临床少见致病酵母的致病力和体外药物敏感性及电泳核型的初

临床少见致病酵母的致病力和体外药物敏感性及电泳核型的初 临床少见致病酵母的致病力和体外药物敏 感性及电泳核型的初 fo0b l04 J床少见致病酵母的致病力和体外药物 敏感性及电泳核型的初步研究 皇.主生王红刘堆迭 【摘要】目的比较10种临床少见酵母致病力的大小,体外对抗真菌药物敏感性的高低以及电泳 核型的差异. 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 用经环磷酰胺和氢化可的松联合免疫抑制的小鼠为感染模型,分别用10种酵母攻 击,然后观察其存活期,并计数重要脏器中酵母的CFU;用微量稀释法测定这些酵母对氟康唑和酮康唑的 MIC值;用脉冲场凝胶电珏=技术确定这些酵母的电泳核型.结果不同酵母的致病力大小不同,但均低于 白念珠菌;对两种抗真菌药物的敏感性,不同酵母之间有差异;各酵母的染色体的大小和数目的区别则 反映了其基因型特征.结论不同的临床少见酵母其致病力,对氟康唑和酮康唑的敏感性及基因型均有 较太差异.这些资料对临床诊治这类酵母引起的条件性真菌感染可有较大帮助. 鞠盟菌 t*~"r'-d会&苗赢'蕾孤每垒liJ叻 SmdyonPathogenicity,s'n~ibmtytoAntifungalDrugsandElectrophoret~KaryetypeofUnc ommon PathogenicYeastsHUXiaol~LI卧?,WANGl-long,et.?InstituteofDermatology,Chinese AcademyMedciatSciences,UnionMadk.alColiege,Nang210042 lAbstract】 0blectiveTainvestigatethepathogenicity.susceptibilitytoantifungaldrugs,andelec- trophoretickaryotyl~ecfclinicallyuncomlllOnpathogenicyeasts.MethodsTheimmunocompromisedmice, indueadhydrocoaisoneandcyclophosphamide,werechullenbytheyeastcells,thenthelfsurvivalperiods weTeobserved.andtheCFU/mLofyeasteeIllsintheimportantintenlalorgattsWel"ecountedTheminimalin— hibitor/coneentratiotts(MICs)0ftheyeastsweredetemlinadwithmicradilutionmethod.Thegenomictotul chromosomesoftheseyeastswereseparatedbyPFGE.ResultsThepathogenicityof10yeasts.namely. Torulopsisglabrat~5porobolomycessalmonicofor,Saccharomyceseerevisiae,Cro?删 laurentii,60r卜 omyceshanseni~础 globtdar,Trk'hosporonbeigetii,Klocckem],eJTtol~&otrichuracandiduraand Rhodotortdarubra.variedandall.relessvirLdentthanthatof0afb? Thesusceptibilityoftheyeaststo twoantifungalagents.fiuconazoleandketoconazole,wasdifferentThePFGEpatternshowedthatdifierentyeasts haddifierentefoctrophoredckaryotypesThehumber鲁 ofchromosomeswere12forS.c~:r~iae.6forbeigetii. 9fornhansetdi,8forglabrata.4fortemom,7for足 rubra,5forSsa/mon/eoforand10farC.1at~entii ConduslonTheclinicallyuncommonyeast8testadyielddifferentpathogenicity,antifungalsuscepdbihtyand genotypes.Thesedatacouldbehelpfulfortheclinicaldiagnosisandtreatmentofmyctme~call8adbythe80yeasts. 1KeYwords]YeastsMicrobialsensitivitytestsGenes.fun 随着免疫受损人群的迅速扩大,条件真菌感染的 发病率在不断上升,其中由念珠菌,新生隐球菌和曲 霉引起的深部真菌病占大多数,受到广泛的重视.但 近年来有关临床少见或罕见酵母引起人类感染的报 道逐渐增多.为了临床更有效地诊治这类酵母所致的 感染,我们近期对l0种临床少见酵母的致病力,抗真 菌药物的敏感性以及电泳核型特征进行了研究. 资料与方法 1.实验菌种:红酵母(Y1),罗伦隐球菌(v2),球 作者单位:210042南京,中国医学科学院,中国协和医科大学皮肤病研 究所【胡晓莉(进修医师,安徽医科大学附属医院皮肤科),李少平(进修 医师),王红,刘雏达(指导者)l ? 论着? 拟圆酵母(Y4),柠檬型克勒克酵母(Y5),汗逊酵母 (w),酿酒酵母(Y8),光滑球拟酵母(YIO),褐色掷孢 酵母(Y12)以及作为对照的白念珠菌(Cla)均来自中 国微生物菌种保藏管理委员会医学真菌中心;白地霉 (B1)和白吉利毛孢子菌(M1)由天津长征医院真菌室 提供. 2.实验动物:普通级昆明种小鼠,8周龄,体重 l8,22g,雌雄各半.由江苏省实验动物中心提供.随 机分为l2组,每组l2只.其中11组内再分为2个小 组,6只为免疫抑制组,6只为免疫正常组.余1组6只 为健康对照组,即无免疫抑制和菌液接种,另6只为免 疫对照组,即免疫抑制后不接种菌液. 3.免疫抑制:环磷酰胺,上海华联制药有限公司 生产,批号:970450,剂量为75mg/kg;氢化可的松,扬 州制药厂生产,批号:960311,剂量为125mg/kg.2药 混合后腹腔内注射,每131次,连续3d. 4.致病力测定:各菌株在沙堡培养基斜面括化 后用无菌生理盐水制备菌悬液,用血球计数板调整菌 液浓度为1x105CFU/mL,取0.1mL于小鼠尾静脉内 注射,健康对照组则注射0.1mL生理盐水小鼠接种 后观察10d, 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 死亡13期.在免疫缺陷组,将每组第 3个死亡的小鼠解剖,取心,肝,肾脏分别整体剪碎研 细后进行琼脂板法菌落计数. 5.MIC测定:微量液基稀释法采用本室已报道的 方法和条件…,氟康唑药粉和酮康唑药粉分别由大连 辉瑞制药有限公司和南京第二制药厂提供.每株菌重 复3次,取均值. 6.电泳核型:方法见文献[2]. 结果 1.生存期长短比较:在免疫缺陷组,生存期最短 的为Y10组,平均3.17d,最长为Y1组,平均7.50d, 而Cla组则为2.50d;在免疫正常组,最短为Y12组, 6.17d.最长为Y1组,>9.67d,而Cla则为5.17d. 两组做配对t检验,P<0.01,说明临床少见酵母对 免疫受损个体的致病力显着增强.各菌种致病力大小 的比较详见 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1. 2.重要脏器中酵母的CFU计数:以心肝肾3个 脏器9个菌种CFU的均数大小排列,由小至大依次为 Y116,Y817,Y5214,Y2323,Y7486,Y12506,Y4 2069.B12733,YIO3355.M1因培养污染青霉菌而未 能计数.作为对照Cla为3840.在3个脏器中,受累最 重的是肾脏,9个菌种平均CFU为2308/mL,而肝脏 为408/mL,心脏190/mL,均显着少于肾脏. 3.对抗真菌药物的敏感性:各菌种对氟康唑和酮 康唑两药的敏感性见表1.从表中可知临床少见酵母 体外对氟康唑并不敏感甚至耐药,而对酮康唑则大多 敏感. I为酿酒酵母,2为白吉利毛孢子菌.3为汗逊酵母.4为球拟圆酵母.5 为光滑球拟酵母6为柠檬型克勒克酵母.7为红酵母.8_为念珠茼.9 为门念珠苗.【0为褐色掷孢酵母.1I为伦隐球菌 图1用脉冲电泳技术获得的临床少见酵母的电泳桩型 4.电泳核型:见图1.染色体数目最多者为酿酒 酵母,共12条,最少为柠檬型克勒克酵母,仅4条.各 菌种问带型差异很大,容易区分. 讨论 近些年来.人们不断发现以往仅寄居在人体体表 及腔口或环境中罕见致病的酵母样真菌亦可引起感 染,如红酵母,酿酒酵母可致腹膜炎,真菌血症,心内膜 炎等;白地霉(虽不属酵母,但可产生类似于毛孢子菌 的关节孢子,故也并入)可致支气管感染,毛孢子菌则 可致免疫低下患者各种机会性感染".本研究涉及 的其它6种酵母已均有致深部真菌感染的报道.实际 上由光滑球拟酵母(光滑念珠菌)引起的感染越来越 多,发病率上升很快】,酿酒酵母亦常从临辟标本中被 分离出来,这些菌已不能算是少见". 从表1中可知,临床少见酵母对免疫正常个体的 侵袭力较弱,而对免疫缺损,尤其是细胞免疫低下宿主 的致病力则大为增强(P<0.01),但仍弱于白念珠 菌.在这些受试菌种中,致病力相对较强的是光滑球 拟酵母(现多称光滑念珠菌),褐色掷孢酵母和酿酒酵 表110种临床少见致病酵母3种特性的比较 注:B1因其最大染色体3Mb,原电泳条件未获成功.表中简称YI为红酵母Y2为罗 伦隐球菌,Y4为球拟圆酵母,Y5为柠檬型克勒克酵母,Y7为汗 逊酵母,Y8为酿酒酵母,Y10为光滑球拟酵母,Y12为褐色掷孢酵母Cla为自念球 菌,B1为自地霉,Ml为白吉年叮毛孢子苗 106中华应肤科杂志2000年4月第33券第2期ChinJDerm址01.ADrll2000.Vol33.^ 母,其次为罗伦隐球菌,汉逊酵母,球拟圆酵母和白地 霉;较弱的则是柠檬型克勒克酵母,白吉利毛孢子菌 和红酵母从感染动物内脏受累的程度来看,除红酵母 CFU最小(16/mL)和光滑念珠菌最大(3355/mL),与 其致病力大小一致外,其余均不平行,说明内脏中病 原菌负荷的大小并非宿主死亡的主要原因,很可能有 独特的毒力因子在起病理作用,尚需做进一步探讨 M1C测定的结果,各菌种对氟康唑几乎均不敏 感,其MIC范围在8,64I.~g/mL之问,而作为对照的 白念珠菌其MIC值则为1~g/mL,中度敏感;但对酮 康唑,除白地霉和白吉利毛孢子菌外,其它各菌均较 敏感,M1C范围在0.125,1p,g/mL之间.这提示氟康 唑可能不适于首选治疗由临床少见酵母引起的系统 感染.光滑念珠菌本身对氟康唑不甚敏感已多见报 道,其它少见酵母对该药活性亦低也可能缘自先天耐 药,因为这些菌受到抗真菌药物的选择性压力的机会 尚很少.除光滑念珠菌和酿酒酵母外,其余临床少见 酵母的电泳核型尚未见报道.电泳核型是基因组染色 体数目和大小在DNA水平的反映,可代表酵母菌基因 型的基本特征.本研究结果显示各菌种问电泳核型差 异较大,说明其遗传背景存在较大异质性,这正与这 些菌种表型特征有显着区别相符.这些信息为进一步 深入研究其致病因子的编码基因,分离特异片段用于 分子诊断及耐药的分子机制打下了基础. 参考文献 1刘雌选,张秀丽于长平微量稀释法测定致病酵母对氟康畦敏感 性.中国人兽共患病杂志1996,12:38-40. 2刘维达郭宁如,吴绍熙.等脉冲电泳用于确定念珠菌染色体数目 和大小的研究.真菌,】996.15:65-,69 3SweetD.ReidM.DisseminatedneonatalTriehosporonbeigelilinfeeti~: Successfu]tre,altl3entthliposomalamphoterlcinBJInfeet,】998.36: 120—121 4GyaurSi~vaOH,BogomolovaTS,Gor~hkovaGZ.etalMeningitiscaused bv,EkodotondambrainanHW—itdectedpati~t.JM矗Ve时Myeol I996.34:357—359. 5Se~evilleE.Ai~lllar.GerardY.eta1Bilateralu~teralobstructiondue toSaceharom)~eerevisiaefungusballsClinInfeetg.1996.23: 63637 6VazquezJA.D~]bryLM.SanchezVHalN~omiaJCan&2/a glabratacolonization:allepidenfiologicstudyJCllnMicmbiol,1998. 36:421-426 (收稿日期:1999—04—09) 36例急性砷中毒皮炎的临床分析 赵坚许天培鲜思凯 工业生产特别是冶炼含砷矿石或处 理矿渣等,都会产生大量的砷化物长期 慢性或一次接触高浓度砷化物的粉尘或 气体,可发生中毒.某乡镇企业36名作业 工人由于在短期内接触了高浓度砷化物 的粉尘而发生了以皮肤损伤为主的毒物 性皮炎,现报道如下. 一 ,现场调查 云南某新开业的一乡镇冶炼厂,主要 从事铜的冶炼在生产过程中,把含砷的 铜矿石经过焙烧催化等提取粗铜由于收 尘装置的不完善,导致了冶炼时砷化物外 溢,从开工生产不到1个月的时间,车间空 气中白砷(三氧化二砷)的含量超过国家 最高容许浓度30倍以上. 二,临床表现 在短短的1周内,36名作业工人先后 不同程度的表现有头昏,无力睡眠差.垒 身皮肤瘙痒36例,颜面红肿15例鼻粘膜 作者单位:650216昆明市.云南省职业病防治 研究所 干燥,剌痛,鼻衄12例,I:1周,颈部,背部, 胸部,腹股沟及手背处出现丘疹,毛囊性丘 疹,疱疹及脓疱疹17例(见图1,2)少数 病例有皮肤色素沉着和减退(见图3).皮 损多发于身体的暴露部位及皮肤皱褶处 发生在I:1角四周11例,颈背部9例手背 8例,胸部7例,双下肢4例,阴囊5例. 三, 实验室 17025实验室iso17025实验室认可实验室检查项目微生物实验室标识重点实验室计划 检查 患者均做了血常规,肝功能等检查,无 异常发现.尿砷检查最低0.02mg/L,最高 23mg/L,其中24例尿砷超过正常值 0.13mg/L. 四,治疗 工厂立即停止生产,工人脱离作业场 所.采取?对症治疗,?皮损处涂抹可的 松软膏等,?驱砷治疗?中医中药.治疗 12个疗程太部分患者自觉症状明显改 善,皮损逐渐好转. {收稿13期:l999—o4_o2) ? 临床经验? 一图13急性砷中毒皮毙临睐表现