噬菌蛭弧菌的分离培养研究
噬菌蛭弧菌的分离培养研究
【关键词】 水蛭弧菌; 弧菌，副溶性; 双层培养法; 聚合酶链反应蛭弧菌(Bdellovibro，简称BD)是革兰阴性细菌，并可以通过裂解其寄生的革兰阴性细菌维持自身的生长发育[1]。目前，对蛭弧菌的研究主要集中在海水中，对淡水中的研究则很少。本实验利用普通蛋白胨培养基和营养肉汤两种培养基，采用描点法、单层培养法及双层培养法，对淡水环境中的噬菌蛭弧菌样品进行分离培养，以期找出最适合的培养方法及培养基。 1
材料
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与方法 1.1 原料 淡水样品采自阿哈湖水库，梯度稀释至10-3倍。蛋白胨培养基(Pp20)下层板(固体):1 g蛋白胨,15 g琼脂,1 L蒸馏水;Pp20上层板(半固体):1 g蛋白胨,7 g琼脂,1 L蒸馏水。营养肉汤培养基:蛋白胨5 g，牛肉浸汁3 g，蒸馏水1 L稀释500倍备用。上层胶:NB×500培养液2 ml，CaCl2?H2O 3.94 mg, MgCl2?6H2O 203.3 mg，琼脂7 g，加蒸馏水至1 000 ml，调节至pH 8.0;下层胶:NB×500培养液2 ml，CaCl2?H2O 3.94 mg, MgCl2?6H2O 203.3 mg，加蒸馏水至1 000 ml，琼脂15 g，调节至pH 8.0。宿主菌:副溶血弧菌购于中国科学院菌种保藏中心。引物:正链CAGGCCTAACACATGCAAGTC，负链 CGWCACTGAAGGGGCAA[5,7]。94 ?,4 min,94 ?,1 min,56 ?,1
min,72 ?,1 min,72 ?,5 min,4 ?,?。 1.2 方法 描点法:将宿主菌分别涂布在蛋白胨培养基(固体)和营养肉汤培养基(下层胶)上，用毛细吸管蘸一下样品，点样于在培养基不同位置。单层涂布法:将宿主与样品混合，摇匀后直接涂布在蛋白胨培养基(固体)和营养肉汤培养基(下层胶)上。双层平板培养法:首先将蛋白胨培养基(固体)和营养肉汤培养基(下层胶)倒平板、凝固，将0.5 ml宿主，5 ml样品和5 ml上层胶充分混合，倒在下层胶上。3种方法点样后30 ?培养2,3 d，观察噬菌斑的生成并计数。3种培养方法各做3份，分别编号1、2、3。 1.3 噬菌蛭弧菌的检测 收取生成的噬菌斑，用16SrRNA基因特异性探针作引物进行PCR扩增，检测所得的细菌是否噬菌蛭弧菌。
浙公网安备 33021202002483