壤质量二级标准; 灌溉水应符合农田灌溉水质量标准;药用动物饮用水应符合生活饮用水质量标 准。对种植基地选择了远离居民点和交通要道、周围无污染源的地段,峨眉山市 龙池为川牛膝和黄连轮作研究基地,并对大气、土壤和水质等生态环境进行了检 测。 3.2.1.1大气 根据峨眉山市环境保护监测站的监测,当地大气中的二氧化硫含量平均值为 3 3 0.004 mg/ m 二氧化氮年平均值为 0.015 mg/ m ,总悬浮微粒物和可吸入颗粒物 3 平均值为 0.103 mg/ m ,空气质量优于《环境空气质量标准》GB3095一 1996 二级标准。 3.2.1.2土壤 采用随机多点取样法,在基地实验区按照不同的朝向和坡度随机选取 10? 20个取土点,充分混合后风干,送四川省农科所检测。结果见表 3?13.2.1.3水质 在基地取水样,用无菌容器盛装,低温保存,送四川省农科所检测。结果见 表 3?2 3.2.2 检测结果与评价 3.2.2.1 土壤 9成都中医药大学 2006级硕士学位论文表 3?1 龙池基地土壤样品分析结果(mg/kg) 参考值? 项 目 检测结果 pH<6.5 pH 6.5~7.5 pH>7.5 汞 0.152 0.30 0.50 1.0 0.60 镉 0.088 0.30 0.30 砷 10.4 30 25 20 50 100 100 铜 28.0 铅 38.7 250 300 350 铬 83.4 250 300 350 六六六 未检出 0.50 0.50 0.50 滴滴涕 0.0023 0.50 0.50 0.50 五氯硝基苯 未检出pH 6.0 结果:以国家《土壤环境质量标准》 (GB15618-1995)二级标准为依据,由 上表土壤样监测结果可以看出所检测的龙池土壤样品符合二级 标准的要求。 3.2.2.2灌溉水 表 3-2 龙池基地灌溉水样品分析结果mg/L 项目 检测结果 参考值? 项目 检测结果 参考值? pH值 6.81 5.5?8.5 氟化物 0.08 3.0 汞 0.0002 0.001 氰化物 0.004 0.5 镉 0.0003 0.005 硫化物 0.01 1.0 砷 0.0005 0.1 六六六 未检出 \ 铅 0.0015 0.1 DDT 未检出 \ 铜 0.0056 1.0 五氯硝基苯 未检出 \ 铬(六价) 0.003 0.1 粪大肠菌群数(个/L)6324 10000 氯化物 9.85 250 蛔虫卵数个/L) 0 210成都中医药大学 2006级硕士学位论文 结果:以国家《农田灌溉水质标准》 (GB5084-92)二级标准为依据,由检 测结果可以看出龙池地表水中各检测项目均符合其标准的要求。3.3 种质资源研究种质资源是药材生产的源头,种质的优劣对产量和质量有决定性的影响,种 质资源研究,特别是种质资源多样性研究在药用植物开发中具有重要意义。 3.3.1 资源调查 川牛膝Cyathula officinalis Kuan. 此品种为1977年版药典首载以来的历版药 典所载品种。为四川著名道地栽培药材之一。四川雅安市天全县是川牛膝的主产 区,故称“天全牛膝”,天全牛膝栽培历史悠久,早在清朝咸丰八年《天全州志》 中就有记载。当地称之为“白牛膝”、 “独根牛膝”,以根茎粗壮,质地柔润、 [34] 富油质、不易折断、断面呈菊花心、味甜而无麻味著称,为川牛膝之上品 。 天全县两路、紫石、鱼泉、大河、思经、小河乡栽培相对集中。乐山金口河、云 [35] 南、贵州施秉和关岭亦有分布,云南称甜牛膝。贵州称大牛膝 。 3.3.2 植物形态 多年生直立草本,高 40~100cm。主根长圆柱形,粗壮,直径 0.8~1.5cm, 皮近白色。茎下部呈黄白色,近圆柱形,中部近四棱形,疏被糙毛,节处略膨大。 叶对生,叶柄长 5~15mm,叶片椭圆形或长椭圆形,少数倒卵形,长 3~12cm, 宽 1.5~5.5cm,先端渐尖或尾尖,基部楔形或宽楔形,全缘,上面贴生长糙毛, 下面毛较密。复聚伞花序密集成花球团;花球团多数,直径 1~1.5cm,淡绿色, 干时近白色,在枝端花序轴上交互对生,密集或相距 2~3cm;复聚伞花序 3~6 次分歧;聚伞花序两性,花在中央,不育花在两侧;苞片卵形,长 4~5mm,光 亮,先端刺芒或钩状;不育花的花被片变成具钩的坚硬芒刺;两性 花长 3~5mm, 花被片披针形,先端尖刺头,内侧 3片较窄;花丝基部密生节状束毛,退化雄蕊 长方形,长约 0.3~0.4mm,宽约为长的 1/2,先端齿状浅裂;子房圆筒形或倒卵 形,长 1.3~1.8mm,花柱长约 1.5mm,宿存,柱头头状。胞果长椭圆形,略压 扁,淡黄色。种子椭圆形,光亮,带红色。 3.3.3 川牛膝混伪品比较11成都中医药大学 2006级硕士学位论文 四川西昌所产麻牛膝冒常充川牛膝使用,为头花杯苋Cyathula capitataWal1. Moq. 据调查,天全县在1976年为了扩大川牛膝的种植面积,在 本地品种的种子不够的情况下,从西昌调进了一批川牛膝种子,第二年才发现为 麻牛膝,尽管已经集中拔除过数次,但目前品种依然比较混乱。二者在植物形态 和药材性状上有明显区别,鉴别特征见图3?1~3?4,表3?3、3?4。 图3?1 川牛膝原植物 图3?2 麻牛膝原植物 表3?3 植物形态比较Cyathula officinalis Cyathula capitata (Wall.)Moq川牛膝 麻牛膝 Kuan 高度 cm 多年生直立草本,高 40~100cm。 多年生直立草本,高 60~140cm。 根 主根长圆柱形,粗壮,直径 0.8~ 主根呈长圆锥形或圆柱状锥形,粗壮,直 1.5cm,皮近白色。 径 0.5~2cm,皮淡红色。 茎 茎下部呈黄白色,近圆柱形,中部近 茎下部呈紫红色。 四棱形,疏被糙毛,节处略膨大。 叶片 叶片椭圆形或长椭圆形,少数倒卵 叶片倒卵形、倒卵状披针形、倒卵状椭圆 形,先端渐尖或尾尖,基部楔形或宽 形先端渐尖或尾尖,基部楔形或宽楔形, 楔形,全缘,上面贴生长糙毛,下面 全缘,上,下面毛较疏。 毛较密。 花及花 复聚伞花序密集成花球团;花球团多 复聚伞花序密集成花球团;花球团多数, 序 数,直径 1~1.5cm,淡绿色,干时近 直径 1~4cm,淡绿色,干时成黑灰色,在 12成都中医药大学 2006级硕士学位论文 白色,在枝端花序轴上交互对生,密 枝端花序轴上交互对生。 集或相距 2~3cm 雄蕊 退化雄蕊长方形,长约 0.3~0.4mm, 退化雄蕊长方形,长约 1~1.3mm,宽约为 宽约为长的 1/2,先端齿状浅裂。 长的 1/2~1/3,上部呈流苏状裂。 由表可见:川牛膝药材与麻牛膝药材在原植物形态上主要的鉴别特征为: 植 株高度;根表皮颜色;茎基部颜色和形状;叶片被毛情况;花及花序的着生方式 和雄蕊。 图 3?3 川牛膝药材图 图 3?4 麻牛膝药材图 表 3?4 药材性状特征比较 川牛膝 麻牛膝 形状 长圆柱形,微扭曲,向下稍细,有少 长圆锥形或圆柱状锥形, 数细分枝侧根 常扭曲,两端粗细相差极大 表面 表面棕黄色,具有纵皱纹,散生横向 表面深棕色,具有纵皱纹, 突起的皮孔。 皮孔较少。 断面 断面灰黄色至深棕色,浅黄色小点排 断面红棕色,浅黄色小点排列成 8~9 列成 3~9 层同心圆。 层同心圆。 质地 坚韧,不易折断。 坚韧,不易折断。 气、味 气微,味甜。 气浓,味微甜后苦涩,麻。13成都中医药大学 2006级硕士学位论文 由表可见,川牛膝药材与麻牛膝药材在性状上主要的鉴别特征为: 药材表 面颜色;断面浅黄色小点(维管束)排列成同心圆层数;药材的气味。 3.4 规范化栽培技术 3.4.1 选地与整地10~11月黄连采收后,去棚,深翻 30~40cm;经冬季休闲熟化后,次年清 明前后,再耕地一遍,拣去石块和未腐烂草根,每亩施入人畜粪水 1500~2000kg, 耙细整平,作宽 120~130cm的高畦。排水良好者可作平畦。 3.4.2 种子质量检测 在天全川牛膝基地选择生长健壮、茎粗壮,无病虫害的三年生植株作种株, 注意剔除麻牛膝。用手摘下花球团,利用苞片等具钩刺,将其捏成团,装入袋中, 或用篾片串连成团。种子的成熟标志以花球团黄褐色,胞果易搓出种子,种子硬 实,外表带红色。晒干后对种子进行千粒重和种子活力的研究,以此确定播种量。 3.4.2.1 种子千粒重 千粒重是指干燥种子一千粒的重量。随机抽取川牛膝种子1000粒,称定重量, 重复3次,取其平均值。结果见表3?5。 表 3?5 川牛膝药材种子千粒重结果 采集地 样品号 千粒重(g) 平均值(g) 1.4821 1 1.4857 1.4863 1.4911 1.4176 天全县两 2 1.4227 1.4227 路乡 1.4279 1.5062 3 1.4931 1.5033 1.5106 结果表明:川牛膝种子千粒重在 1.42~1.50g之间。根据试验结 果,我们在川 14成都中医药大学 2006级硕士学位论文 牛膝药材生产操作规程中规定了川牛膝药材的种子千粒重应不 低于 1.42g 的标 准。 3.4.2.2种子活力测试[36] 据叶冰等 的“川牛膝种子的发芽率生活力研究”结果,药农传统 上习惯 用火试法快速测定川牛膝种子的发芽力,以检测是否能用于播种及播种量,通过 “火试法”与发芽实验的对比研究,发现这一传统检测法能较真实地反映川牛膝 种子的发芽力,是生产上比较实用与可靠的快速测定发芽力的方法,可在川牛膝 的播种上推广运用。 采用传统官能鉴定法,即火试法测定川牛膝种子的生活力,取 100粒种子分 别投入火中,有爆炸声者为具有正常发芽能力的种子,无爆炸声者为丧失生活力 的种子,重复三次。结果见表 3?6。 表 3?6 川牛膝种子火试法测发芽力结果 实验次数 有爆炸声(粒) 无爆炸声(粒) 发芽力 1 35 65 35 2 33 67 33 3 34 68 34 平均数 34 66 34 结果表明:从天全川牛膝基地采集的川牛膝种子发芽力为 34%。 3.4.3 轮作对川牛膝出苗的影响 种植模式:? 轮作区(前作为黄连) ? 连作区(前作为川牛膝) ? 普通栽培区(无前作物的荒地) 据调查天全县两路乡川牛膝规范化种植基地播种期为清明、谷雨前后,在龙 池基地采用三种种植模式进行播种,播种期设置为 4 月 3 日、4 月 10 日、4 月 2 17日、4月 24日、5月 1日 5个处理,小区面积为 7.2 M (6m×1.2m)。统计出 苗时间。结果见表 3?7、3?8。15成都中医药大学 2006级硕士学位论文 表 3?7不同播种期试验结果 出苗时间(d) 播种期 轮作 连作 普通 4 月 3 日 17 17 16 4 月 10 日 15 16 14 4 月 17 日 12 14 13 4 月 24 日 10 11 12 5 月 1 日 10 9 12 表3?8 出苗时间方差分析结果 Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: 出苗时间 Type III Sum Source df Mean Square F Sigof Squares Corrected Model 86.267a 6 14.378 11.351 .002 Intercept 2613.600 1 2613.600 2063.368 .000 播种期 85.067 4 21.267 16.789 .001 种植模式 1.200 2 .600 .474 .639 Error 10.133 8 1.267 Total 2710.000 15 Corrected Total 96.400 14 a R Squared .895 Adjusted R Squared .816 结果显示:按a0.05的水准,不能认为不同种植模式出苗时间不 同,而可认 为不同播种期出苗时间不同。 结论:播种期对出苗时间的影响有显著性差异。出苗时间最短为 4 月 24 日~5月 1日,如果播种期过晚,幼苗遇高温不利于生长,在峨眉 龙池地区川牛 膝的播种时间为 4月上旬为宜。不同种植模式对川牛膝种子的出苗时间的影响没 有显著性差异,在龙池基地轮作与普通种植相比较,川牛膝出苗时间不发生变化。16成都中医药大学 2006级硕士学位论文 3.4.4 播种方法 据文献可用穴播或条播,以穴播为好,植株疏密均匀,生长发育整齐。条播 往往疏密不均,影响植株生长。穴播按行株距 30cm×20cm挖坑,亩穴数 11000, 深 3~5cm,每亩施入人畜粪水 1500~2000kg,施肥后每坑撒入拌灰粪的种子约 10粒,不覆土。 [15] 3.4.5 田间管理 3.4.5.1 间苗与补苗第一次在苗高 5~6cm时进行,穴播每穴留苗 4~6株,条播的每隔 4~5cm 留苗 1 株。第二次间苗,在苗高约 10cm 时进行,每穴留苗 3~4 株,条播的每 隔 8~10cm留苗 1株。间苗时,缺苗的应补苗,间苗可结合中耕除草进行。 3.4.5.2中耕除草和培土结合间苗和定苗中耕除草两次,中耕宜浅。苗高 3cm时,进行第一次锄草; 苗高 6cm时,可进行间苗和除草,株距 6cm;以后视杂草等情况再中耕除草 1~ 2次。封垄后不再中耕,发现大草及时拔除。 3.4.5.3拔除混杂植株若发现田间混杂有麻牛膝,要及时彻底拔除,以免产生自然杂交影响川牛膝 质量。 3.4.6 肥料试验 (1)土壤肥力诊断:分别在轮作试验区、连作试验区和普通栽培区土层深 度为 20cm处按照 S形线路采样 5个,将各土壤样品经过除去石块、树根等杂质、 风干、过筛、混匀、装瓶后,备各项目测定。测定结果见表 3?9。 表 3?9 土壤肥力检测结果 全氮 磷(速效磷) 钾(速效钾) 有机质 (g/kg) (g/kg) (mg/kg) (mg/kg) 轮作 0.78 115.19 203.76 38.98 连作 0.71 115.03 212.33 35.33 普通种植 0.76 110.45 217.40 39.6917成都中医药大学 2006级硕士学位论文 结果显示:龙池各实验区中速效磷、速效钾、有机质含量都较高,但全氮含 量较低。三种模式的实验区中,养分的含量没有明显差异。 (2)不同肥料对川牛膝生长的影响:由于龙池基地土壤中氮的含量较少, 因此需要增施氮肥。本实验在各种植模式下设置 3种肥料,分别为农家肥、尿素, 2 农家肥+尿素,对照组不施肥。每种实验区设立 3个重复,小区面积为 7.2 M(6m ×1.2m)。由于川牛膝为三年生植物,目前不能开展肥料种类对产量和有效成分 影响的研究,我们主要用施肥后植株生长高度的变化来分析不同肥料对川牛膝生 长的影响。6 月幼苗健壮时施肥,据前人研究川牛膝在栽培过程中可施农家肥 2000kg/亩或者尿素 100kg/亩,按照此施肥量,各小区肥料分别用量为:农家肥 (20kg) ,尿素(1kg)、农家肥+尿素(农家肥 10kg+尿素 0.5kg)、对照(不施肥) , 11月植株苗枯前统计增加高度。结果见表 3?10~3?13。 表 3?10 不同肥料对川牛膝植株生长高度的影响(cm) 种植模式 农家肥 尿素 农家肥+尿素 对照 轮作 4039 40 45 474545 434638 40 41 连作 3938 40 43 444344 424237 36 37 普通种植 41 40 38 46 47 44 47 45 45 42 39 40 表3?11 植株高度方差分析结果 Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: 增高 Type III Sum Source df Mean Square F Sigof Squares Corrected Model 312.791a 7 44.684 30.693 .000 Intercept 62276.194 1 62276.194 42776.198 .000 重复 3.180 2 1.590 1.092 .349 种植模式 41.364 2 20.682 14.206 .000 肥料 272.598 3 90.866 62.414 .000 Error 40.764 28 1.456 Total 63522.000 36 Corrected Total 353.556 3518成都中医药大学 2006级硕士学 位论文 a R Squared .885 Adjusted R Squared .856 结果显示:按a0.05的水准,不能认为种植模式和肥料对川牛膝 植株高度没 有影响。即种植模式和肥料对川牛膝植株生长有显著性影响。 表 3?12 种植模式多重比较结果 Pairwise Comparisons Dependent Variable: 增高 95% Confidence Interval for Mean Differencea I 种植模式 J 种植模式 Difference Std. Error Upper I-J Lower Bound Bound 轮作 连作 2.112* .499 1.090 3.133普通 -.305 .499 -1.326 .716 连作 轮作 -2.112* .499 -3.133 -1.090普通 -2.417* .493 -3.426 -1.408 普通 轮作 .305 .499 -.716 1.326连作 2.417* .493 1.408 3.426 Based on estimated marginal means * The mean difference is significant at the .05 levela Adjustment for multiple comparisons: Least Significant Difference equivalent to no adjustments 结果显示:按a0.05的水准,不能认为轮作与普通 种植下植株增加高度不同, 而可认为轮作和普通种植下都较连作植株增加的高度多。即轮作 和普通种植模式 下对植株高度的影响没有显著性差异,且植株高度的增加都较连作模式下多。19成都中医药大学 2006级硕士学位论文 表3?13 肥料种类多重比较结果 Pairwise Comparisons Dependent Variable:增高 95% Confidence Interval for Mean Differencea I 肥料种类 J肥料种类 Difference Std. Error Upper I-J Lower Bound Bound 农家肥 尿素 -5.526* .572 -6.697 -4.354农家肥+尿素 -4.957* .572 -6.128 -3.786对照 .556 .569 -.610 1.721 尿素 农家肥 5.526* .572 4.354 6.697农家肥+尿素 .569 .571 -.601 1.739对照 6.081* .572 4.910 7.252 农家肥+尿素 农家肥 4.957* .572 3.786 6.128尿素 -.569 .571 -1.739 .601对照 5.512* .572 4.341 6.683 对照 农家肥 -.556 .569 -1.721 .610尿素 -6.081* .572 -7.252 -4.910农家肥+尿素 -5.
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