【doc】氢化泼尼松注射液细菌内毒素检查法的研究

【doc】氢化泼尼松注射液细菌内毒素检查法的研究 氢化泼尼松注射液细菌内毒素检查法的研 究 中国现代药物应用2012年3月第6卷第6期 ChinJModDmgApp1.Mar2012.Vo1.6.N0.6 氢化泼尼松注射液细菌内毒素检查法的 研究 葛慧谢冬梅时荣同 【摘要】目的建立氢化泼尼松注射液细菌内毒素检查法.方法参照《中国药典)2010 版(二 部)附录XIE"细菌内毒索检查法"实验方法,通过干扰试验来确定氢化泼尼松注射 液的有效稀释倍数和 细菌内毒素检查限值.结果氢化泼尼松注射液稀释400倍对鲎试剂无干扰作用.结 论氢化泼尼松 注射液可用细菌内毒素检查法进行安全性质量检查. 【关键词】氢化松泼尼松注射液;细菌内毒素检查法;干扰试验 Studyonthebacterialendoto~dninspectionmethodofHydroprednisoneinjectionGEHui,XIEDong. mei,SHIRong-tong.CollegeofpharmacenticalsciencesZhejiangUnive~i@,Zhejiang311100,China 【Abstract】 ObjecfiveToestablishabacterialendotoxininspectionmethodofHydroprednisoneinjec— tion.MethodsThetestwascarriedoutaccordingtotheguidelineofinterferingtestandprocedurespecifiedin ChinesePharmacopeia2010.ResultsTheinterferenceelementsCanbeexcludedbydilutinglysinehydrochio- rideand~eose40Otimes.ConclusionBacterialendotoxintestcouldbeusedforHydroprednisoneinjection. 【Keywords】 Hydroprednisoneinjection;Bacterialendotoxininspectionmethod;Interferenceexperi— ment 氢化泼尼松注射液是肾上腺皮质激素类药,具有影响糖 代谢,抗炎,抗过敏,抗病毒作用常用于肾上腺皮质功能减退 症,活动性风湿病,类风湿性关节炎,全身性红斑狼疮等胶原 性疾病,严重的支气管哮喘,皮炎,过敏性疾病,急性白血病 及感染性休克等.在临床上主要与5%葡萄糖注射液配伍静 脉给药.笔者通过计算机检索,发现没有氢化泼尼松注射液 细菌内毒素检查方面的研究.为了扩大细菌内毒素检查法 的作用,同时也为了更好的控制氢化泼尼松注射液的质量, 笔者参照文献剖对氢化泼尼松注射液细菌内毒素检测方法 进行了可行性验证,现总结如下. 1仪器与试药 1.1试药氢化泼尼松注射液(江西国药有限责任公司)批 号:101123,110514,111204,规格2ml:10mg. ? 论着? 1.2试剂鲎试剂:批号110330,规格0.1ml,=0.5ELI/ ml,湛江安度斯生物有限公司;批号101217,规格0.1ml,= 0.5EU/ml湛江博康海洋生物有限公司. 细菌内毒素工作标准品:批号2009-3,效价120EU规格 1ml,中国药品生物制品检定所;细菌内毒素检查用水,以下 简称(BET),批号1107150,规格5ml/支,湛江安度斯生物 有限公司,其余实验材料均经250%烘烤1h. 1.3仪器XW一80A旋涡混旋器,上海医科大学仪器厂; HH.214电热恒温水浴锅,江苏医疗器械厂. 2方法与结果 2.1鲎试剂灵敏度复核按2010版《中国药典》(二部)细 菌内毒素检查法进行鲎试剂灵敏度复核试验,结果所用鲎试 剂灵敏度均符合 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 ,结果见 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1. 表1鲎试剂灵敏度复核试验结果 2.2细菌内毒素限值(L)的确定根据公式L:K/M_4K 为人每公斤体重每小时最大可接受的细菌内毒素剂量,以 EU/(kg.h)表示,静脉用药为K为5EU/(kg.h),M是人 用药每千克每小时最大样品剂量,以mg/(kg?h)表示,人均 体重按6O计,本品每日用量4ml,加500ml5%葡萄糖注 射液缓慢滴注,约4h滴完,其细菌内毒素限值:L=K/M=5 EU/(kg?h)/(4ml/60kgx4h)=300EU/ml. 2.3样品最大有效稀释倍数MVD的确定以鲎试剂标 作者单位:311100浙江大学药学院,杏辉天力(杭州)药业有限 公司(葛慧);安徽省蚌埠医学院第一附属医院药剂科(谢冬梅);宿 州市皖北煤电集团总医院药剂科(时荣同) 示灵敏度值为0.5EU/ml为基准,根据公式MVD=CL/k, 其中L为样品的细菌内毒素限值,C为样品溶液的浓度1.0 ml/ml,氢化泼尼松注射液的最大有效稀释倍数MVD=CL/k = 300×I/0.5=600倍. 2.4样品干扰预试验用BET水将氢化泼尼松注射液配制 100,200,400,600,800倍5个浓度梯度的溶液.另外配制与 上述相同浓度梯度的溶液,并且每个浓度梯度中均含有2h (1.0EU/m1)细菌内毒素.取鲎试剂若干支,分别加入0.1 ml的BET水溶解,再分别取0.1ml上述样品稀释溶液和2 的细菌内毒素的样品溶液制成样品反应管,同时设有阴性对 照管,在37?电热恒温水浴锅中孵育60min后观察结果. 由表2可见样品溶液稀释400倍或以上时,对以上两个厂家 的鲎试剂均未产生干扰作用,因此根据上述结果初步选定样 ? 2? 品溶液的有效稀释倍数为400倍. 中国现代药物应用2012年3月第6卷第6期 ChinJModDrugAppl,Mar2012,Vo1.6,No.6 表2样品干扰预试验结果 2.5样品干扰试验选择400倍稀释的样品为试验浓度, 用BET水将细菌内毒素工作标准品稀释成2.0,1.0,0.5, 0.25h的内毒素系列溶液.用400倍稀释的样品溶液将同一 支细菌内毒素工作标准品稀释成2.0,1.0,0.5,0.25h的供 试品系列溶液.让灵敏度为0.5EU/ml的两个不同批号的 TAL与上述两个系列的内毒素溶液反应,再用细菌内毒素检 查用水和3批400倍的样品稀释溶液各做2支阴性对照,每 平行系列浓度做4管,在37?电热恒温水浴锅中孵育60min 后观察结果.结果见表2,最大浓度2.Ok管均为阳性,最低 浓度0.25k管均为阴性,阴性对照管均为阴性,用BET水和 供试品溶液制成的内毒素溶液的反应终点浓度几何平均值 Es在2.0,0.5,Et在0.5,2.0Es范围内,说明本品在该浓 度下对两批鲎试剂均无干扰,可进行细菌内毒素检查. 表3样品干扰试验结果 2.6样品细菌内毒素检查试验取氢化泼尼松注射液3 批,将原液1;400稀释后用以上两种批号的鲎试剂,按《中国 药典))2010版(二部)附录XIE"细菌内毒素检查法"进行细 菌内毒素检查,结果3批样品的内毒素检查均符合规定,与 家兔法检查结果一致. 表4样品细菌内毒素检查结果 注:B液:样品管;PC:阳性对照管;PPC:样品阳性对照管;NC: 阴性对照管 3讨论 干扰预试验表明,样品在400倍稀释下,对细菌内毒素 检查无干扰作用.因为细菌内毒素法具有操作简单,检测周 期短,灵敏度高,结果准确等优点,因此可替代家兔法对氢化 泼尼松注射液进行安全质量检查.本文先通过干扰预试 验确定样品的有效稀释倍数,再由干扰试验进一步验证,从 而减少干扰试验的盲目性.不同厂家的鲎试剂同时进行试 验,得到了一致的结果,说明鲎试剂可以应用于氢化泼尼松 注射液的细菌内毒素检查.样品经过400倍的有效稀释,用 鲎试剂为0.5Eu/ml进行细菌内毒素检查是可行的. 参考文献 [1]腾学厚,吴克明,宋广进,等.盐酸克林霉素注射液的细菌内毒 素检查.齐鲁药事,2006,25(1):31-32. [2]罗格莲.细菌内毒素检查碳酸氢钠注射液的探讨.安徽医药, 2008,12(1):24. [3]石庆平,丁峰,郭辉.复方维生素注射液细菌内毒素检查方法 的建立.安徽医药,2006,10(1):64-65. [43国家药典委员会.中国药典(二部).北京:化学工业出版社, 2010:附录XIE99.102. [5]谢冬梅.甲钴胺注射液细菌内毒素检查法的研究.中国实用医 药,2010,5(2):69-71. [6]李薇,刘肃,何华红,等.三磷酸腺苷原料药的细菌内毒素检查 法可行性的研究.中国药房,2010,21(17):1592-4.