人血清铁蛋白
概述
人血清铁蛋白储存及利用铁的蛋白质,分子量为440000.主要储存于网状内皮素系统及骨髓中。人铁蛋白微量存在于血清中,但血清中铁蛋白浓度的淡化,可以反应出人体内铁的储备状况,因而对某些血液疾病的诊断及鉴别诊断有意义。
实验原理
本试剂采用双抗体夹必酶联免疫
分析
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测定人血清中铁蛋白水平。用纯化的抗人铁蛋白抗体包被微孔板,制成固相抗体,用HRP标记纯化抗人铁蛋白抗体。在反应板中依次加入标准品或待测标本、酶标抗体,形成{抗体——抗原——酶标抗体}复合物,显色后用酶标仪在450nm波长下测定吸光度,计算样品中铁蛋白的浓度。
试剂组成
1. 包被微孔板:1块96孔(8孔×12条),用抗Ferritin体包被。
2. 标准品:7瓶,浓度为0,25,50,100,250,500,1000ng/ml。
3. 质控血清:2瓶,每瓶0.7ml浓度分别为L-I,L-II
4. 酶标记物:1瓶:10.5ml.
5. 显色A、B:各1瓶。
6. 浓缩洗涤液;1瓶,使用前用蒸馏水稀释10倍。
7. 终止液:1瓶。
8. 以上试剂均在2-8?条件下保存。
标本采集
静脉取血后分离血清或血浆,4?保存,7天内
检测
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。-20?条件下可长期保存。 操作
方法
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1. 在微孔板中加入标准品(0-1000ng/ml)各10ul,待测标本10ul。 2. 每孔分别加入酶标记物100ul。
3. 放置2-8?冰箱中低温反应30分钟后,将各孔液体弃尽,用洗液洗板5次,并拍干。 4. 每孔分别加入显色液A、B各50ul(1滴),充分混匀后,室温避光反应15分钟。 5. 每孔加入终止液50ul(1滴),充分混匀。
6. 在1小时内用450nm波长测量每孔的光度,并计算出标本浓度。
计算
1、 计算每个标准品和病人血清的平均吸光度(OD450mm)
2、 在坐标纸上以标准品吸光度对浓度(ng/mL)作图吸光度值为Y轴,浓度为X轴。 3、 根据每个标本的吸光度值在标准曲线上找出其对应的Ferritin 结果分析
正常参考值:12.3-210.1ng/ml。
用本试剂盒测定人血清铁蛋白,其值接近320ng/ml时,考虑铁蛋白升高,实际值有可能高于测出值,必要时可将标本作适当稀释后重新测量。许多恶性瘤、原发性及继发性血色素沉着病,血清铁蛋白明显升高。长期慢性感染及肾功能衰竭所致的贫血,血清铁蛋白为正常或偏听偏高。
正常参考值
成年男性:20-30ng/ml
成年女性:20-200ng/ml
成年男性或女性值在10-20ng/ml之间视为边界。
灵敏度
本试剂盒可检测到Ferritin的最低浓度为2.5ng/ml
实验限度
1、 微孔Ferritin酶联免疫系统只限于测定血清、血浆和钙化血清中的Ferritin含量。 2、 在加终止液或其他液体前,微孔中的水分需被彻底吸尽,冲洗不充分可能导致结果不一
致。
3、 本测试结果仅供于作其他诊断方法的辅助手段供医生参考。
L-I 50.0(40.0-60.0)ng/ml
L-II 250(200-300)ng/ml